книги из ГПНТБ / Микробиология и гидробиология природных и сточных вод учеб. пособие

но хорошо ознакомившись с записью о ходе работы и исследо­ вания. Ни в коем случае нельзя толпиться у одного прибора, спиртовой лампы, посуды с исследуемым материалом, с крас­ кой. Нельзя класть на стол микробиологические петли, иглы, не прокалив их на пламени спиртовки. Чашки Петри всегда должны быть закрытыми. Особенно тщательно необходимо следить за горящими спиртовыми лампами. Очень осторожно­ го обращения требует микроскоп: нельзя передвигать его с места на место, чтобы не нарушить освещения рассматривае­ мых препаратов, крутить микрометрический виит в одну сто­ рону, а поворачивать его в ту или другую сторону, не отнимая с него пальцев. После лабораторных занятий по микробиоло­ гии вымыть руки с мылом.

О т б о р п р о б в о д ы , д л я м и к р о б и о л о г и ч е с к о ­

сть в 750 мл легче предохранит ватные пробки от намокания плескающейся водой.

образом бутылки оборачиваются в бумагу и стерилизиуются

на крайний случай, пламенем достаточного по величине ват­ ного тампона, смоченного чистым винным спиртом. После об­

к этому времени освобождается от бумаги, развязывается вер­ хушка пробки-тампона и сам тампон извлекается из бутылки. Тампон держат вверх колпачком. Бутылка подставляется под

При отборе проб воды для микробиологического.анализа из открытого водоисточника пользуются посудой такой же емкости, однако приспособленной для взятия пробы с той

40

глубины, с которой предполагается забирать воду проекта- - руемым водопроводом. Приспособление это заключается в том, что бутылки закупориваются не ватными, а каучуковыми пробками с продетыми сквозь них шнурами. Хорошо обвер­ нуть пробки компрессорной бумагой, привязав ее верхушку об­ вязкой шнура сверх пробки, вокруг пробкового шнура. Бу­ тылки должны иметь хороший груз,ч прочио прикрепленный к ним, и прочный шнур, привязанный к горлу.

Бутылка с лодки опускается на должную глубину при по­ мощи шнура, привязанного к ее горлу, и в нужном расстоя­ нии от берега. Шнур от пробки должен свободно следовать за опускаемой бутылкой. На заданной глубине пробку вытаски­ вают из бутылки дерганьем прикрепленного к пробке шнура-

Наш стандарт требует взять одновременно с пробой глу­ бинной также и пробу поверхностей воды. Конечно, при отбо­ рах проб воды руки должны быть безупречно чисты, вымыты щеткой с мылом и вытерты спиртовым тампоном.

Отбор проб поверхностных вод можно делать в бутылку,'

взять пробу с борта лодки. Здесь можно обходиться и ватным тампоном — пробкой для бутылок.

Наш стандарт отбора проб воды для микробиологическо- • го анализа допускает использовать ддя проектов водопрово- , дов анализы воды давностью в два года.

Для открытых и грунтовых безнапорных источников (ко­ лодцы, скважины, ключи, родники), предназначаемых для водопроводов, требуется девять анализов с апреля по де­ кабрь (три весенних, три летних, три зимних). Отбор проб производят обычно санитарные прачи Санэпидстанции или врачи Санбаклабораторин Санэпидстанции.

Отбор проб и анализы воды (микробиологический и хими­ ческий) санэпидстанции проводят бесплатно. Отбор проб воды для анализов у нас регламентирован Г'ОСТом 2761—57, а также «Стандартными методами химического и бактерио­ логического исследования воды», разработанными научно-ис­ следовательским санитарным институтом им. Эрисмана в Мо­ скве.

41

Для прикрепления груза к бутылке, опускаемой на ту или другую глубину открытого водоема для взятия пробы воды, удобно пристроить к/бутылке проволочный каркас, к которо­ му прикрепить груз. (Санэпидстанции обычно располагают специальным прибором для взятия пробы воды с любой глу­ бины. Прибор этот называется батометром).

Какие бы приспособления для взятия пробы воды па ми­ кробиологический анализ не применялись, они должны стери­ лизоваться дместе с посудой и распаковываться непосредс­ твенно перед ее наполнением. Надо твердо помнить, что бак­ териологическому анализу подлежит будущая или настоящая питьевая вода, а не трубы, крапы, посуда, руки отбирающе­ го воду.

Практическая работа Л12

Тема: Микробное число воды.

