6 курс / Гастроэнтерология / Helicobacter_pylori_и_хеликобактериоз_Саторов_С_

Ген vacA (vacuolating cytotoxin А), присутствующий практически во всех штаммах H.pylori, экспрессирует вакуолизирующий цитотоксин, который представляет собой белковый агрегат массой 973 кДа. Он вызывает вакуолизацию эпителиальных клеток желудка, приводя к образованию «чашеподобных образований» на поврежденной слизистой оболочке (A.M. Mohammed, 2012; D. Basso и соавт., 2008).

Уровень секреции вакуолизирующего цитотоксина определяется мозаичной структурой гена, кодирующего VacA. Генотипы штаммов H.pylori s1m1 и s1m2 vacA имеют максимальный или средний уровень секреции цитотоксина. Генотип штаммов H.pylori s2m2 проявляет незначительную токсическую активность. Между cagA- и vacAs1-генотипами штаммов H.pylori существует строгая ассоциация – большинство vacAs1-штаммов являются cagA позитивными (Ю.В. Ляликова, 2013; B.A. Salih, 2004).

s1

s2

Рис. 16. Результаты ПЦР анализа на VacS1 и VacS2 генов

Lam T.N. и соавт., 2008; McClain M.S. и соавт., 2001; Diego D. и соавт., 1999; KimY.J. и соавт. 1999; Perez-Perez G.I. и соавт., 1999, изучая молеку-

лярно-генетические особенности штаммов H.pylori, полученных от больных

в странах Европы, Азии и США, сообщают о вариабельности гена vacA. Ими были описаны различные аллельные варианты двух вариабельных участков данного хромосомного гена. Так, vacA s регион (кодирующий сигнальный пептид) существует в виде s1 или s2 аллельных типов. В s1 типе были идентифицированы s1a, s1b и s1c субтипы. Средний m регион существует в двух аллельных вариантах – m1 или m2.

Наши исследования показали, что штаммы, циркулирующие в нашем регионе в хромосоме в большинстве случаев содержать данный ген VacА (рис. 16). Однако частота встречаемости субтипов гена vacA в хромосоме H.pylori неодинакова (рис. 17). Так, в более чем в 53 % случаев наблюдается ассоциация субтипов S1 и S2. Данные субтипы одинаково часто (по 23,1 %) выявлялись без ассоциации друг с другом.

Рис. 17. Распространенность гена vacA и его субтипов в хромосоме штаммов, полученных от больных в Таджикистане

В настоящее время ведутся активные исследования штаммов H.рylori, специфичных для развития конкретных гастродуоденальных заболеваний, ассоциированных с H.pylori (Т.В. Мишкина и соавт., 2007; И.В. Маев и соавт., 2004; Г.Ш. Исаева, и соавт., 2008). Нет единого мнения о роли различных штаммов в развитии гастродуоденальной патологии. В частности, О.А. Черновой и соавт. (2005) были предприняты попытки выявить взаимосвязь между особенностями течения ЯБЖ и ЯБДК и наличием соответствующих генотипов H.Рylori, но они оказались безуспешными.

Другие исследователи (Б.К. Нургалиева, 2005; К.Т. Момыналиев и соавт., 2004; S.Y. Kim и соавт., 2001) сообщают, что клиническое проявление и течение характера патологии ЖКТ хеликобактерной природы напрямую коррелируется с генотипической характеристикой штамма H.pylori. Установлено, что сagA-генотипы оказывают более значимое воздействие на прогноз заболевания, чем штаммы без cagA (R. Suriani и соавт, 2008; M. Rejane и соавт., 2007). Возникновение язвенной болезни двенадцатиперстной кишки значительно чаще связывается с babA2 штаммами H.pylori (M.Y. Chen и

соавт., 2013; H.G. Safaei и соавт. 2010; Y. Yamaoka, 2008).

Ген babA (blood group antigen-binding adhesin) является медиатором ад-

гезии H. pylori с системой антигенов Lewis (Le) на эпителиальных клетках желудка (B.J. Appelmelk, at al., 2000). In vitro было показано, что H.pylori

специфически связывается с поверхностью клеток слизистой желудка и регулируется фукосилированными антигенами этой группы (O. Monica, M. Armelle, 2013; J.H. Vande Bovenkamp, at al., 2003; H. Nordman, at al., 2002).

