- •Место микробиологии и иммунологии в современной медицине. Роль отечественных ученых в развитии микробиологии, вирусологии иммунологии.
- •Основные этапы развития микробиологии и иммунологии. Работы л.Пастера, р. Коха и их значение для развития микробиологии и иммунологии.
- •Основные принципы классификации микробов.
- •Принципы классификации бактерий.
- •Принципы классификации грибов.
- •Принципы классификации простейших.
- •Принципы классификации вирусов.
- •(Морфология микробов)
- •Морфологические свойства бактерий.
- •Структура и химический состав бактериальной клетки. Особенности строения грамположительных и грамотрицательных бактерий.
- •Морфология грибов.
- •Морфология простейших.
- •Особенности морфологии вирусов.
- •Структура и химический состав бактериофагов.
- •Тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.
- •Методы микроскопии (люминесцентная, темнопольная, фазово-контрастная, электронная).
- •(Физиология микробов)
- •Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.
- •Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).
- •Типы и механизмы питания бактерий.
- •Основные принципы культивирования бактерий.
- •Искусственные питательные среды, их классификация. Требования, предъяв-ляемые к питательным средам.
- •Принципы и методы выделения чистых культур бактерий.
- •Ферменты бактерий.
- •Особенности физиологии грибов.
- •Особенности физиологии простейших.
- •Типы взаимодействия вируса с клеткой. Стадии репродукции вирусов.
- •Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги. Лизогения.
- •Методы культивирования вирусов.
- •(Экология микробов. Влияние на микробы факторов окружающей среды)
- •Нормальная микрофлора организма человека и её значение.
- •Дисбиозы. Дисбактериозы.
- •Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике.
- •(Генетика бактерий. Основы биотехнологии)
- •Строение генома бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости.
- •Механизмы передачи генетического материала у бактерий.
- •Внехромосомные факторы наследственности.
- •Мутации.
- •Генетика вирусов.
- •(Микробиологические основы химиотерапии)
- •Понятие о химиотерапии. История открытия химиопрепаратов.
- •Антибиотики. Природные и синтетические. История открытия природных антибиотиков.
- •Классификация антибиотиков по химической структуре, механизму, спектру и типу действия.
- •Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
- •Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
- •(Инфекция и иммунитет)
- •Понятие об инфекции. Условия возникновения инфекционного процесса.
- •Формы инфекции.
- •Стадии развития и характерные признаки инфекционной болезни.
- •Патогенность и вирулентность бактерий. Факторы патогенности.
- •Характеристика бактериальных токсинов.
- •Неспецифические факторы защиты организма.
- •Комплемент, его структура, функции, пути активации, роль в иммунитете.
- •Интерфероны, природа. Способы получения и применения.
- •Понятие об иммунитете. Виды иммунитета.
- •Структура и функции иммунной системы.
- •Иммунокомпетентные клетки. Т- и в-лимфоциты, макрофаги.
- •Иммуноглобулины, структура и функции.
- •Классы иммуноглобулинов, их характеристика.
- •Антигены: определение, основные свойства. Антигены бактериальной клетки.
- •Антителообразование: первичный и вторичный ответ.
- •Иммунологическая память. Иммунологическая толерантность.
- •Теории иммунитета.
- •Особенности противовирусного, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.
- •Понятие о клинической иммунологии. Иммунный статус человека и факторы, влияющие на него.
- •Оценка иммунного статуса: основные показатели и методы их определения.
- •Расстройства иммунной системы: первичные и вторичные иммунодефициты.
- •Аутоиммунные процессы.
- •(Реакции иммунитета)
- •Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
- •Реакция пассивной гемагглютинации. Компоненты. Применение.
- •Реакция преципитации. Механизм. Компоненты. Способы постановки. Применение.
- •Реакция связывания комплемента. Механизм. Компоненты. Применение.
- •Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение.
- •Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
- •Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
- •Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.
- •(Медицинские иммунобиологические препараты)
- •Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.
- •Иммунные сыворотки. Классификация. Получение, очистка. Применение.
- •Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование. Применение. Осложнения при использовании и их предупреждение.
- •Препараты иммуноглобулинов. Получение, очистка, показания к применению.
- •Понятие об иммуномодуляторах. Принцип действия. Применение.
- •Интерфероны. Природа, способы получения. Применение.
- •Иммунотерапия и иммунопрофилактика инфекционных болезней.
- •(Частная микробиология)*
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов. Лечение.
- •Возбудители кишечного иерсиниоза. Таксономия. Характеристика. Микро-биологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудители шигеллеза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители сальмонеллёзов. Таксономия. Характеристика. Микробиологический диагноз сальмонеллёзов. Лечение
- •Возбудители холеры. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Стафилококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых стафилококками. Специфическая профилактика и лечение.
- •Стрептококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
- •Гонококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика гонореи. Лечение.
- •Возбудитель туляремии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель сибирской язвы. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель бруцеллеза. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель чумы, таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель ботулизма. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель столбняка. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение
- •Возбудитель дифтерии. Таксономия и характеристика. Условно-патогенные коринебактерии. Микробиологическая диагностика. Выявление антитоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители коклюша и паракоклюша. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители туберкулеза. Таксономия. Характеристика. Условно-патогенные микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Возбудитель сыпного тифа. Таксономия. Характеристика. Болезнь Брилля-Цинссера. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудители хламидиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель сифилиса. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель лептоспирозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая профилактика. Лечение.
- •Возбудитель боррелиозов. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика.
- •Микоплазмы и уреаплазмы. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Синегнойная палочка. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика и лечение.
- •Классификация грибов. Характеристика. Роль в патологии человека. Лабораторная диагностика. Лечение.
- •Возбудители малярии. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Лечение.
- •Возбудитель амебиаза. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическое лечение.
- •Возбудители орви. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель гриппа. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Возбудитель полиомиелита. Таксономия и характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудители гепатитов а, в и с Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель клещевого энцефалита. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель бешенства. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Возбудитель натуральной оспы. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика оспы.
- •Вирус кори. Таксономия. Характеристика. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика.
- •Герпес-инфекция: таксономия, характеристика возбудителей. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика и лечение.
- •Классификация и характеристика онкогенных вирусов.
- •(Санитарная микробиология)
- •Микрофлора воздуха и методы ее исследования. Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха.
- •Методы санитарно-бактериологического исследования воды. Показатели качества воды: микробное число, коли-индекс.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Микробное число, коли-титр, перфрингенс-титр почвы.
Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.
Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических Аг с помощью Ат, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.
Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения Ат и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.
Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
Механизм. На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими анти телами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.
Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
Иммуноферментный анализ или метод — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях (1010-1012 г/л).
Твердофазный ИФА — вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем промывания,
I. При определении антител (левый рисунок) в лунки планшеток с сорбированным антигеном последовательно добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген для фермента.
I I. При определении антигена (правый рисунок) в лунки с сорбированными антителами вносят антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента.
Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки.
Другой тест - Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченные ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.
Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.