Количество микробов в одном миллилитре воды называ­ ется м и к р о б н ы м ч и с л о м в о д ы . Наш стандарт пить­ евой воды допускает в одном миллилитре ее не более 100 мик­ робов. Микробным числом воды определяют не только каче­ ство сырой воды источника и уже очищенной питьевой, но также ежедневно и качество работы очистных сооружений на различных этапах очистки воды — после отстаивания в ков­ ше, после отстойника с коагуляцией . после фильтрации, пос­ ле дезинфекции. Обычно вода сырая, непосредственно из во­ доисточника, для определения ее микробного числа разбав­ ляется стерильной дистиллированной водой в 10, в 100, в 1000 раз, смотря по ее загрязненности п мутности. Питьевая вода исследуется без разбавления.

комиссиями также после проверки их работы при помощи ми­ кробного числа.

При проверке работы отстойников за 100°/о принимается ми­ кробное число сырой воды. При проверке работы фильтров за 100% принимает*ся микробное число воды после отстойни­ ка (на фильтре). При проверке хлорирования воды в контак­ тном резервуаре (резервуаре чистой воды) берется проба во­ ды из водовода (насоса), подающего воду' потребителям. Здесь вода должна содержать микробов в соответствии с го­ сударственным стандартом (не более 100 в литре воды);.

42

В лабораториях микробов выращивают на питательные средах. Смешение материала, имеющего микробов, с пита­ тельной средой в микробиологии называется посевом- Пита­ тельными средами дли размножения микробов в лаборато­ риях являются обычно мясные бульоны с добавлением к ним различных солей и сахаров.иаиболее благоприятных для рос­ та тех пли иных микробов/

В жидком бульоне микробы, размножаясь, свободно рас­ пространяются по всему объему жидкой питательной среды. Для того, чтобы микробов отделить друг от друга, чтобы ми­ кроб размножался в одном определенном месте, используют студенеобразные питательные среды, называемые в микроби­

Агар-агар—это вещество, добываемое из водоросли аифельцип, растущей главным образом в Тихом океане.

Для посева воды на стерильные агаровые питательные среды они подогреваются до жидкого состояния, затем осту­ живаются до температуры 45—40°С (чтобы не сварить ми­ кробов, но и не допустить застывания среды, которое быстро происходит при температуре ниже 40°). Для определения нужной температуры зажимают пробирку или склянку с ра­ стопленным агар-агаром в кулак. Такие соприкосновения сво­ бодно переносятся именно при температуре 45—40°.

проч.). Стерилизация чаще производится в автоклаве, дву­ стенном прочном котле, налитом водой. Здесь образуется пар

расплавленную питательную среду с агар-агаром, ждут осты­ вания ее до температуры 45—40°, открывают пробирку (или склянку) мизинцем левой руки, фламбпруют края ее на спир­ товой горелке, приоткрывают чашку Петри и выливают в нее

43

около 10 мл еще жидкой агаровой питательной средыЗа крывают пробирку или склянку ватной пробкой, профламбпровав предварительно ее на спиртовой горелке. Осво­ бодившейся правой рукой легкими круговыми движениями чашки Петри на ровной поверхности стола смешивают пита­ тельную среду с водой и оставляют посев в покое для засты­ вания. Выращивание посеянных микробов производят в тер­ мостате при температуре в 37-—37,5°

Через сутки на засеянном агар-агаре пз каждого микро­ ба, находившегося в исследуемой воде, на том месте, где его сковал застывший агар-агар, вырастет скопление микробов, видимое простым глазом, обычно в форме круглого пятна, иногда бесцветного, а иногда и окрашенного в красноватый, в желтый, синеватый цвет. Это скопление микробов, вырос­ шее из одного микроба и видимое простым глазом, называется

При выращивании посевов в термостате подсчет колоний производятся через-24 час. А при выращивании в комнате с температурой 20° — через 48 час.

При контроле работы отстойников с коагуляцией микроб­ ное число их воды после выхода из отстойника должно быть около 40—35% от количества микробов воды, поступающей в отстойник, иными словами, в отстойнике должно остаться с осевшими хлопьями коагулянта около 60—65% микробов. Скородействующие фильтры должны задерживать 37—33°/° микробов, а вместе с отстойниками — 97—98%.

очищают воду на 63%. Большинство отстойников наших во­ допроводов дает около 60"/° очистки воды по микробному чис­ лу.

В Западной Европе для определения чистоты воды, по

не пользуются-

44

Практическая работа № 3.

Тема: I - Определение морфологии микробов.

2. Приготовление сухого препарата микробов из ко­ лонии.

