2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / основы_частной_микробиологии_методичка
.pdfболее 100 000 бактерий в 1 мл, поэтому часто используют различные методы обогащения;
•бактериологическое исследование с использованием для выделения чистой культуры бактерий яичной среды Ле- венштейна–Йенсена (рекомендация ВОЗ). Чувствительность этого метода – 20–100 бактерий в 1 мл исследуемого материала. Недостатком его является необходимость длительного выдерживания посевов в термостате (не менее 3–8 нед.) при 37°С. Метод используется также для определения чувствительности выделенных бактерий к антибиотикам. К ускоренному методу выделения возбудителей относится метод микрокультур Прайса на предметном стекле. Через 3–4 дня культивирования в среде с цитратной кровью на поверхности стекла вырастают микроколонии, выявляемые при окраске по методу ЦиляНильсена. Высокий уровень бактериологической диагностики достигнут при использовании полуавтоматической системы BACTEC 460 и полностью автоматизированной системы BACTEC MGIT 960 для выращивания и идентификации микобактерий;
•биологический метод на морских свинках, который считается «золотым стандартом» в диагностике туберкулеза. Минимальное количество бактерий, при котором проба становится положительной, составляет 5 бактерий в 1 мл материала;
•аллергическая проба Манту с туберкулином;
•серологические тесты – РСК, РНГА позволяют выявить антитела в сыворотке крови больных. Они ставятся обязательно в динамике;
•метод ПЦР позволяет проводить идентификацию микобактерий за 5–6 ч и обладает высокой специфичностью и чувствительностью (1–10 бактерий в образце).
101
Лечение и профилактика
Специфическое лечение туберкулеза проводят противотуберкулезными препаратами, к которым относятся: изониазид, рифампицин, стрептомицин, этамбутол – это препараты основной, первой группы. К препаратам резерва относят канамицин, циклосерин, фторхинолоны, ПАСК и др.
Специфическая профилактика туберкулеза проводится вакциной БЦЖ (BCG), полученной французскими учеными Кальметтом и Гереном. Вакцинацию новорожденных проводят на 4–7-й день жизни строго внутрикожно в дозе 0,05 мг. Иммунитет развивается через 1–3 мес. после вакцинации и сохраняется в течение 5–7 лет.
102
Глава 7. СПИРОХЕТОЗЫ
7.1. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИФИЛИСА
Сифилис – венерическое (лат. venus – Венера, богиня любви) антропонозное хроническое инфекционное заболевание, передающееся главным образом половым путем, протекающее с поражением различных органов и тканей и имеющее циклическое течение.
Характеристика возбудителя
Возбудителем сифилиса является спирохета Treponema pallidum (от греч. trepo – поворачивать, nemo – нить, pallidum –
бледный), обнаруженная в 1905 г. Ф. Шаудиным и Э. Гоффманом.
T. pallidum – грамотрицательные спирохеты, окрашиваются по методу Романовского–Гимзы в бледно-розовый цвет. Клетка T. pallidum имеет форму спирали с неглубокими равномерными завитками размером 0,2–0,6х4,0–18,0 мкм. Количество завитков 8–14. Концы спирали заострены. Снаружи она покрыта чехлом мукопротеидной природы, под которым находится трехслойная клеточная стенка и ЦПМ, в которую заключен цитоплазматический цилиндр, содержащий нуклеоид, рибосомы, мезосомы, различные включения. На каждом конце клетки имеются блефаропласты, к которым прикреплены 1–10 фибрилл. Они располагаются под клеточной мембраной и обеспечивают движение спирохеты. Характер движений медленный поступательный, вращательный и сгибательный. При неблагоприятных условиях трепонема может существовать в виде цист и L-форм. Цисты покрыты многослойной муциновой оболочкой и содержат свернутую в спираль клетку. Они рассматриваются как стадии покоя. Из цист и L-форм могут образовываться обычные спиралевидные формы.
103
Эти бактерии являются хемоорганотрофами, требовательны к условиям культивирования. Их выращивают в жидких средах, содержащих мозговую или почечную ткань, сыворотку кролика при 35°С и в анаэробных условиях. Время генерации 30–33 ч. Однако выращенные культуры теряют свою патогенность (культуральные трепонемы). Тканевые трепонемы, сохраняющие исходные свойства возбудителей, получают пассированием их в ткани яичек кроликов. Они способны ферментировать углеводы, продуцировать индол и сероводород, гемолизируют эритроциты человека, кролика, барана, лошади, морской свинки.
Бледная трепонема обладает слабой резистентностью
кдействию факторов внешней среды. Высокочувствительна
квысушиванию, действию высокой температуры, свету, солям ртути, висмута, мышьяку, пенициллину. Хорошо сохраняет жизнеспособность при низких температурах.
Антигенная структура сложная, связана с липопротеидами, полисахаридами и белками наружной мембраны. Имеет общие антигены с другими трепонемами. Обладает перекрестно-реагирующими антигенами, общими для человека и КРС.
