книги / Микробиология и биотехнология

Тема 11. МЕТОДЫ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОДЫ

Краткие теоретические сведения

Бактериологическим контролем сточных вод, прошедших биоокислитель, учитывается общее число сапрофитных бактерий в 1 мл жидкости и количество бактерий фекального происхождения группы кишечной палочки.

Подготовка к посеву

Исследуемую воду тщательно перемешивают, отбирают необходимое для разбавления количество воды. Методом разбавления готовят требуемые разведения. Для приготовления каждого разведения используют отдельную стерильную пробирку и стерильную водопроводную воду. Посев более 1 мл и менее 0,1 мл не разрешается.

Посев

Из каждой пробы исследуемой воды должно быть использовано не менее двух разведений. Для неочищенной бытовой воды, вод пищевой промышленности и других сточных вод, содержащих микрофлору, используют разведения 1:10000; 1:100000; 1:1000000. Для вод, прошедших биоокислитель (после вторичных отстойников), 1:10; 1:100; 1:1000.

Из каждого разведения рекомендуется делать посевы в 2 чашки Петри. При правильно выбранных разведениях на чашке должно вырасти не менее 30 и не более 300 колоний.

Для учета общего количества бактерий посев осуществляется на МПА, выращивание производится в термостате при температуре 20 ºС в течение 48 часов или при 37 ºС в течение 24 часов.

Бактерии группы кишечной палочки

Посев бактерий группы Coli производится в чашки, заполненные диагностической средой Эндо (фуксин-сульфитном агаре).

71

Посев на среды можно производить обычным и глубинным способом. При внесении исследуемой воды в чашку Петри пипетка не должна касаться поверхности застывшей среды. Поэтому последнюю наружную каплю снимают прикосновением пипетки к внутренней стенке чашки, а не ко дну, как это делается при посеве на питательный агар. Чашки с посевом со снятыми крышками ставят в термостат при температуре 37 ºС, где держат до полного испарения воды, после чего чашки закрывают крышками и, перевернув вверх дном, ставят снова в термостат.

Колонии выращивают при температуре 37 ºС в течение 24 часов.

Для контроля в термостат ставят чашки с одной питательной средой. По окончании выращивания производят подсчет колоний (красных с металлическим блеском, темно-красных и розовых с темным центром на среде или прозрачных неокрашенных).

Отсутствие в посевных колониях бактерий группы кишечной палочки дает окончательный отрицательный ответ.

Бактерии группы Coli характеризуются следующими признаками: морфологически – это короткие, слабоподвижные, неспороносные палочки; по Грамму красящиеся отрицательно; отношение к кислороду – аэробы или факультативные анаэробы.

Бактерии Coli вызывают брожение глюкозы и изменение реакции pH на глюкозопептонной среде.

Результаты анализа выражаются количеством клеток кишечной палочки в пересчете на 1 дм3 жидкости (коли-индекс) или наименьшим объемом воды, содержащим одну палочку Coli (коли-титр).

Учет выросших колоний производится при помощи лупы (5–6-кратного увеличения).

Форма записи результатов анализа:

72

При использовании результатов анализа цифры округляются со следующей точностью.

При числе колоний в 1 мл от 0 до 100 указывают точное их число; при числе от 101 до 1000 округляют до ближайшего десятка, от 1001 до 10000 – до ближайшей сотни, от 10001 до 100000 – до ближайшей тысячи, от 100001 до 1000000 – до ближайших десятков тысяч.

Занятие 1

Содержание. Определение общего количества бактерий в 1 мл сточной жидкости, прошедшей биоокислитель.

Задание:

1.Подготовить соответствующиеразбавления сточной воды.

2.Приготовить среду МПА.

3.Разлить среду в чашки Петри и после ее застывания посеять по одному милилитру жидкости выбранных разбавлений.

4.Поставить культуру на проращивание в термостат.

Материалы и оборудование: пробирки со стерильной во-

допроводной водой, пипетки, чашки Петри, шпатели Дригальского, штатив, сухой питательный агар, весы с разновесом, электрическая плитка, конические колбочки, шпатель, калька, сточная жидкость, прошедшая биоокислитель.

Занятие 2

Содержание. Определение наличия бактерий фекального происхождения группы кишечной палочки в сточной жидкости прошедшей биоокислитель.