Для определения морфологии микробов приготовляют сухой препарат. Для этого берут чистое, обезжиренное пред­ метное стекло. Микробиологической петлей, профламбированной на спиртовом пламени и остуженной, наносят на середину предметного стекла 2—3 капли физиологического раствора. Вновь фламбнруют п остуживают петлю и касаются ею по­ верхности намеченной для исследования колонии, стараясь не захватить питательной среды. Захваченный материал вносят в каплю воды на предметном стекле, круговыми движениями смешивают с водой и размазывают на площади в I—2-копееч­ ную монету.

Приготовленный так мазок обязательно фиксируют про­ ведением через пламя спиртовой горелки 2—3 раза. Еще слег­ ка теплый мазок обводят восковым карандашом и наливают на него раствор карболового фуксина. Восковая черта не по­ зволяет краске перелиться за пределы намаза, что избавит руки и платье от покраски фуксином. Лучше перед покраской предметное стекло поместить на стеклянные палочки, поло­ женные на стеклянный пли эмалированный тазик. Продолжи­ тельность покраски фуксином 3—5 мин, после чего краска сливается, препарат промывается струей воды из обычней промывалкп с грушей пли под водопроводным краном. С препарата удаляется вода встряхиванием и фильтровальной бумагой. Высушенный так препарат рассматривается под ми­ кроскопом с помощью объектива с масляной иммерсией.

Окраску микробов производят также и другими краска­ ми — метнленовой синькой, брильянтовой зеленью, генцианвиол етом.

Г л а в а V. Водная группа заразных микробов.

•

Как уже сказано, в воде могут находиться, а при благо­ приятных условиях даже размиожатьс.я, многие патогенные микробы. В первую очередь к ним относится тифозно'-парати- фозная группа микробов (палочка брюшного тифа, паратифа «А» и паратифа «В»), холерный .вибрион, дизентерийные па- ' очки, лептоспиры водной лихорадки и лецтоспиры инфекци-

45

онной желтухи (болезнь Васильева), микрококк бруцеллеза, палочка туляремии, вирус (ультрамикроб) полиомиэлита, вирус эпидемического гепатита (болезнь Боткина), энтеровирусы (коксаки и ECHO) и др.

Х о л е р н ы й в и б р и о н. Морфологически холерный ви­ брион представляет собой изогнутую палочку, почему ее ино­ гда называют холерной запятой. На конце вибрион имеет ' один жгутик, при посредстве которого он стремительно дви­ гаетсяЭто один из самых быстрых микробов. Величина хо­

при низких температурах во льду, в почве, в воде, долго вы­ живает в грязном белье и испражнениях. В воде холерный ви­ брион при температурах выше 20° размножается. Холерой бо­ леют только люди. Заражение чаще происходит через воду и контактно, через грязные руки. Кислое содержимое желудка препятствует проникновению холерного вибриона в тонкий ки­ шечник. При разбавлении кислого желудочного сока обиль­ ным питьем, арбузным, огуречным соком вибрион невредимо проскакивает через желудок и попадает в топкий кишечник, где и проявляет свои патогенные свойства: частые и обильные поносы, рвоты, 'слушнванне эпителия слизистой оболочки ки­ шок, резкое обезвоживание организма, нарушение циркуля­ ции крови, появление судорог. Смертность от холеры очень высока.

Холера эндемична для Индии в долинах рек Ганга и Брамапутры. За пределы Индии холера вышла впервые в 1817 г. Первая холера, в России была в 1823 г. Окончательно ликви­

воды с ;правильной, бесперебойной очисткой и дезинфекцией

46 •

она.. Наша связь и близость особенно Средне-Азиатских на­ ших республик к азиатским странам (Афганистан, Индия. Пакистан н др.) заставляет нас быть особенно насторожен­ ными по отношению к холере, к эль-тору. Вот почему и про­ грамма КПСС и особенно Директивы XXIV съезда КПСС пре­ дусматривают завершить в основном обеспечение всех горо­ дов централизованным водоснабжением. Ежегодно у нас строятся десятки водопроводно-фильтровальных станций, бурятся 30—40 тысяч наиболее безопасных артезианских водоснабжающпх скважин. В IX пятилетке Директивами XXIV съезда КПСС предусматривается снабдить централизованным водоснабжением 700 городов и рабочих поселков.

В 1970 г. эль-тор проник в наши южные города — Одессу, Астрахань, Керчь, вызвав заболевания. Принятые ме­ ры помогли избежать эпидемии.

