Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Респираторная_медицина_Руководство_в_3_томах_Том_1

.pdf
Скачиваний:
1
Добавлен:
24.03.2024
Размер:
31.64 Mб
Скачать

Раздел 5

Неферментирующие грамотрицательные микроорганизмы (НФМО). Среди микроорганизмов, вызывающих инфекцию у больных МВ, значительное место занимают грамотрицательные НФМО, общими признаками которых являются природная устойчивость ко многим антибиотикам, высокая резистентность к дезинфектантам и распространение в больничных стационарах от больного к больному с помощью рук и выделений медицинского персонала. Грамотрицательные неферментирующие бактерии принадлежат к нескольким родам и условно могут быть разделены на оксидазоположительные — роды Pseudomonas, Burkholderia, Achromobacter, Moraxella, Stenotrophomonas, группу бактерий WO-1 (weak oxidizer) со слабой оксидазной активностью, группу 2 Pseudomonas-подобных бактерий и оксидазоотрицательные — род Acinetobacter, виды Chryseomonas luteola и Flavimonas oryzihabitans [17].

Синегнойная палочка. Род Pseudomonas (sensu stricto) включает 11 видов: Pseudomonas aeruginosa, P. fluorescens, P. putida, P. veronii, P. monteilii, P. stutzeri, P. mendocina, P. pseudoalcaligenes, P. alcaligenes, P. luteola, P. оryzihabitans. Для больных МВ наиболее значимым является Pseudomonas aeruginosa.

Типичные изоляты синегнойной палочки идентифицируют по таким свойствам, как пигментообразование, положительный тест на оксидазу, рост при 42 °С, характерный земляничный запах, рост на цетримидном агаре. При этом от больных МВ с хронической синегнойной инфекцией часто изолируют атипичные формы P. aeruginosa, которых трудно идентифицировать без применения молекулярно-генетических методов (ПЦР) [32].

При исследовании образцов мокроты от больных детей за 2012–2013 гг. бактерии P. aeruginosa были выделены у 51 ребенка (30,5%). При этом у 25 детей была изолирована P. aeruginosa с мукоидным фенотипом, который характерен для хронической синегнойной инфекции легких. У 10 детей выделяли мукоидный и немукоидный фенотипы одновременно. От 16 детей были идентифицированы штаммы с немукоидным фенотипом. Мукоидные штаммы при хронической инфекции резистентны к защитной системе организма и лечению антибиотиками, что обусловлено наличием таких факторов патогенности, как альгинат и рамнолипид, продукцию которых регулирует система Quorum Sensing, ответственная, кроме синтеза ряда факторов патогенности, за образование биопленки [33]. Развитию хронической синегнойной инфекции предшествует инфицирование меняющимися штаммами P. aeruginosa, при этом штаммы отличаются друг от друга. Установление хронической инфекции происходит благодаря образованию биопленок и адаптации в легких больных МВ штаммов: штаммы переходят в мукоидную форму, становятся гипермутабельными и, соответственно, резистентными к антибиотикам [34]. Поэтому дополнительными

методами исследования хронической синегнойной инфекции у больных МВ могут быть изучение способности образовать биопленку и выявление гипермутабельных штаммов.

Первичную синегнойную инфекцию можно вылечить с использованием больших доз антибиотиков в течение длительного периода времени, в связи с этим очень важно своевременно установить диагноз синегнойной инфекции. Согласно нашим исследованиям [2], в группе детей до 1 года у 19% встречается P. aeruginosa, а в возрасте 5–7 лет P. aeruginosa встречается уже у 31,2% детей. С возрастом процент высева P. aeruginosa увеличивается.

Таким образом, учитывая колонизацию дыхательных путей P. aeruginosa в раннем детском возрасте, необходимо осуществлять мониторинг микрофлоры сразу после постановки диагноза «муковисцидоз».

Achromobacter spp. — оппортунистический патоген, оксидазо- и каталазоположительный грамотрицательный НФМО. Обладает природной резистентностью ко многим антибиотикам. В последнее время хроническая инфекция легких, вызванная A. xylosoxidans и A. ruhlandii, у больных МВ встречается часто. Согласно последним данным наиболее часто выделяется A. ruhlandii, второй по частоте встречаемости A. xylosoxidans, который при исследовании образцов от больных детей за 2012–2013 гг. выделяли в 9% случаев [4].

Очень часто Achromobacter spp. ложно диагностируют как В. cepacia complex в связи с фенотипическим сходством с B. cepacia complex при культивировании на 5% кровяном агаре и ростом на BCSA — селективной для Всс среде. Для подтверждения принадлежности бактерии к видам

A.ruhlandii, A. хylosoxidans и другим необходимо использовать тест системы API 20NE (BioMerieux ) и ПЦР для выявления локуса в 16S рДНК со специфическими праймерами AX-F1 и AX-B1 [23].

Burkholderia cepacia complex (Всс). В настоящее время Всс включает 20 видов микроорганизмов:

B.cepacia, B. multivorans, B. cenocepacia, B. stabilis,

B.vietnamiensis, B. dolosa, B. ambifaria, B. pyrrocinia,

B.anthina, B. ubonensis, B. latens, B. diffusa, B. arboris,

B.seminalis, B. metallica, B. contaminans, B. lata, B. pseudomultivorans, B. stagnalis, B. territorii [35]. Точная идентификация неферментирующих грамотрицательных микроорганизмов от больных МВ является наиболее сложной задачей. Очень часто нетипичные по фенотипическим свойствам микроорганизмы ошибочно могут диагностироваться как другие виды микроорганизмов. Ложная идентификация P. aeruginosa или Bcc могут иметь нежелательные последствия, ведущие к выбору неправильной терапии и изоляции пациентов.