Прикрепление H.pylori к поверхности слизистых клеток желудка у трансгенных мышей вызывает развитие хронических гастритов и атрофий. Ген, кодирующий белок BabA, был клонирован и идентифицирован как babA2. Адгезия H.pylori, как полагают, служит для защиты бактерии от кислой среды желудка, а также от ее возможного смещения (перемещения) вследствие перистальтики (R. Roland at al., 2002; T. Tohru at al., 2002; I. Dag at al., 1998).

Анализируя данные научной литературы (Y. Yamaoka, и соавт, 1999;

Y.E. Liu и соавт., 2008; H. Anderson et al., 2002; B.M. Khansa и соавт., 2002),

посвященные генотиповой характеристике H.pylori, изолированных от больных в различных странах, можно заключить, что распределение генотипов H.pyloriи связанных с ними заболеваний в разных регионах мира различаются и могут иметь этногеографические особенности (К. Momunaliev et al., 2003; H.I. Catalano et al., 2002; A. Dawn et al., 2001; T.M. Peters at al., 2001). В

частности, A. Mohammed, 2012, сообщает о клинической значимости генотипа vacAs1 и комбинации vacAs1/m1 в возникновении язвенной болезни у жителей Саудовской Аравии. В свою очередь, C.L. Perng, 2003; S.Y. Kim, 2001, сообщают о преимуществе генотипов cagA, vacA субтипов iceA1 и

babA при H.pylori-ассоциированной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки среди населения в Тайване и Корее.

Таким образом, в настоящее время нет сомнений, что H.pylori играет важную роль в возникновении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Об этом свидетельствуют и результаты эпидемиологических исследований. При ЯБДК H.pylori выявляется в 57-100 % случаев, а при ЯБЖ – в 44-96 % (B. Steffen, 2001; L.P. José и соавт., 2009).

Исходя из вышеизложенного, с целью установления генотиповой характеристики бактерий H.pylori, полученных от больных с гастродуоденальной патологией, нами были проанализированы результаты ПЦР-анализа штаммов H.pylori (табл. 11). Посредством ПЦР штаммы H. pylori были распределены и проанализированы, исходя из частоты присутствия ureB, ureC, cagA, cagH, vacS1 и vacS2 генов в хромосомной ДНК.

Результаты молекулярно-генетического анализа позволили штаммы H.pylori, циркулирующие в Республике Таджикистан, распределить на 16 генотипов, из которых 15 генотипов представляли сочетание генов: ureB, ureC, cagA, cagH, vacS1 и vacS2 и 1 генотип был с одним из проанализированных в хромосоме геном – ureC. При этом всего в 3-х образцах биопсии они характеризовались как генотип с присутствием в хромосоме всех шести проанализи-

рованных генов: ureB, ureC, cagA, cagH, vacS1 и vacS2. Штаммов H.pylori, ха-

рактеризовавшихся как генотипы из сочетания 5 генов в хромосоме, было 3, причѐм в различных комбинациях. Это генотипы: 1) ureB, ureC, cagA, cagH, vacS1; 2) ureB, ureC, cagH, vac S2, vacS1 и 3) ureB, ureC, cagA, cagH, vacS2.

Следует отметить, что наиболее часто встречаемым генотипом (12 штаммов) среди исследованных культур являлся генотип из комбинации 4-х генов. При этом в 9 случаях встречался генотип из комбинации генов – ureB, ureC, cagA, cagH, в 2-х случаях генотип из комбинации генов – ureC, cagH, vacS1, vacS2 и в одном случае генотип из сочетания генов – ureB, ureC, cagA, vacS2. Второе место занимали генотипы из комбинации 3-х генов (9 штаммов): 1) генотип – ureB, ureC, cagH – 3 штамма; 2) генотип – ureC, cagA, cagH – 3 штамма; 3) генотип – ureC, cagA, vacS1 – один штамм, 4) ге-

нотип – ureC, vacS, vacS2 – один штамм; 5) генотип – ureB, ureC, cagH, так же один штамм. Одинаково часто встречались H.pylori с генотипами из комбинации 2-х генов и с наличием одного гена (ureC) – всего по 6 биоптатов.

В нашей коллекции имелось всего 3 биопсийных образца от больных с ЯБЖ (табл. 13). Хотя такое количество материала не позволяет констатировать значение какого-либо генотипа при ЯБЖ, следует отметить, что все три генотипа в хромосоме имели основные гены патогенности: или cag или vac гены. При этом в одном случае был обнаружен генотип из комбинации всех

6 проанализрованных в работе генов: ureB, ureC, cagA, cagH, vacS1, vacS2.