Б р ю ш н о - т и ф о з н а я п а л о ч к а и п а л о ч к и п а- р а т и ф о в («А» и «Б»). Морфологически эти все палочки не отличимы друг от друга. Это небольшие, короткие, толс­ тые, с закругленными концами, прямые палочки. По бокам эти палочки имеют по несколько жгутиков (перитрихий). Па­ лочки брюшного тифа и паратнфов хорошо сохраняются в во­ де, во влажной почве, а при температурах выше 20° размно­ жаются. Они не стойки против дезинфецирующпх растворов и высокой температуры. Они быстро погибают под действи­ ем 3—5% растворов карболовой кислоты, 5—10°/» растворов хлорной извести; нагревание до 56—60° убивает их в 15 мин.

Заражение этими микробами происходит с пищей, во­ дой, через грязные руки от больных людей или бактерионо­ сителей, а заражение паратифами — также и от домашних животных, поэтому палочки паратнфов называются бипато-

зывая у потребителей зараженных продуктов токсикоинфе-i кацию со рвотами и поносами через какие-нибудь 4—8— 12 час. Попав в кишечник, тифозные и паратифозные палоч­ ки около 2-х недель размножаются и проникают в кровь, в жел-

чный пузырь и в желчные ходы, где могут сохраняться очень продолжительное время и после' выздоровления.

Заболевшие брюшным тифом на долгое время становятся нетрудоспособнымиБолезнь длится около 50 дней. После это­ го остается слабость еще недели на две — три- В общем тру­ доспособность при брюшном тифе теряется на 70—80 дней, почти на три месяца. При паратифах — значительно мень­ ше-

По всем населенным местам профилактически против ти­ фозных заболеваний проводятся комплексные мероприятия: больные рано„изолируются в больницы, пнфецированные квартиры, общежития дезинфицируются, повсеместно проводит- „ ся борьба с мухами, бытовые отбросы вывозятся за пределы населенных мест, производятся прививки вакцин, для ле­ чения и профилактики применяется поливалентный бактери­ офаг, антибиотики; грамотность населения неизмеримо воз­ росла, населенные-места, особенно вновь возникающие, охва­ тываются правильно устроенными водопровод а м»и и канали­ зациямиПрименение антибиотиков сводит смертность от ти­ фозных заболеваний к единицам.

Д и з е н т е р и й н ы е п а л о ч к п. Из дизентерийных не­ подвижных микробов наиболее стойкой во внешней среде яв­ ляется шигелла Флекснера. Заражение, ею чаще всего проис­

имени первого открывателя их Шига они называются теперь

группы: 1) собственно палочка Флекснера, 2) палочки Ньюкестль, палочки Бойд-Новгородской. Все три группы имеют многочисленные типы. Во всех городах и рабочих поселках, имеющих централизованное водоснабжение, заболевания ди-

48

зентериями Флекспера редки. Здесь преобладают дизентерии типа З о н не, протекающие легче и связанные главным об­ разом с заражением через пищевые продукты (молоко, сме­ тану, творог, сырки, в которых этот вид микробов легко и с успехом размножается).

• Л е и т о с п и р ы в о д н о й л и х о р а д к и и и н ф е к ц и ­ о н н о й ж е л т у х и . Это группа спирохет с очень мелкими завитками. Источниками распространения лептоспцр и зара­ жения водоисточников являются грызуны (крысы, мыши-по­

2-х недель и выводят из строя людей на срок продолжитель­ ностью до 3-х недель. При правильной непрерывной очистке во­ ды на водопроводах и хлорировании воды лептоснпры водной лихорадки пли инфекционной, желтухи в питьевую воду посту­ пать не могут.

Б р у ц е л л ы - Эти очень мелкие и заразные кокковндные бактерии проникают в организм человека даже через непо­ врежденные слизистые оболочки и кожу. Называются они так

Источниками заражения является рогатый скот (коровы, ов­ цы, козы) и свиньи. Заражаются люди при непосредственном контакте с больными животными, при употреблении молока и молочных продуктов больных животных, при питье заражен­ ной воды. Больные животные абортируют пли даже остают­ ся яловыми. Женщины, больные бруцеллезом, также могут або­ ртироваться. Бруцеллез у людей—это тяжелая продолжитель­ ная болезнь, часто рецидивирующая и сопровождающаяся вы­ сокой температурой,.опухолью и болезненностью суставов, поражением половых желез (орхпты, оофориты, маститы). Болезнь нередко тянется месяцами и даже годамиБру­ целлы малоустойчивы против дезинфицирующих растворов

;и при правильной, бесперебойной коагуляции, фильтрации и хлориров/аиии проникнуть в питьевую воду не могут.

49