Например, 2 штамма атипичной P. aeruginosa и 2 штамма A. xylosoxidans были неправильно идентифицированы API 20NE как Всс, 12 штаммов Bcc биохимическими тестами (LaChema) были непра-

240

 

 

Методы обследования

вильно идентифицированы как другие НФМО.

но использовать реакцию иммунофлюоресценции

Около 3,4% штаммов биохимическими тестами

(РИФ) с моноклональными АТ [40].

не удалось идентифицировать вообще. Для окон-

Для обнаружения Legionella pneumophila непо-

чательной точной идентификации были исполь-

средственно в мокроте, ТТА, бронхиальном смы-

зованы молекулярно-генетические методы. Kiska

ве, биоптатах ткани легкого применяется реакция

et al. показали в своей работе, что точность иден-

прямой иммунофлюоресценции (РИФ), чувстви-

тификации НФМО 4 различных коммерческих

тельность которой составляет 25–66%, специфич-

тест-систем составляет 57–80%, а точность иден-

ность достигает 94% [41]. Для постановки диагно-

тификации Всс — 43–86%. При этом все тесты

за «легионеллезная пневмония» положительный

идентифицировали НФМО, не являющиеся Всс,

результат РИФ требуется подтвердить любым

как Всс [36]. Wellinghausen et al. сравнивали ре-

другим

методом: культуральным

исследованием

зультаты идентификации с помощью API 20NE

респираторных образцов, либо определением ан-

88 грамотрицательных оксидазоположительных

тигена в моче, либо серологическими реакциями

палочек с результатами секвенирования 16S rRNA.

с сывороткой крови больного.

 

Точность идентификации составляла 17%. В связи

РИФ

позволяет диагностировать инфекции,

с этим методы, основанные на ПЦР, в частности

вызванные РС-вирусом, вирусами гриппа А и В,

real-time ПЦР, могут быть незаменимыми в слож-

парагриппа, аденовирусами, вирусом кори, что

ных ситуациях.

особенно важно в случаях, когда обычная вирусо-

В последнее время для точной идентификации

логическая технология трудоемка или недоступна.

используют метод MALDI-TOF и конечно муль-

Методы выявления антигенов. Определение ан-

тилокусное секвенирование и полное секвениро-

тигенов широко используется для диагностики раз-

вание генома.

личных инфекций, что связано с возможностью

Микроскопический метод. Изучение нативных и

быстрого получения результатов и идентификации

окрашенных препаратов, в том числе с использо-

некультивируемых возбудителей. Однако для пра-

ванием меченных флюорохромом специфических

вильного диагноза недостаточно использование од-

антисывороток (антительные диагностикумы), обе-

ного метода. Надежность теста в большей степени

спечивает быструю диагностику инфекций НДП.

зависит от того, может ли возбудитель быть ком-

Под большим увеличением (иммерсионный

менсалом (как в случае с Streptococcus pneumoniae),

объектив ×100) изучают морфологию бактерий.

или его наличие всегда свидетельствует об инфек-

Чувствительность микроскопического метода при

ции (например, Legionella pneumophila) [42, 43].

окраске по Граму, по разным оценкам, варьирует

Для

индикации антигенов

Streptococcus

от 35 до 96%, а специфичность — от 12 до 85%

pneumoniae в мокроте, сыворотке крови и моче

[37]. Его диагностическое значение в основном

были разработаны методы встречного иммуно-

ограничивается пневмококковой инфекцией, где

электрофореза, коагглютинации, латекс-агглюти-

совпадение с результатами культуральной диагно-

нации, ИФА. Их чувствительность варьировала от

стики составляет 75% [38].

40 до 90% [44, 45].

 

Для выявления Mycobacterium tuberculosis ми-

При диагностике легионеллезной пневмо-

кроскопические методы при окраске мазков по

нии рекомендованы ИФА и радиоиммунологи-

Цилю–Нильсену и флюоресцентным красителем

ческий метод для выявления в моче антигенов

имеют одинаковую чувствительность (до 50%)

L. pneumophila серогруппы 1, на долю которой при-

и специфичность (до 99%) [39]. Для обнаруже-

ходится 70–90% всех наблюдений болезни легио-

ния МБТ в световом микроскопе при окраске

неров. Их чувствительность достигает 70–100%,

по Цилю–Нильсену необходимо содержание в

специфичность — больше 99% соответственно

мокроте не менее 5000–10 000 КОЕ/мл.

[46]. Разработан иммунохроматографический тест

При диагностике актиномикоза легких матери-

для определения легионеллезного антигена в моче.

алом для микроскопического исследования служат

При криптококкозе определяют наличие анти-

гной, мокрота, плевральная жидкость, пунктаты

гена Cryptococcus neoformans в БАС, плевральном

закрытых очагов поражения, биопсийный мате-

экссудате, сыворотке крови и ликворе [47], а при

риал. Обнаружение друз, мицелия, отдельных ве-

аспергиллезе используют ИФА для выявления в

точек и цепочек из спор — ценное подтверждение

сыворотке крови белкового антигена (галакто-

актиномикотической природы болезни. Прямая

маннана), превалирующего в клеточной стенке

фазово-контрастная микроскопия бронхиального

Aspergillus spp. [48]. При легочном бластомикозе

секрета со смесью 10% раствора калия гидроксида

в сыворотке крови, моче и БАС можно выявить

и 10% глицерина позволяет проводить быструю

антиген Blastomyces dermatidis у 70–100% больных

идентификацию грибов Blastomyces dermatitidis,

в зависимости от формы инфекции (локализован-

Coccidioides immitis, Cryptococcus neoformans и

ная или генерализованная) [49].

 

Aspergillus spp., добавление специальных красите-

В назофарингеальном аспирате, лаважной

лей позволяет улучшить очертания элементов гри-

жидкости и мокроте в инфицированных эпите-

ба, включая P. jiroveci. Для определения антигенов

лиальных клетках с помощью РИФ и ИФА мож-

P. jiroveci в индуцированной мокроте и БАС мож-

но быстро обнаружить антигены вирусов гриппа,

241

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Раздел 5

парагриппа, аденовирусов, ЦМВ в ранние сроки заболевания.