Факторами патогенности являются ЛПС и белки на-
ружной мембраны, обладающие токсическими свойствами, гиалуронидаза.
Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет
Естественной средой обитания T. pallidum является организм человека. Животные не восприимчивы к этой спирохете. В лабораторных условиях удалось заразить обезьян, кроликов и хомячков.
Источником инфекции является больной человек. Все выделения от больного содержат возбудителя и поэтому за-
104
разны. Пути заражения: половой (основной), контактнобытовой, трансплацентарный.
Восприимчивость людей к бледной трепонеме очень высокая. Инфицирующая доза 10–100 клеток.
Сифилис относится к группе социальных болезней. Неблагополучные условия жизни (нищета, алкоголизм, войны и др.) способствуют быстрому и широкому распространению этой инфекции.
Возбудитель проникает в организм через поврежденные слизистые оболочки или кожу. После инкубационного периода длительностью 3–4 нед. в месте входных ворот возникает безболезненная язва с плотным инфильтратом – первичная сифилома или твердый шанкр. В воспалительный процесс вовлекаются регионарные лимфатические узлы. Это первичный период сифилиса, возникающий как результат местной сенсибилизации тканей с развитием тканевой аллергии
(ГЗТ).
Вторичный период сифилиса связан с проникновени-
ем спирохет в кровь и генерализацией процесса. Характерны лихорадка, высыпания различного типа на коже и слизистых оболочках (вторичные сифилиды), увеличение лимфоузлов, реже поражаются внутренние органы (печень, периферическая нервная система и др.). В течение инфекции отмечается чередование активных проявлений с периодами ремиссий. Общая продолжительность вторичного сифилиса 2–4 года.
В периоды первичного и вторичного сифилиса больные опасны для окружающих как источники инфекции, так как все элементы сыпи и все выделения содержат большое количество спирохет.
Третичный период характеризуется формированием инфильтратов в коже и внутренних органах, склонных к распаду (гуммы, бугорки). В таких элементах содержится мало спирохет, поэтому заразительность этого периода мала. Проникновение в мозг большого количества возбудителей при-
105
водит к глубокому повреждению ЦНС с развитием параличей.
В течение заболевания развивается нестерильный (инфекционный) иммунитет, который не обеспечивает полной гибели возбудителя и сопровождается формированием инфекционной аллергии (ГЗТ).
После освобождения организма от трепонем (в процессе лечения) иммунитет и аллергия исчезают. Возможны повторные заболевания в результате реинфекции.
Микробиологическая диагностика
Диагноз первичного сифилиса ставят на основании исследования отделяемого твердого шанкра методом темнопольной микроскопии или окраской по методу Романовско- го–Гимзы. На 3–4-й неделе после появления твердого шанкра в крови обнаруживаются антитела, и для диагностики применяются неспецифические (для выявления реагинов) и специфические серологические тесты. К неспецифическим (стандартным) методам относятся РСК с кардиолипином (реакция Вассермана) или ее модификация с постановкой на холоду (реакция Колмера), осадочные реакции (цитохолевая,
Закса–Витебского и др.), RPR (rapid plasma reagin), микроре-
акция преципитации (VDRL). Последние две относятся к экспресс-методам.
Специфическими (трепонемными) серологическими тестами являются РИТ (реакция иммобилизации трепонем), РНИФ, РСК с трепонемным антигеном, РНГА, ИФА.
ПЦР-тесты для выявления ДНК бледной трепонемы были разработаны в 1991 г. и в настоящее время активно применяются в диагностике нейросифилиса, врожденного сифилиса и др.
106
Лечение и профилактика
Для химиотерапии и химиопрофилактики используют антибиотики группы пенициллина, макролиды, цефалоспорины. После лечения пациенты находятся под наблюдением от 3 мес. до 3 лет.
Специфическая профилактика не разработана.
7.2. ВОЗБУДИТЕЛИ БОРРЕЛИОЗОВ
Общая характеристика боррелий
Боррелии – извитые бактерии размером 0,2–0,5х3– 20 мкм, образуют 3–10 неравномерных крупных витков. Активно подвижные, грамотрицательные, по Романовскому– Гимзе окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.
При электронной микроскопии виден цитоплазматический цилиндр (ЦПЦ), покрытый мембраной, в котором находятся нуклеоид, мезосомы, рибосомы, гранулы с питательными веществами. На концах его имеются базальные тела, от которых берут начало 15–20 фибрилл, обвивающих ЦПЦ. Снаружи ЦПЦ и фибриллы покрыты пенистой 3-слойной наружной оболочкой. При неблагоприятных условиях образуются цисты, внутри которых содержится свернутый ЦПЦ.
Строгие анаэробы. Культивируют на сложных питательных средах с нативным белком и кусочками органов (мозга, яичка кролика) при рН 7,2–7,4 или в курином эмбрионе. Жидкие среды заливают вазелиновым маслом для создания анаэробных условий. Оптимальная температура культивирования 28–30°С. Время генерации 12–16 ч. Рост обнаруживают на 6–8-е сут.
