- •1 . Оксидазы
- •Метаболизм: определение, функции, основные направления
- •Реакции цтк, катализируемые ферментами класса оксидоредуктаз
- •Структурная организация дыхательной цепи
- •Характеристика пдк.
- •Билет №17
- •1. Строения митохондрий
- •Билет№18
- •1. Оксидоредуктазы
- •Билет № 19
- •1) Схема катаболизма пвк: этапы, характеристика, энергетический эффект.
- •2) Характеристика макроэргических соединений: пример, роль.
- •3) Транспорт атф и адф через мембраны митохондрий.
- •Билет № 20
- •1) Характеристика атф, как универсального макроэргического соединения.
- •2) Схема катаболизма пвк: этапы, характеристика, энергетический эффект.
- •3) Организация неполной дыхательной цепи в митохондриях.
Характеристика пдк.
В пируватдегидрогеназный комплекс (ПДК) входят 3 фермента: пируватдекарбоксилаза (Е1), дигидролипоилтрансацетилаза (Е2) и дигидро-липоилдегидрогеназа (Е3), а также 5 коферментов: тиаминдифосфат (ТДФ), липоевая кислота, FAD, NAD+ и KoA. Кроме того, в состав комплекса входят регуляторные субъединицы: протеинкиназа и фосфопротеинфосфатаза.
Все эти ферменты и коферменты объединены в мультиферментную систему, содержащую разные количества каждого из ферментов и имеющую молекулярную массу более 6•106.
В центре комплекса располагается дигидро-липоилтрансацетилаза (Е2), образуя его ядро. К дигидролипоилтрансацетилазе присоединены молекулы: пируватдекарбоксилазы (Е1) и дигидролипоилдегидрогеназы (Е3).
Пируватдекарбоксилаза содержит прочно связанный с белковой частью ТДФ, а дигидролипоилдегидрогеназа - FAD.
Липоиллизиновые группы центрального фермента (Е2) функционируют как поворотные «кронштейны», переносящие атомы водорода и ацетильные группы от одной ферментной молекулы комплекса к другой.
Окислительное и субстратное фосфорилирование. Примеры реакций в ЦТК.
Окислительное фосфорилирование – это многоэтапный процесс, происходящий во внутренней мембране митохондрий и заключающийся в окислении восстановленных эквивалентов (НАДН и ФАДН2) ферментами дыхательной цепи и сопровождающийся синтезом АТФ.
Субстратное фосфорилирование (биохимическое), синтез богатых энергией фосфорных соединений за счёт энергии окислительно-восстановительных реакций гликолиза (катализируемых фосфоглице-ральдегиддегидрогеназой и енолазой) и при окислении a-кетоглутаровой кислоты в цикле трикарбоновых кислот (под действием a-кетоглутаратдегидрогеназы и сукцинаттиокиназы). Для бактерий описаны случаи С. ф. при окислении пировиноградной кислоты.С. ф., в отличие от фосфорилирования в цепи переноса электронов, не ингибируется "разобщающими" ядами (например, динитрофенолом) и не связано с фиксацией ферментов в мембранах митохондрий. Вклад С. ф. в клеточный фонд АТФ в аэробных условиях значительно меньше, чем вклад фосфорилирования в цепи переноса электронов
Билет №17
1. Строения митохондрий
Каждая митохондрия отделена от цитоплазмы двумя мембранами. Наружная мембрана гладкая. Строение внутренней мембраны более сложное. Она образует многочисленные складки – кристы, которые увеличивают функциональную поверхность. Между двумя мембранами находится пространство в 10-20 нм, заполненное ферментами. Внутри органеллы располагается матрикс – гелеобразное вещество.
Дыхательный ансамбль
В дыхательных ансамблях осуществляются утилизация кислорода, окислительное и выделение углекислого газа, т. е. собственно процесс дыхания. На начальный участок ансамбля поступает окисляемый субстрат - восстановленная трикарбоновая кислота, у которой переносчики отнимают водород. С этой стороны ансамбля начинается движение протонов и электронов. С противоположного конца дыхательного ансамбля «специализированные грузчики» поставляют кислород, где он приобретает электроны, становясь отрицательно заряженным. Положительно заряженные атомы водорода соединяются с отрицательно заряженным атомом кислорода, образуя воду. При этом в общей сложности освобождается 218 кДж/моль энергии, 120 из них идет на синтез АТФ. Последний оказывается возможным благодаря специализированной структуре дыхательных ансамблей, состоящих из пяти комплексов ферментов. Первые три участвуют в переносе протонов на внутренней стороне мембраны, третий и четвертый комплексы обеспечивают транспорт электронов вдоль наружной ее стороны, а с помощью пятого комплекса происходит синтез АТФ.
