5 курс / Инфекционные болезни / Доп. материалы / Сибирская язва
.pdf31
Приложение 2.
Питательные среды, применяемые для выделения и идентификации возбудителя сибирской язвы
1. Дифференциально-диагностическая среда. Навеску сухой питательной среды для культивирования и выделения сибиреязвенного микроба, указанную на этикетке, расплавляют в 1 л дистиллированной воды на водяной бане при помешивании, фильтруют в расплавленном виде через ватно-марлевый фильтр, разливают в бутылки, стерилизуют в автоклаве при 121° С в течение 30 мин. Перед розливом в чашки Петри в остуженную до 45-50° С среду добавляют раствор фенолфталеинфосфата натрия, предварительно прогретого при 56° С в течение 20 мин, в конечной концентрации 0,01 %. После перемешивания среду разливают в чашки Петри и подсушивают в течение 1,5 часа с открытыми чашками. Чашки с агаром можно хранить в условиях холодильника 2-3 суток.
2. 1 % содовый агар. Предварительно готовят 10 % раствор NaHCO. Для этого 10 г пищевой соды растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды при легком подогревании на пламени спиртовки. Затем в 100 мл расплавленного и остуженного до 50° С агара Хоттингера добавляют 10 мл 10 % раствора соды. Среда будет лучше, если дополнительно добавить, помимо соды, 10 % инактивированной лошадиной сыворотки (при 56° С - 30 мин). После розлива в чашки Петри и подсыхания агар можно использовать для посевов. Хранить агар не следует.
3.Среда ГКИ. Среда ГКИ (Государственный контрольный институт им. Л.А. Тарасевича) состоит из 60 мл раствора Хенкса и 40 мл бычьей (лошадиной) сыворотки, инактивированной при 56° С в течение 30 мин. Компоненты тщательно перемешивают, доводят бикарбонатом натрия рН до 7,2. Полученную среду стерильно разливают в пробирки по 2 мл и закрывают стерильными резиновыми пробками. Среда может храниться при 4° С длительное время.
4.Кровяной агар. У барана из яремной вены кровь стерильно забирают в дефибринатор (флакон со стеклянными бусами) при постоянном его круговом покачивании. После окончательного формирования на бусах плотного сгустка фибрина (15-20 мин) кровь фильтруют через стерильную марлевую
салфетку. Дефибринированную кровь добавляют |
в количестве |
3-5 % в |
||
расплавленный и остуженный до 45° С агар |
Хоттингера, который |
сразу же |
||
разливают в чашки Петри. |
|
|
|
|
5. Жидкая желточная среда Дрожжевкиной. Состоит из |
1 |
части |
||
куриного желтка и 9 частей 0,9 % раствора |
хлорида натрия. Приготовление и |
|||
розлив производят стерильно без последующей стерилизации. Помещают на 2 суток при 37° С для проверки на стерильность.
32
Приложение 3
Иммунобиологические препараты для диагностики, профилактики и лечения сибирской язвы
1.Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка для постановки реакции термопреципитации по Асколи. Получают из крови кроликов, гипериммунизированных убитой культурой (или вакциной СТИ), или из крови лошадей, гипериммунизированных смесью штаммов живой слабовирулентной культуры сибиреязвенного микроба.
2.Антраксин – аллерген для постановки кожно-аллергических проб при диагностике сибирской язвы и при оценке напряженности противосибиреязвенного иммунитета. Получают путем гидролиза клеток акапсулированного штамма СТИ-1 или капсулообразующего штамма 71/12. Бактериальную массу получают путем глубинного культивирования клеток. Гидролизат бактериальных клеток фильтруют или центрифугируют и стабилизируют методом лиофильного высушивания.
3.Сибиреязвенная живая сухая вакцина СТИ – лиофилизированные живые споры вакцинного штамма СТИ-1. Выпускается в ампулах по 1 мл (10 человеко-доз для накожного применения и 100 человеко-доз для подкожного применения). Перед использованием растворяется в 30%-ном водном растворе глицерина. Вакцина предназначена для специфической профилактики сибирской язвы у людей. Применяется накожным и подкожным способами. Первичная иммунизация –
двукратно с интервалом в 21 день, ревакцинация – через год однократно. Накожная прививочная доза должна содержать 4-5х108 живых спор. Подкожная прививочная доза должна содержать 4-5х107 живых спор. Местные прививочные реакции проявляются в виде гиперемии, инфильтрата, мелких узелков через 24-48 часов. Общая реакция проявляется в виде недомогания, головной боли, повышения температуры в первые сутки. Срок годности вакцины 3 года.
4.Сибиреязвенная химическая вакцина – лиофильно высушенный протективный антиген штамма СТИ-1, сорбированный на геле гидроокиси алюминия. Вакцина предназначена для специфической профилактики сибирской язвы по эпидемиологическим показаниям.
5.Вакцина сибиреязвенная комбинированная предназначена для специфической профилактики сибирской язвы по эпидемиологическим показаниям. Вакцина содержит споры бескапсульного штамма СТИ-1 и протективный антиген сибиреязвенного микроба, сорбированный на геле гидроокиси алюминия. В одной прививочной дозе содержится 40-60 млн. живых спор штамма СТИ-1, 30-40 ИД50 протективного антигена и не более 2,5 мг геля гидроокиси алюминия. Прививочная доза – 0,5 мл. Первичная иммунизация проводится один раз в год подкожно.
6.Противосибиреязвенный иммуноглобулин – глобулиновые фракции сыворотки крови лошадей, иммунизированных сорбированным протективным антигеном или спорами штаммов СТИ-1 и Ихтиман. Выпускается во флаконах по 20 мл и представляет собой жидкость бело-сероватого цвета. Применяется для
экстренной профилактики и лечения сибирской язвы у людей. Препарат вводится внутримышечно в подогретом (37ОС) виде. Лечебная доза составляет 30-50 мл. Для экстренной профилактики взрослым вводится 20-25 мл, детям – 5-8 мл. Перед
введением обязательно проводят внутрикожную пробу для выявления
33
чувствительности к чужеродному белку. Возможны реакции на введение глобулина: повышение температуры, озноб, судороги, появление сыпи. Срок годности препарата - 2 года.
34
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите возбудителя сибирской язвы.
2. Какую форму имеют клетки сибиреязвенного микроба? 3. Как по Граму окрашивается возбудитель сибирской язвы?
4.В какой форме существует возбудитель сибирской язвы в организме больного?
5.В какой форме существует возбудитель сибирской язвы в почве?
6. Обладает ли возбудитель сибирской язвы подвижностью?
7. Каким методом выявляется подвижность бактерий?
8. Образует ли возбудитель сибирской язвы споры?
9. Каким методом окрашивают препараты для выявления спор?
10. Образует ли возбудитель сибирской язвы капсулу?
11. Как выявляется капсула у сибиреязвенного микроба?
12. Какие питательные среды используют для выращивания сибиреязвенного микроба?
13.Опишите характер роста сибиреязвенного микроба на плотных питательных средах.
14.Опишите характер роста сибиреязвенного микроба в жидких питательных
средах.
15.Назовите основные факторы патогенности сибиреязвенного микроба.
16.Какую роль выполняют в клетках сибиреязвенного микроба плазмиды?
17.Назовите источник инфекции при сибирской язве.
18.Назовите пути заражения человека сибирской язвой.
19.Назовите средства специфической профилактики сибирской язвы.
20.Какие средства используются для лечения сибирской язвы?