Диагностика микобактерий. После разжижения мокроты и центрифугирования из осадка производят высевы на яичную среду (Левенштейна– Йенсена) или агаровую основу (среда Миддлбрука 7Н10). Селективные среды содержат ингредиенты, тормозящие рост сопутствующих бактерий и грибов. Инкубацию проводят во влажной атмосфере с содержанием 8–12% диоксида углерода. Образцы можно инокулировать в жидкую среду

с14С-пальмитиновой кислотой с добавлением

или без антимикробных агентов, используя радиометрический метод и аппарат BACTEC 480TB. Чувствительность этого метода достигает 10 КОЕ/мл. Для получения роста МБТ на первичных средах требуется 3–5 нед инкубации, затем еще 1–2 нед для подтверждающего ниацинового теста и определения чувствительности к антитуберкулезным препаратам. В среднем исследование с применением радиометрического метода занимает 18 дней, обычным методом — 36 дней [50].

Диагностика аэробных актиномицетов. Аэробные патогенные актиномицеты включают роды

Nocardia, Streptomyces, Actinomadura и Rhodococcus, Micromonospora, Micropolyspora, Thermoactinomyces

и Saccharomonospora. Они вызывают пневмониты (альвеолиты) и хорошо растут (в течение 3–7 дней) на простых бактериальных и грибковых средах при 50 °С во влажной атмосфере. Однако у рода Nocardia для роста колоний может потребоваться 3 нед инкубации. Идентификацию актиномицет проводят по морфологическим признакам колоний, микроскопическому строению микроорганизмов, способности гидролизовать различные субстраты, взаимодействию чистых культур с антительными диагностикумами в серологических реакциях.

Диагностика грибов. Лабораторную диагностику пневмомикозов проводят культуральным, гистологическим и серологическими методами. Для посева используют картофельные среды, сабуродекстрозный агар, агар на сердечно-мозговой вытяжке, также селективные среды, содержащие хлорамфеникол и гентамицин, иногда с добавлением циклогексимида, подавляющего рост быстрорастущей плесени и ингибирующего C. neoformans,

Aspergillus fumigatus и некоторые виды Candida. В отличие от бактерий, которые культивируют при 35 °С, посевы грибов инкубируют при 30 °С.

Грибы рода Candida часто обнаруживают в БАС, но они редко бывают истинными возбудителями инфекций нижних дыхательных путей. При исследовании аутопсийной ткани легких гистологическое подтверждение кандидоза было выявлено лишь у 2% онкологических больных и у 0,5% пациентов без неопластических процессов. Определение кандидозного антигена непосредственно в сыворотке крови или клинических образцах мало помогает в диагностике локального

или диссеминированного кандидоза, поскольку чувствительный метод ИФА выявляет присутствие антигенов и АТ у здоровых и у 50–75% больных при диссеминированном кандидозе [40, 51].

Инвазивный легочный аспергиллез встречается чаще, чем легочный кандидоз, в 90% наблюдений выделение аспергилл из мокроты и бронхиального смыва связано с колонизацией НДП [52]. В то же время при подтвержденном инвазивном легочном аспергиллезе лишь у 10% больных из мокроты были выделены Aspergillus spp. Для правильной интерпретации результатов культуральной диагностики необходимо производить посевы двух образцов, полученных при транстрахеальной легочной биопсии и методом защищенной щеточной биопсии [53]. Для ранней диагностики инвазивного легочного аспергиллеза может быть полезным обнаружение аспергиллезного антигена в сыворотке крови методом ИФА, чувствительность которого варьирует в пределах 60–100% в разных группах больных [54].

Выделение C. neoformans из респираторного тракта следует трактовать с осторожностью, так как в половине наблюдений у пациентов отсутствуют признаки поражения паренхимы легких, рентгенологические изменения и другие симптомы заболевания. Это свидетельствует лишь о колонизации грибами [55]. Для подтверждения диагноза «криптококкоз» помогает обнаружение криптококкового антигена в сыворотке крови

иликворе. Антиген можно определять также в плевральном выпоте и БАС [47].

Неопределенность в оценке положительных

иотрицательных результатов посевов при диагностике оппортунистических грибковых инфекций возрастает у больных иммунодефицитами. Существует два наиболее достоверных критерия прижизненной диагностики таких инфекций: 1) обнаружение грибов в ткани легких при культуральном или гистологическом исследовании; 2) выделение культуры при посеве ликвора или других стерильных жидкостей тела, исключая кровь и мочу, которые могут контаминироваться, в том числе при заборе материала [56].

Вотличие от оппортунистических возбудителей пневмомикозов, выделение патогенных диморфных грибов Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis и Sporothrix schenckii из респираторных образцов, ткани легких и биоматериалов других локализаций имеет несомненную клиническую значимость. Эти грибы существуют в мицелярной и дрожжевой (или в виде сферул) формах. В среднем их рост на средах появляется через 14 дней (грибов рода Candida — через 1–3 дня, Aspergillus spp. — через 4–7 дней). В рутинной практике посевы инкубируют до 4 нед у пациентов при серологически подтвержденной грибковой инфекции или у больных, получавших антигрибковую терапию при неустановленной этиологии

242

 

Методы обследования

инфекционного процесса. Присутствие орофа-

деления не стандартизированы и используются в

 

рингеальной микрофлоры в респираторных об-

основном с научной целью [1, 59, 60].