В остальных двух случаях были обнаружены генотипы, содержащие в два раза меньшее количество генов: ureC, cagA, cagH и ureC, cagA, vacS1,

но также с наличием основных генов патогенности в хромосоме. В целом штаммы H.pylori, которые одновременно в хромосоме содержали cag и vac гены, т.е. vacA+ и cagA+ генотип составили 33,3 % (13 из 39).

На сегодня этиологическая роль Н.ру1оri в развитии хронического гастрита больше не является предметом дискуссии (L.Y. Yeh, 2009; T. Vorobjova, 2008). Согласно Сиднейской классификации 1990 г. среди других этиологических форм гастрита различают гастрит, ассоциированный с Н.руlоri.

Вопрос о взаимосвязи Н.pylori и рефлюкс эзофагитов остается дискуссионным. В литературе имеются данные о взаимосвязи Н.pylori-инфекции с тяжестью эзофагитов, как у детей, так и, у взрослых ( M.N. Tanko, 2008; B. Delaney, 2005; S. Schreiber, 2004). По данным исследователей из различных стран мира (Л.И. Аруин, 2009; P. Robert и соавт., 2013; W. Bartnik, 2008; R.M. Peek, 2006; F.S. Lehmann, 2002), H.pylori оказывает протективное воз-

действие на болезнь гастроэзофагеального рефлюкса. Другие исследователи

(W.H. Wang, 2004; S. Hidekazu, 2000; J. Misiewicz, 1990) сообщают, что после эрадикации H.pylori у пациентов уменьшается количество случаев гастроэзофагеального рефлюкса.

Установлено, что H.pylori принимает участие не только в образовании дефектов слизистой оболочки, но и воздействует на все стадии репаративной регенерации, т.е. задерживает заживление язв, являясь главной причиной рецидивов. Бактерии Н.pylori стимулируют апоптозы, тем самым усиливают гибель клеток по краям язв, что и затрудняет их заживление. Здесь большая роль принадлежит cagA цитотоксину, который приостанавливает пролиферацию эпителия [65, 111].

По данным Ю.В. Ляликовой, 2013; Т.В. Мишкиной, 2007; G.S. Hajieh и соавт., 2008; C.L. Perng и соавт., 2003, как при ЯБЖ и ЯБДК, гастродуодениты значительно чаще были ассоциированы с vacA и cagA генотипами Н.pylori.

В наших исследованиях при хроническом гастродуодените (табл. 14) были обнаружены 7 генотипов из различной комбинации проанализированных в работе хромосомных генов. Однако при рефлюкс-гастрите, в отличие от ЯБДК и ЯБЖ, генотип из вариации 6 хромосомных генов не обнаружен. В то же время все генотипы характеризовались наличием генов, кодирующих тот или иной фактор патогенности, за исключением одного материала биопсии, который характеризовался содержанием только ureC гена в хромосоме.

Особый интерес представляют результаты генотипирования H.pylori, полученных от больных с различными клиническими формами гастрита, в частности, обнаруженных в биопсийном материале при рефлюкс-гастрите и хроническом поверхностном гастрите. Исследования показали, что у культу-

ры H.pylori, полученной при данной патологии, генотипы из комбинации 6 и 5 генов не выявлены. Кроме того, эти культуры H.pylori, как и при ЯБДК, ЯБЖ и хроническом гастродуодените, характеризовались наличием в хромосоме генов, кодирующих основные факторы патогенности (cag или vac гены). Так, в биопсийных материалах больных с диагнозом рефлюкс-гастрит (табл. 15) были обнаружены генотипы из комбинации 4-х генов (2 изолята) и генотип, характеризующийся наличием в хромосоме только 2-х генов (4 изолята).

Таблица 15

Распределение генотипов при рефлюкс-гастрите

Частота встречаемости различных генотипов H.pylori при хроническом поверхностном гастрите также не носит значимого характера, так как в нашей коллекции имелось только 4 биопсийных материала, взятых от таковых больных. В то же время, исходя из данных, представленных в таблице 16, можно предположить, что при хроническом поверхностном гастрите, как и при ЯБДК, ЯБЖ, хроническом гастродуодените и рефлюкс-гастрите принимают участие генотипы H.pylori, содержащие в хромосоме от 2-х до 4-х генов и генотип только с одним из проанализированных генов в хромосоме (ureC).

Таблица 16

Распределение генотипов при хроническом поверхностном гастрите

В своей коллекции мы имели биопсийный материал, полученный от больных, проживающих в 4-х регионах Республике Таджикистан. Поэтому