2.
ЦТК является процессом окисления АцетилКоА - универсального продукта катаболизма углеводов, жиров и белков. ЦТК протекает в митохондриях с участием 8 ферментов, которые локализованы в матриксе в свободном состоянии, или на внутренней поверхности внутренней мембраны. В ЦТК участвуют 5 витаминов В1, В2, РР, пантотеновая кислота и липоевая кислота в виде коферментов тиаминпирофосфата, ФАД, НАД+, КоА и липоата.
1) Цитратсинтаза локализуется в матриксе митохондрий, ее активируют ЩУК, НАД+; ингибируют АТФ, НАДН2, Сукцинил-КоА, цитрат.
В реакции образования цитрата углеродный атом метильной группы ацетил-КоА связывается с карбонильной группой оксалоацетата; одновременно расщепляется тио-эфирная связь и освобождается коэнзим А.
2) Аконитаза локализуется в матриксе митохондрий.
Вторая реакция цитратного цикла - обратимое превращение цитрата в изоцитрат. Фермент, катализирующий эту реакцию, назван аконитазой по промежуточному продукту, цис-аконитовой кислоте, которая предположительно образуется в реакции. Однако это соединение не обнаруживается в свободном виде, так как не отделяется от активного центра фермента до завершения реакции.
3) Окислительно-восстановительная реакция, самая медленная в ЦТК. Изоцитратдегидрогеназа локализуется в матриксе митохондрий, ее активируют АМФ, Са2+, АДФ, НАД+; ингибируют АТФ, НАДН2.
Существуют 2 формы изоцитратдегидрогеназы: одна содержит в качестве кофермента NAD+, вторая - NADP+. NAD-зависимый фермент локализован в митохондриях и участвует в ЦТК; NADP-зависимый фермент, присутствующий и в митохондриях, и в цитоплазме, играет иную метаболическую роль. В результате действия этого фермента на изоцитрат образуется α-кетоглутарат.
4) Окислительно-восстановительная реакция.
α-кетоглутаратдегидрогеназный комплекс состоит из 3 ферментов и содержит 5 коферментов: тиаминдифосфат, кофермент А, липоевая кислота, НАД+, ФАД.
α-КГ ДГ активируется Са2+, ингибируется сукцинил-КоА, АТФ, НАДН2.
Реакцию катализирует α-кетоглутаратдегидрогеназный комплекс, который по структуре и функциям сходен с пируватдегидрогеназным комплексом (ПДК). Подобно ПДК, он состоит из 3 ферментов: α-кетоглутаратдекарбоксилазы, дигидролипоилтранссукцинилазы и дигидролипоилдегидрогеназы. Кроме того, в этот ферментный комплекс входят 5 коферментов: тиаминдифосфат, кофермент А, липоевая кислота, NAD+ и FAD. Существенное отличие этой ферментной системы от ПДК - то, что она не имеет сложного механизма регуляции, какой характерен для ПДК. В частности, в этом комплексе отсутствуют регуляторные субъединицы. Равновесие реакции окислительного декарбоксилирования α-кетоглутарата сильно сдвинуто в сторону образования сукцинил-КоА, и её можно считать однонаправленной.
5) Превращение сукцинил-КоА в сукцинат
Сукцинил-КоА - высокоэнергетическое соединение. В митохондриях разрыв тиоэфирной связи сукцинил-КоА сопряжён с реакцией фосфорилирования гуанозиндифосфата (ГДФ) до гуанозин-трифосфата (ГТФ).
6) Окислительно-восстановительная реакция. Дегидрирование сукцината
Образовавшийся на предыдущем этапе сукцинат превращается в фумарат под действием сукцинатдегидрогеназы. Этот фермент - флавопротеин, молекула которого содержит прочно связанный кофермент FAD.
7) Образование малата из фумарата
Образование малата происходит при участии фермента фумаратгидратазы. Этот фермент более известен как фумараза.
8) Окислительно-восстановительная реакция. Дегидрирование малата В заключительной стадии цитратного цикла малат дегидрируется с образованием оксалоацетата. Реакцию катализирует NAD-зависимая малатдегидрогеназа, содержащаяся в матриксе митохондрий. Образовавшиеся молекулы ЩУК реагируют с новой молекулой Ацетил-КоА и цикл повторяется вновь.
Регуляция ЦТК. Осуществляется с участием 4 регуляторных ферментов: цитратсинтазы, изоцитрат ДГ, α-КГ ДГ и СДГ. ЦТК ингибируется в основном НАДН2 и АТФ, которые являются продуктами ЦТК и цепи окислительного фосфорилирования. Активируют ЦТК в основном НАД+ и АДФ.
3.