разцах не препятствует интерпретации результатов

Диагностика микоплазм. Среды для культиви-

посевов на диморфные грибы. Посевы осущест-

рования микоплазм содержат свежий дрожжевой

вляют при отрицательных результатах прямой ми-

экстракт, пептон, сыворотку животных и гото-

кроскопии окрашенных препаратов, в том числе

вятся как двухфазная среда с агаровой основой,

специальными методами, где можно легко иден-

залитой бульоном, содержащим индикатор рН для

тифицировать соответствующий возбудитель по

контроля ферментации глюкозы, бензилпеницил-

характерной морфологии. При диссеминирован-

лин и ацетат таллия для подавления роста бакте-

ной грибковой инфекции исследуют материалы

рий. Другие добавки включают амфотерицин В и

из других анатомических областей. Например, при

полимиксин. В процессе инкубации посевов на-

генерализованном гистоплазмозе прямая микро-

блюдают появление помутнения среды в течение

скопия окрашенных мазков костного мозга по-

4–6 дней, после чего производят первый высев

могает быстро поставить диагноз у 50% больных,

на селективный агар, затем повторный высев на

положительный посев обнаруживается в 84% на-

8–12-й день. Рост типичных колоний обычно ви-

блюдений [57]. Дополнительный диагностический

ден в конце 2-й недели инкубации, при отсутствии

тест — обнаружение полисахаридного антигена

роста двухфазную среду инкубируют до 30 дней,

H. capsulatum в моче методом ИФА у 90% больных,

после истечения этого периода выдают отрица-

однако этот тест может быть положительным и

тельный результат. Разрешающая способность

у пациентов с диссеминированной инфекцией,

культурального метода 105 КОЕ/мл, при прямом

вызванной P. brasiliensis, В. dermatidis, Penicillium

определении антигена в респираторном секрете

marneffei [58].

методом ИФА — 104 КОЕ/мл. Из-за медленно-

Диагностика хламидий. У детей хламидийную

го роста организмов и низкой чувствительности

пневмонию, вызванную Chlamydia trachomatis,

культурального метода (60%) для диагноза инфек-

можно диагностировать методом РИФ, культу-

ции M. pneumoniae чаще используют определение

ральным и серологическими методами. Для посе-

специфических АТ или ДНК-амплификационный

ва обычно используют гетероплоидные мышиные

тест [1, 59, 60].

клетки МакКой, обработанные циклогексимидом,

Чувствительность микоплазм к антимикроб-

которые инкубируют 40–72 ч, после чего иссле-

ным препаратам определяют только в научных

дуют наличие внутриплазматических включений

целях и при изучении новых препаратов. Как

хламидий при световой микроскопии после окра-

и хламидии, они предсказуемо чувствительны к

шивания иодином гликогена, продуцируемого

тетрациклинам, макролидам, кетолидам и фтор-

хламидиями в инфицированных клетках. Более

хинолонам.

быстрый и чувствительный метод — РИФ при

Диагностика вирусов. Для заражения вирусами

окраске культуры клеток моноклональными АТ.

используют разные культуры клеток, возникнове-

C. psittaci не продуцирует гликоген, и ее внутри-

ние инфекции определяют по цитопатическому

плазматические включения выявляют при окраске

эффекту или появлению гемагглютинирующих

по Гимзе обычно после 5–10 дней инкубации.

антигенов. Дополнительные тесты (гемадсорб-

Поскольку клеточные культуры C. psittaci высоко-

ции, ингибиции гемагглютинации, нейтрализа-

инфекционные, метод культивирования исполь-

ции и иммунофлюоресценции) используют для

зуется редко, и диагноз пситтакоза устанавливают

дифференциации вирусов гриппа и парагриппа.

серологическими методами.

Культуральный метод при изучении респиратор-

C. pneumoniae можно обнаружить при зараже-

ных образцов более чувствительный, чем опреде-

нии респираторными образцами монослоя культу-

ление антигенов, и занимает в среднем 3–4 дня

ры клеток HeLa-229. После инкубации в течение

для обнаружения цитопатического эффекта при

3–5 дней готовят окрашенные специфическими

вирусе гриппа А и 8–9 дней при ЦМВ.

моноклональными АТ препараты и изучают ме-

Выделение вирусов гриппа, парагриппа, РС-

тодом РИФ.

вирусов и риновирусов из респираторных образ-

Диагноз хламидийной пневмонии ставят сероло-

цов и ткани легкого имеет одинаково важное кли-

гическими методами при определении АТ. Однако

ническое значение, в отличие от аденовирусов,

у больных иммунодефицитами, неспособными син-

вирусов простого герпеса и ЦМВ, обнаружение

тезировать в достаточном количестве АТ, может

которых в респираторных образцах не столь суще-

потребоваться культуральное исследование или ис-

ственно, как в ткани легкого [1, 59, 60].

пользование молекулярно-генетических методов.

Серодиагностика. Серодиагностика основана

Из трех видов хламидий C. trachomatis — редкий

на выявлении специфических АТ разных классов

возбудитель ВП у больных иммунодефицитами.

иммуноглобулинов (IgM, IgA, IgG) в сыворотке

Определение чувствительности хламидий к ан-

крови у инфицированных пациентов и опреде-

тибиотикам не имеет существенного значения, так

лении их титров при однократном исследовании

как различия между штаммами и появление новой

или в динамике заболевания (в парных сыворот-

резистентности весьма редки, сами методы опре-

ках, взятых с интервалом 10–14 дней) с помощью

 

243

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Раздел 5

антигенных диагностикумов в различных серологических реакциях in vitro. Обычно используются реакции преципитации, агглютинации, встречного иммуноэлектрофореза, ИФА, непрямой иммунофлюоресценции, РСК. Эти методы имеют основное значение при подтверждении диагноза

ипроведении эпидемиологических исследований. Известны коммерческие наборы на основе

ИФА и реакции непрямой иммунофлюоресценции для определения IgM АТ и IgG АТ к широкому кругу респираторных патогенов: Legionella spp.,

Francisella tularensis, Yersinia pestis, M. pneumoniae, C. pneumoniae, C. psittaci, Coxiella burnetii, T oxoplasma gondii, Trichinella spiralis, Strongiloides stercoralis, вирусов гриппа, парагриппа, РС-вирусов, аденовирусов, ТОРС-коронавирусов, вирусов простого герпеса, ЦМВ, вирусов краснухи и оспы, Эпштейна–Барр.