107
Боррелии неустойчивы во внешней среде: быстро погибают при высушивании и действии солнечного света, при нагревании (при 45–50°С через 30 мин.), при комнатной температуре жизнеспособность сохраняется до 8 сут., в цитратной крови животных выживают до 6–8 сут. Высоко-чувствительны к действию дезинфицирующих веществ. Хорошо переносят низкие температуры.
Ферментативные свойства изучены недостаточно.
Расщепляют глюкозу с образованием газа.
Антигенная структура не стабильна, легко изменяется в макроорганизме под влиянием антител и других факторов защиты.
Родовое название дано в честь французского бактериолога А. Борреля (A. Borrel), изучавшего спирохеты. В настоящее время известно более 30 видов боррелий, различающихся по степени адаптации к различным членистоногим (вшам, клещам), по географическому распространению, источнику инфекции, патогенности для лабораторных животных. Заболевания, вызываемые этими спирохетами, называются боррелиозами. Выделяют:
–антропонозный эпидемический вшивый возвратный тиф;
–зооантропонозные природно-очаговые эндемические клещевые боррелиозы, которые различаются по переносчикам и в связи с этим делятся на 2 группы: группу аргасовых клещевых возвратных тифов и группу иксодовых клещевых боррелиозов (Лайм-боррелиоз и его варианты).
7.2.1. ВОЗБУДИТЕЛЬ ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ВОЗВРАТНОГО ТИФА
Эпидемический возвратный тиф (син.: вшивый возвратный тиф, возвратная лихорадка, возвратный спирохе-
108
тоз) – острая антропонозная трансмиссивная инфекция, передается платяными и головными вшами. Протекает с чередованием периодов лихорадки и апирексии, увеличением печени и селезенки.
Возбудитель эпидемического возвратного тифа Borrelia recurrentis открыт в 1868 г. немецким исследователем О. Обермайером.
Эпидемиология, патогенез, клинические проявления, иммунитет
Источником инфекции является больной человек, в крови которого циркулируют спирохеты. Механизм передачи трансмиссивный. Переносчиками инфекции являются платяная и головная вши человека, которые становятся заразными через 5–12 дней после кровососания на больном. Описаны внутрилабораторные случаи заражения. Распространению инфекции способствуют факторы, приводящие к завшивленности населения: скученность, нищета, холод, голод, войны и другие природные катастрофы. Возвратный тиф чаще возникает зимой.
Восприимчивость людей к B. recurrentis абсолютная и всеобщая. В России эпидемический возвратный тиф ликвидирован в 1938 г.
Через поврежденную кожу (входные ворота инфекции) боррелии проникают в организм. Происходит их захват и размножение в макрофагах. Инкубационный период длится 3–14 дней. Проникновение боррелий в кровь (спирохетемия), их гибель и высвобождение эндотоксина сопровождаются поражением ЦНС и внутренних органов. Болезнь начинается с приступа лихорадки, головной боли, рвоты, болей в мышцах, увеличения селезенки, печени, слабой желтухи. Появление антител приводит к образованию сложных комплексов (боррелии + комплемент + тромбоциты + Ig), кото-
109
рые вызывают тромбозы капилляров и формирование очагов некроза в селезенке, почках, печени, легких. Окончание этого первого приступа лихорадки наступает через 6–7 дней в результате действия лизинов и фагоцитоза.
Впериод апирексии, которая продолжается 5–7 дней,
вкостном мозге и ЦНС боррелии меняют антигенную структуру, размножаются, образуя расу, с которой не взаимодействуют Ig, образовавшиеся во время 1-го приступа лихорадки.
Новая раса боррелий выходит в кровь, вызывает рецидив приступа лихорадки. Образование Ig к новой антигенной расе, лизис и фагоцитоз боррелий приводят к окончанию этого приступа лихорадки. Таких рецидивов может быть 1–5. Они продолжаются до тех пор, пока в организме не накопятся антитела ко всем антигенным расам боррелий.
Выздоровление сопровождается полной элиминацией боррелий и формированием стерильного гуморального иммунитета, обусловленного образованием агглютининов и сприрохетолизинов. Однако иммунитет не стойкий, известны повторные случаи заболевания.
Летальность в настоящее время не превышает 1%.
Микробиологическая диагностика
Используются следующие методы:
–микроскопическое исследование мазков и «толстой» капли крови, взятых в период лихорадки, окрашенных по методу Романовского–Гимзы. Обнаружение боррелий в крови является решающим в диагностике возвратного тифа;
–серологические исследования сыворотки крови в реакциях РСК, реакции иммобилизации боррелий, реакции нагрузки боррелий тромбоцитами (реакция Риккенберга– Брусина), РНИФ, ИФА и др. Однако серологические реакции не являются надежными;
110