Задание:

1.Подготовить соответствующие разведения.

2.Приготовить диагностическую среду Эндо.

3.Разлить среду Эндо в чашки Петри.

4.После застывания среды Эндо засеять чашки Петри исследуемой водой.

5.Поставить чашки Петри со снятыми крышками в термостат приt = 37 ºСи выдержать их до полного испарения жидкости.

73

6. Закрыть чашки Петри крышками и, перевернув вверх дном, поставить в термостат на выращивание.

Материалы и оборудование: пробирка с водой для приго-

товления разбавлений, чашка Петри, среда Эндо, весы с разновесом, электроплитка, штатив, шпатель, исследуемая вода.

Занятие 3

Содержание. Подсчет общего количества бактерий в исследуемой жидкости. Определение присутствия бактерий груп-

пы Coli.

Задание:

1.Подсчитать количество бактерий, выросших на МПА из каждого разведения.

2.Записать полученные результаты в лабораторную тетрадь.

3.Произвести подсчет специфических колоний, выросших

всреде Эндо.

4.Описать морфологические признаки выросших колоний.

5.Окрасить по Грамму выбранные колонии.

6.Сделать заключение на основании морфологических признаков и окраски по Грамму о наличии или отсутствии бактерий группы Coli.

7.При положительном заключении сделать посев из соответствующих колоний (бактериологической петлей) на глюкозопептонную среду, предварительно записав ее цвет и реакцию среды.

8.Поставить инокулированную среду в термостат.

Материалы и оборудование: чашка Петри с посевами,

микроскоп, микробиологическая петля, лупа, штатив, реактивы для окраски по Грамму, этиловый спирт, глюкозопептонная среда с поплавком, универсальный индикатор рН.

Занятие 4

Содержание. Продолжение определения наличия бактерий группы Coli в исследуемой жидкости.

74

Задание:

1.Дать окончательное заключение о наличии бактерий Coli на основании их роста на глюкозопептонной среде. Измерить рН и отметить газообразование.

2.Подсчитать Coli-титр и Coli-индекс.

3.Результаты анализа внести в таблицу. Дать заключение о присутствии или отсутствии бактерий группы Coli в исследуемой воде.

Материалы и оборудование: лупа, пробирка с посевом на глюкозопетонной среде.

Занятие 5

Содержание. Зачет.

Зачет предполагает: собеседование с каждым студентом по теоретическим основам микробиологического исследования; проверку приобретенных практических навыков и умений при работе с микроскопом, различными культурами микроорганизмов, умений использовать различные методы микробиологического анализа, микробиологический материал и оборудование.

75

Список литературы

1.Большой практикум по микробиологии / под ред. Г.Л. Селибера. – М.: Высшая школа, 1962.

2.Краткий определитель бактерий Берги. – М.: Мир, 1980.

3.Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. – М.: Мир, 1967.

4.Методы почвенной микробиологии и биохимии / под ред. Д.Г. Звячинцева. – М.: Изд-во Моск. ун-та, 1980.

5.Методы общей бактериологии: в 3 т.: пер. с англ. / под ред. Э. Герхарда и др. – М.: Мир, 1984.

6.Рекомендации по методам проведения анализов на сооружениях биохимической очистки производственных сточных вод. – М.: Изд-во литературы по строительству, 1970.

7.Руководство к практическим занятиям по микробиологии / под ред. Н.С. Егорова. – М.: Изд-во Моск. ун-та, 1983.

8.Экологическая биотехнология: пер. с англ. / под ред. К. Фостера и Д.А.Дж. Вейза. – Л.: Химия, 1990.

9.Бейли Дж, Оллис Д. Основы биохимической инженерии: пер. с англ. – М.: Мир, 1989.

76

Учебное издание

Зайцева Тамара Алексеевна, Рудакова Лариса Васильевна

МИКРОБИОЛОГИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ

Лабораторный практикум

Редактор и корректор И.А. Мангасарова

Подписано в печать 23.03.2011. Формат 90×60/16. Усл. печ. л. 5,0. Тираж 100 экз. Заказ № 47 /2011.

Издательство Пермского государственного технического университета

Адрес: 614990, г. Пермь, Комсомольский пр., 29, к. 113.

Тел.: (342) 219-80-33.