Для диагностики инфекции, вызванной C. pneumoniae, обычно используется метод микроиммунофлюоресценции. Результат считается положительным при четырехкратном увеличении титра АТ в парных сыворотках или при однократном определении титра IgM ≥1:16 или IgG ≥1:512 [61]. Аналогичные критерии применяются для C. psittaci. Чувствительность микроиммунофлюоресценции составляет 39–100%, специфичность — 94–100%, что превышает эти показатели в РСК и ИФА, применение которых при серодиагностике инфекций НДП хламидийной этиологии считается нецелесообразным [62]. При неонатальной пневмонии, вызванной C. trachomatis, титр видоспецифических IgM АТ 1:32 диагностический и коррелирует с результатами культуральной диагностики. В то же время определение IgG малоинформативно из-за циркуляции у детей до 12 мес материнских АТ.

Ввиду низкой чувствительности культурального метода серологические тесты составляют основу диагностики микоплазменной инфекции. Холодовые агглютинины, выявляемые в реакции агглютинации с резус-отрицательными эритроцитами 0(I) группы крови при 4 °С, присутствуют приблизительно у 50% больных пневмонией, обусловленной M. pneumoniae. Их уровень приходит в норму через 6 нед после острой инфекции. Однако холодовые агглютинины могут образовываться при целом ряде вирусных инфекций, лимфомах, аутоиммунных нарушениях, что снижает их диагностическую ценность. Комплементсвязывающие АТ выявляют в РСК у 85% пациентов, что согласуется с результатами культурального метода. При этом важны четырехкратное нарастание титров АТ либо титр ≥1:80 при однократном исследовании сыворотки. В последние годы получил развитие метод ИФА для выявления специфических микоплазменных IgM АТ и IgА АТ; его чувствительность и специфичность выше, чем РСК [62]. IgM АТ обнаруживают на 1-й неделе заболевания и достигают пика на 3-й неделе, у взрослых они

продуцируются нерегулярно, поэтому отрицательный результат не исключает наличие инфекции. IgА АТ более постоянны, их продукция не зависит от возраста пациентов.

Серодиагностика грибковых инфекций не всегда информативна. Определение АТ к C. albicans не позволяет провести дифференциальную диагностику локализованного и диссеминированного кандидоза, так как эти АТ присутствуют и у больных, и у здоровых пациентов и только в 50–75% наблюдений встречаются при диссеминированном кандидозе [40].

РСК для выявления АТ к B. dermatidis характеризуется низкой чувствительностью и специфичностью (25%), титр АТ может повышаться при инфекциях, вызванных C. immitis и H. istoplasma capsulatum. Иммунодиффузионный тест для выявления АТ к B. dermatitidis более чувствительный

испецифичный (40–70%), чем РСК. Однако и отрицательный результат не исключает диагноз «бластомикоз».

При серодиагностике криптококкоза используют реакцию преципитации для определения IgM АТ, которые обнаруживают на 2–3-й неделе заболевания у 75% больных, затем постепенно исчезают [52]. Комплементсвязывающие IgG АТ появляются позднее, их титр 1:32 и выше предполагает возможность диссеминированной инфекции.

При легочном гистоплазмозе у 90% больных определяются АТ к H. capsulatum в РСК и методом иммунодиффузии, при диссеминированном процессе они встречаются в 80% наблюдений [63]. Перекрестные реакции наблюдаются при бластомикозах, коккцидиоидомикозе и паракоккцидиоидомикозе.

Молекулярно-генетические методы. Основу мо- лекулярно-генетических методов составляют ПЦР

иее модификации. Принцип ПЦР заключается в многократном повторении (амплификации) исследуемых локусов нуклеиновых кислот термостабильной полимеразой для наработки достаточного количества ДНК и обнаружения ее методами электрофореза и гибридизации. Этот процесс достигается с помощью введения в реакционную смесь коротких молекул ДНК (праймеров), комплементарных нуклеотидным последовательностям того микроорганизма, который необходимо обнаружить. Связывание праймеров с соответствующими участками ДНК/РНК приводит к образованию локальной двухцепочечной структуры узнаваемой полимеразой, которая начинает достраивать ее в направлении 5-3’, используя дезоксинуклеозидтрифосфаты, присутствующие в реакционной смеси. Таким образом, если один из праймеров связывается с прямой цепью, а другой — с обратной, происходит наработка продукта, ограниченного с двух сторон этими праймерами. Поскольку каждый из вновь образованных продуктов — матрица для дальнейшей амплификации, происходит экспоненциальное увеличение их количества.

244

 

 

 

 

 

Методы обследования

Анализ полученных продуктов амплификации с

кусное секвенирование, секвенирование 16SrRNA,

помощью электрофореза заключается в разделении

полное секвенирование генома.

 

ампликонов под действием электрического поля

Заключение

 

в агарозном или полиакриламидном геле. После

 

окончания электрофореза оцениваются наличие и

Лаборатории клинической

микробиологии

размер полученных продуктов реакции амплифи-

играют жизненно важную роль в этиологической

кации. Гибридизация заключается в нанесении на

диагностике инфекций нижних дыхательных пу-

твердую фазу (микропланшет) олигонуклеотидных

тей. Надежность результатов микробиологическо-

зондов, комплементарных внутренней структуре

го исследования зависит от целого ряда условий:

исследуемых ампликонов (прямая гибридизация),

правильного получения адекватного материала;

или нанесении на твердую фазу полученных ам-

своевременной его доставки в лабораторию в со-

пликонов (обратная гибридизация).

Добавление ампликонов или зондов, меченных

ответствующих средах или контейнерах; предва-

либо с помощью радиоактивных меток, либо флюо-

рительной обработки образцов в соответствии с

ресцентных, либо конъюгированных с ферментом,

задачами исследования; чувствительности и спе-

способным осуществлять цветовую реакцию (напри-

цифичности используемых методов для выявле-

мер, пероксидаза хрена), приводит к образованию

ния возбудителя и его маркеров; грамотной трак-

комплексов, которые можно определять с помощью

товки результатов исследования

в соответствии

соответствующих методов. Достоинство гибриди-

с клиническими, радиографическими и другими

зации по сравнению с гельэлектрофорезом — уве-

лабораторными данными пациента. Комплекс со-

личение специфичности метода и объективизация

временных адекватных методов позволяет в на-

оценки результатов эксперимента в автоматическом

стоящее время правильно и быстро идентифици-

режиме. К недостаткам относятся трудоемкость, не-

ровать возбудителей респираторных инфекций,

обходимость использования специальной аппарату-

осуществлять мониторинг хронической инфекции

ры и более высокая стоимость.

легких, выявлять источник инфекции и назначать

Существуют наборы ПЦР для выявления

необходимую терапию, а также осуществлять про-

отдельных микроорганизмов (L. pneumophila,

филактические мероприятия.

 

C. pneumoniae, M. pneumoniae, S. pneumoniae,

Список литературы

 

M. tuberculosis, M. avium, M. kansasii, H. capsulatum,

 

 

 

 

 

 

B. dermatidis, C. immitis, A. fumigatus, P. jiroveci,

См.

 

 

 

 

T. gondii, респираторных вирусов, вирусов просто-

5.3. Методы визуализации

го герпеса, ЦМВ, ТОРС-коронавируса) и одно-

временного выявления нескольких возбудителей.

 

 

 

 

 

 

Наиболее перспективна мультиплексная ПЦР

И.Е. Тюрин

 

в реальном времени, позволяющая определять

 

 

 

 

 

 

наличие ДНК различных возбудителей в одной

Введение

 

пробирке в течение менее 3 ч. Принцип основан

Методы лучевой диагностики (син.: методы ви-

на непосредственном иммунофлюоресцентном

определении амплифицированных генов по мере

зуализации, методы диагностической радиологии)

их генерации in vitro. Эффективность подобного

играют ключевую роль в выявлении, определении

подхода была доказана в ряде исследований [64].

характера и распространенности патологического

Однако требуется осторожность в интерпретации

процесса органов дыхания, а также в оценке эф-

результатов для дифференциации между колони-

фективности проводимого лечения.

зацией (или латентными формами) и инфекцией.

В течение последних 20 лет в торакальной ра-

Пневмококки, хламидии, микоплазмы, кандиды,

диологии произошли кардинальные изменения.

пневмоцисты встречаются у индивидуумов и при

В начале 1970-х годов появились первые образцы

отсутствии инфекции. Герпесвирусы, токсоплаз-

рентгеновских компьютерных томографов, и уже

мы, пневмоцисты могут существовать в латентной

в середине десятилетия стало возможным аксиаль-

стадии в тканях и не вызывать инфекцию. В на-

ное сканирование различных анатомических обла-

стоящее время среди молекулярно-биологических

стей тела, в том числе и органов грудной полости

методов для точной идентификации в сложных

на задержанном дыхании. В 1980-х годах раз-

случаях, для изучения эпидемиологической зна-

работана методика высокоразрешающей КТ для

чимости штаммов микроорганизмов используют

изучения патологии легких, началось клиническое

методы мультилокусного секвенирования и пол-

применение магнитно-резонансной томографии

ного геномного секвенирования [65]. Некоторые

(МРТ) и УЗ-методов исследования, которые по-

организмы трудно или невозможно выявить други-

лучили широкое распространение в последнем

ми методами, и молекулярная диагностика стано-

десятилетии прошлого века, в том числе и при

вится единственно возможной. Диагностическая

исследовании органов дыхания. В этот же пери-

специфичность и чувствительность могут достигать

од времени произошло становление спиральной

98–100%. К таким методам относится мультило-

технологии сканирования в КТ. На ее основе

245

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Раздел 5

возникли первые клинические образцы программ для трехмерных преобразований и методики компьютерно-томографической ангиографии. Начало нового века характеризуется созданием КТ-аппаратов с многорядными детекторами и интенсивным внедрением в клиническую практику ПЭТ как в виде самостоятельного исследования, так и в сочетании с КТ.

На фоне революционных преобразований в области современных томографических технологий продолжается интенсивное развитие традиционного рентгеновского исследования. От рутинных рентгенотомографических методик эта область торакальной радиологии перешла к цифровой радиологии, основу которой составляют современные цифровые детекторы рентгеновского излучения.

В результате произошедших технологических изменений традиционное рентгенорадиологическое исследование больных с заболеваниями органов дыхания переросло торакальную радиологию, использующую все современные методы лучевой диагностики:

Традиционное рентгенологическое исследование.

Рентгеновская компьютерная томография (КТ).

МРТ.

Ультразвуковое исследование (УЗИ).

Радионуклидные исследования.

ПЭТ, в том числе в сочетании с КТ (ПЭТ/КТ).

Интервенционные диагностические и лечебные процедуры под лучевым наведением (рентгеноскопия, УЗИ, КТ).

Традиционное рентгеновское исследование

Открытие в 1896 г. рентгеновского излучения В.К. Рентгеном и явления радиоактивности А. Беккерелем стало отправной точкой многолетнего пути развития торакальной радиологии, накопления знаний и клинического опыта, освоения новых областей медицинской практики.

Уже в 1897 г. была выполнена первая рентгенограмма органов грудной полости. В начале прошлого века (1903 г.) рентгеновские снимки начали выполнять на пластинах, покрытых бромидом серебра (C. Schleussner), в 1913 г. появилась отсеивающая решетка для фильтрации вторичного излучения при рентгенографии (G. Bucky). Важной вехой на пути становления торакальной радиологии стала разработка в 1920-х годах теории и практики линейной томографии (A.- E.-M. Bocage, E. Pohl).

В конце этого же десятилетия были проведены первые бронхографические исследования (Sicard, Forestier). В 1928 г. выполнены первые ангиографические исследования периферических сосудов (R. Dos Santos, A. Lamas, P. Caldas), а в 1929 г. проведена первая ангиопульмонография (АПГ) (W. Forssmann). За этим последовали первый проявочный автомат для обработки рентгеновской

пленки в 1942 г. (Malincrodt) и первая система для компьютерной (беспленочной) рентгенографии (Fuji), усилители рентгеновского изучения для проведения рентгеноскопии с использованием телевизионного монитора (J.W. Coltman). В начале 1990-х годов были представлены первые образцы цифровых рентгеновских аппаратов, которые в настоящее время представляют один из наиболее интенсивно развивающихся сегментов всей радиологической техники.

Исторически все методики традиционного рентгеновского исследования разделяют на основные и специальные. Под этим подразумевается, что рентгеновское исследование органов грудной полости при любом виде патологии должно начинаться с одной из основных методик и, в случае необходимости, продолжаться с использованием набора специальных методик. К основным методикам традиционно относят обзорные изображения анатомической области, такие как рентгенография, рентгеноскопия или флюорография. Среди специальных методик принято выделять томографические исследования (линейная томография, зонография), методики контрастирования и рентгенофункциональные исследования. Во второй половине прошлого века эти методики были основным инструментом обследования больных с патологией органов дыхания, в том числе раком легкого.

Свнедрением в клиническую практику КТ,

атакже МРТ, УЗИ и эхокардиографии (ЭхоКГ) большинство из них перестали использовать или объем таких исследований значительно уменьшился. Так, практически все методики контрастирования (бронхов, сосудов, плевральной и брюшной полости, средостения и перикарда) представляют в настоящее время лишь исторический интерес. Вся необходимая информация об этих анатомических структурах может быть получена с помощью современных томографических технологий. Исключением являются ангиографические исследования сосудов грудной полости в тех случаях, когда они являются составной частью интервенционных радиологических процедур. Многократно сократилось количество линейных томографий, которые выполняются в тех лечебных учреждениях, где проведение КТ больным с легочной патологией не представляется возможным. Резко сократились показания к рентгеноскопии, она перешла из разряда основных методик рентгеновского исследования легочных больных в категорию специальных методик, проводимых по специальным и относительно узким показаниям. Обычно это контроль состояния грудной полости после торакальных операций, выявление жидкости в плевральной полости или проведение инвазивных процедур под контролем рентгеноскопии.

Пленочная рентгенография

Рентгенография является наиболее частой рентгенологической процедурой вообще и орга-

246

Методы обследования

нов грудной полости в частности. Исследование может представлять собой обзорный снимок всей анатомической области в одной из стандартных проекций или снимок части грудной полости. В первом случае речь идет об обзорной рентгенографии, во втором — о прицельных и парциальных рентгеновских снимках.

Показанием к проведению рентгенографии является любое подозрение на патологический процесс в легких, средостении, плевральной полости или грудной стенке, а также оценка выявленных изменений в динамике.

Специальной подготовки к проведению рентгенографии органов грудной полости не требуется. Обзорные рентгенограммы выполняют при вертикальном положении пациента в двух проекциях — прямой передней и одной из боковых, правой или левой. При рентгенографии в прямой передней проекции пациента устанавливают лицом к вертикальной стойке и плотно прислоняют грудью к воспринимающему устройству. Это может быть кассета с рентгеновской пленкой, цифровая камера или другое приспособление. Плечи пациента опущены, подбородок приподнят. Для отведения лопаток кисти рук прижимают к бедрам, а локти направляют вперед (рис. 5.12).

Оптимальным размером рентгеновской пленки для рентгенографии является 35×35 см. Кассету устанавливают таким образом, чтобы верхний ее край находился на уровне VII шейного позвонка. Центральный пучок направляют в центр кассеты по срединной линии тела пациента через область VI грудного позвонка (уровень нижнего угла лопатки). Экспонирование производят после обычного (не форсированного) вдоха на задержанном дыхании.

О точности установки пациента в прямой проекции свидетельствует одинаковое расстояние от линии остистых отростков до правого и левого грудино-ключичного сочленения. На рентгеновском снимке должны отображаться все анатомические структуры груди, включая оба легочных поля, реберно-диафрагмальные синусы и поддиафрагмальная область, верхушки легких и мягкие ткани грудной стенки.

Кроме стандартного снимка в прямой передней проекции, аналогичные изображения можно получить при исследовании в прямой задней проекции и в положении лежа на боку при горизонтальном ходе рентгеновских лучей (латерография). Эти снимки чаще выполняют вне рентгеновского кабинета, в условиях реанимации или приемного покоя (рис. 5.13).

Рентгенография в боковой проекции также проводится в вертикальном положении. Пациент прижимается к воспринимающему устройству соответствующим боком, руки его подняты кверху и скрещены на голове. Оптимальный размер рентгеновской пленки 30×40 см. Верхний край кассеты на уровне VI шейного позвонка, центральный пучок направляют на среднюю подмышечную линию, на ширину кисти ниже подмышечной ямки.

Помимо рентгенографии в стандартных, прямой и боковой, проекциях, обзорные снимки могут быть получены и в атипичных проекциях. Обычно это правая или левая косые проекции, когда пациент разворачивается соответствующим боком к кассете под углом 45°. В прошлом такие рентгенограммы имели большое значение для оценки состояния камер сердца. В настоящее время они практически не используются.

а

Рис. 5.12. Обзорные рентгенограммы органов грудной полости в передней прямой (а) и правой боковой (б) проекциях

б

247

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Раздел 5

а

 

б

 

 

 

Рис. 5.13. Рентгенограмма (а) и латерограмма (б) в положении больной на правом боку. При латерографии жидкость в правой плевральной полости растекается вдоль боковой поверхности легкого

Прицельные рентгенограммы выполняют для детализации изменений, выявленных при обзорной рентгенографии. Они могут выполняться у вертикальной стойки с использованием пленки меньшего формата (парциальные снимки) или во время рентгеноскопии, когда пациента ставят в оптимальное положение под визуальным контролем рентгенолога (рис. 5.14). Другим видом специальных рентгенографических исследований являются рентгенофункциональные пробы, проводимые на выдохе, при натуживании (проба

Вальсальвы) и других физиологических маневрах. Особым видом прицельных снимков являются рентгенограммы области верхушек легких в положении лордоза, часто используемые во фтизиатрической практике.

Рентгенографический контраст

Термин «рентгенографический контраст» определяет величину разницы почернения двух участков на рентгенограммах. Большая разница соответствует высокому контрасту, соответственно,

а

 

б

 

 

 

Рис. 5.14. Рентгенограмма (а) и прицельный снимок, выполненный при рентгеноскопии (б). В верхней доле правого легкого патологическое образование с нечеткими контурами — периферический рак

248

Методы обследования

меньшая величина — меньшей контрастности. Высококонтрастным считается такое изображение, на котором объекты, интенсивно задерживающие рентгеновское излучение, выглядят белыми, и наоборот, участки, соответствующие частям тела, мало поглощающими рентгеновское излучения, — черными. Контраст определяется физическими свойствами объекта исследования, энергией рентгеновского излучения, используемым сочетанием «пленка–усиливающие экраны» и выраженностью вторичного рассеянного излучения.

При рентгенографии груди этот параметр имеет исключительно большое значение. Большинство рентгеновских снимков выполняется для оценки легких и средостения. Однако большая часть легочной ткани перекрывается плотными анатомическими структурами, такими как ребра, ключицы, позвонки, диафрагма и средостение. В случае выполнения высококонтрастного снимка те участки легких, на которые проецируется изображение этих анатомических структур, практически неразличимы. С другой стороны, изображение тени средостения, лишенное в силу чрезмерной контрастности своей обычной структуры, не пригодно для выявления многочисленных патологических процессов, расположенных позади сердечной тени, на фоне бифуркации трахеи, в области корней легких.

Основным фактором, влияющим на рентгенографический контраст выбранной анатомической области, является энергия рентгеновского пучка, которая, в свою очередь, определяется величиной напряжения генерирования рентгеновского излучения. Чем выше напряжение, тем больше проникающая способность излучения, тем меньше рентгенографический контраст. В этом случае снижение контраста наиболее плотных анатомических структур на фоне сохранения контраста легочной ткани приводит к повышению информативности изображения.

Рентгенография легких должна проводиться с использованием жесткого рентгеновского излучения, при напряжении генерирования свыше 100 кВ, обычно 120–150 кВ. Меньшие величины напряжения приводят к излишней контрастности изображения и ухудшению качества изображения.

Использование жесткого излучения имеет два важных следствия. Во-первых, снижение рентгенографического контраста снижает выявляемость обызвествлений и других высокоплотных включений. Поэтому для уточнения структуры патологических образований могут использоваться прицельные снимки, выполненные мягкими рентгеновскими лучами (двухэнергетическая рентгенография).

Во-вторых, жесткое рентгеновское излучение приводит к увеличению количества вторичного рассеянного излучения, которое индуцируется в тканях исследуемой области при прохождении квантов основного пучка излучения. Хаотично направленное рассеянное излучение попадает

на рентгеновскую пленку и снижает контраст. Поэтому при рентгенографии легких жесткими лучами применение отсеивающей решетки является обязательным условием.

Разрешение

Пространственное разрешение можно определить как способность выявлять мельчайшие детали изображения. При использовании стандартной комбинации экран–пленка этот показатель достигает 10–12 пар линий/мм. Тем не менее известно множество факторов, снижающих пространственное разрешение при рентгенографии легких. Наиболее важными из них являются нечеткие, размытые контуры деталей изображения, что определяется в рентгенологии термином «нерезкость».

Динамическая нерезкость возникает вследствие движения объекта исследования в момент экспозиции. При рентгенографии легких основным источником динамической нерезкости являются движения сердца и крупных сосудов, а также непроизвольные движения пациента в момент включения высокого напряжения. Геометрическая нерезкость возникает при использовании слишком большого фокусного пятна анода рентгеновской трубки в результате чрезмерного уменьшения фокусного расстояния (фокус рентгеновской трубки — экран) или слишком большого расстояния между объектом и рентгеновской пленкой. Экранная нерезкость является результатом гранулярного строения поверхности экрана.

Из всех видов нерезкости наибольшее практическое значение при рентгенографии легких имеет максимально полное исключение динамической нерезкости за счет сокращения выдержки до 0,04 с и менее. Уменьшение геометрической нерезкости возможно за счет адекватного фокусного расстояния величиной 180–200 см.

Сигнал/шум

Все системы получения изображений страдают от так называемого шума. Чем больше различия в полезном изображении и возникающих при регистрации излучения помехах, тем выше информативность. Квантовый шум зависит прежде всего от количества квантов рентгеновского излучения, попадающего на воспринимающее устройство — систему экран–пленка. Повышение чувствительности экранов или рентгеновской пленки либо того и другого вместе позволяет уменьшить количество излучения (количество квантов в единицу времени), необходимого для получения изображения. Поэтому использование таких систем, направленное на уменьшение экспозиции, обычно приводит также и к увеличению квантового шума и зернистости изображения.

Технологические стандарты

Для обеспечения высокого качества рентгеновских снимков легких и воспроизводимости

249

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/