15 Автореферат Смолянова-2

Глава 6. Использование разработанной методики определения специфической активности при изучении фармакокинетики лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

На следующем этапе работ было проведено изучение фармакокинетики ЛП иммуноглобулин человека против COVID-19 при однократном внутривенном введении в дозе 4 мл/кг с участием 23 здоровых добровольца в возрасте 18-60 лет. Фармакокинетические параметры исследуемого ЛП ИГЧ прости COVID-19 были рассчитаны для двух серий: серию П3 (содержание антител к SARS-CoV-2 – 330 АКЕ/мл) вводили 8 добровольцам, серию П4 (содержание антител к SARS-CoV-2 – 250 АКЕ/мл) вводили 15 добровольцам.

Количественное определение содержания антител к SARS-CoV-2 в сыворотках крови людей проводилось методом ИФА с использованием тест-системы ИФА ЕИ и разработанного СОП-1, разведенного пулированной интактной плазмой крови человека, в качестве стандартного образца.

Для анализа индивидуальных профилей изменения во времени значений концентраций антител к вирусу SARS-CoV-2 в плазме крови добровольцев, зарегистрированных после введения исследуемого ЛП ИГЧ против COVID-19, использовали следующие параметры: максимальное значение концентраций специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 (Сmax) и время достижения Сmax (Tmax), площадь под кривой «зависимости концентрации специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 от времени» с момента введения до последнего определяемого значения концентрации специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 во временной точке t (AUC0-t). Дополнительно определялся период полувыведения специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 (T1/2), константа скорости элиминации (Kel) и объем распределения лекарственного средства (Vd) (Табл. 6).

Таблица 6 – Сводная таблица фармакокинетических параметров после однократного введения дозы исследуемого лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

Усредненные фармакокинетические профили значений концентраций специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 после введения исследуемого ЛП приведены на рисунке 6.

Было установлено, что фармакокинетические параметры исследуемого ЛП ИГЧ против COVID-19 соответствуют параметрам для лекарственных препаратов внутривенных иммуноглобулинов, что явилось основанием для проведения последующих фаз клинических испытаний ЛП ИГЧ против COVID-19. Таким образом, была показана возможность использования разработанной методики для определения специфических антител при изучении фармакокинетики ЛП ИГЧ против COVID-19.

- 21 -

Рисунок 6 – Усредненные фармакокинетические профили (в линейных координатах со стандартными отклонениями) специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 после однократного введения дозы лекарственного препарата иммуноглобулина человека против

COVID-19

ВЫВОДЫ

1.Проведен анализ современного состояния проблемы стандартизации специфических иммуноглобулинов. Разработаны научно-методические подходы к выбору метода определения специфической активности противовирусных иммуноглобулинов, определено, что классическим методом определения специфической активности лекарственных препаратов противовирусных иммуноглобулинов является реакция вируснейтрализации, а также установлена тенденция перехода на методы in vitro, с использованием метода иммуноферментного анализа (ИФА), в частности для количественного определения антител к SARS-CoV-2.

2.В результате проведенных сравнительных исследований оценки содержания антител к SARS-CoV-2 в пулах плазмы крови человека с использованием методов реакции вируснейтрализации (РВН) и ИФА было установлено, что коэффициенты корреляции для сравниваемых методов при применении тест-систем для ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ (ИФА ГНЦ) и Евроиммун Медицинише Лабордиагностика ГмбХ, Германия (ИФА ЕИ) составили 0,91 и 0,95, что свидетельствует о возможности использования метода ИФА

с указанными тест-системами взамен РВН для определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции и лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19.

3.Разработан первичный стандартный образец для количественного определения антител

кSARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции (СОП-ФС-1), аттестованный референтным методом РВН. Титр вируснейтрализующих антител, соответствующий 1:20, позволил присвоить образцу значение активности в установленных нами впервые единицах измерения (антиковидные единицы), равное 20 AKE/мл. Разработана методика количественного

определения антител к SARS-CoV-2 методом ИФА с использованием СОП-ФС-1 и наборов реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ. Валидационные характеристики разработанной методики позволяют сделать заключение о том, что ее можно применять при определении антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции. Определена

- 22 -

специфическая активность фармацевтической субстанции для производства лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19, составляющая не менее 20 АКЕ/мл.

4.Выполнены исследования по сравнительной оценке содержания антител к SARS-CoV-2 в СОП-ФС-1, выраженного в единицах активности АКЕ/мл, относительно референс-панели NIBSC 20/268, охарактеризованной в принятых ВОЗ единицах связывания BAU/мл. Установлено, что специфическая активность СОП-ФС-1 составила 96,8±6,8 BAU/мл антител к SARS-СоV-2. Коэффициент пересчета АКЕ/мл в BAU/мл составил 4,8 для набора реагентов ИФА ГНЦ, 5,0 для набора реагентов ИФА ЕИ.

5.Разработан стандартный образец для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 (СОП-1), аттестованный референтным методом РВН. Титр вируснейтрализующих антител, соответствующий 1:320, позволил присвоить образцу значение активности в установленных нами впервые единицах измерения (антиковидные единицы), равное 320 AKE/мл. Разработана методика количественного определения антител к SARS-CoV-2 методом ИФА с использованием СОП-1 и наборов реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ. Валидационные характеристики разработанной методики позволяют сделать заключение о том, что ее можно применять при определении антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19. Определена специфическая активность лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19, составляющая не менее 160 АКЕ/мл.

6.Выполнены исследования по сравнительной оценке содержания антител к SARS-CoV-2 в СОП-1, выраженного в единицах активности АКЕ/мл, относительно референспанели NIBSC 20/268, охарактеризованной в принятых ВОЗ единицах связывания BAU/мл. Установлено, что специфическая активность СОП-1 составила 2234,8±158,8 BAU/мл антител к SARS-СоV-2. Коэффициент пересчета АКЕ/мл в BAU/мл составил 6,4 для набора реагентов ИФА ГНЦ, 7,0 для набора реагентов ИФА ЕИ.

7.Результаты, полученные при изучении фармакокинетических профилей после однократного введения лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

сприменением разработанной методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 с использованием тест-системы ИФА ЕИ и разработанного СОП-1, доказали возможность использования разработанной методики при изучении фармакокинетических параметров.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Работы, опубликованные в рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных

ВАК

1.Выбор метода и разработка стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 методом ИФА в препаратах иммуноглобулинов. // Т.И. Смолянова, А.М. Николаева, Т.В. Вязникова [и др.] // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. – 2022. – Vol. 22, № 4. – P. 392-404. – DOI 10.30895/2221-996X-2022-22-4-392-404.

2.Доклинические исследования нового иммуноглобулина для внутривенного введения против COVID-19 // А.М. Николаева, А.В. Иванов, Т.И. Смолянова [и др.] // Разработка и регистрация лекарственных средств. – 2023. – Vol. 12, № 1. – P. 155-160. – DOI 10.33380/2305- 2066-2023-12-1-155-160.

3.Изучение фармакокинетики препарата «КОВИД-глобулин» (специфический

иммуноглобулин человека против COVID-19) (АО «Нацимбио», Россия) в рамках фазы I клинического исследования // Т.И. Смолянова, Н.С. Багаева, М.А. Колганова [и др.] // Разработка

- 23 -

и регистрация лекарственных средств. – 2022. – Vol. 11, № 2. – P. 180-186. – DOI 10.33380/2305- 2066-2022-11-2-180-186.

4.Совет экспертов: применение КОВИД-глобулина в терапии COVID-19 / А.Г. Арутюнов, С.Н. Авдеев, М.М. Батюшин, Т.И. Смолянова [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2022. – Vol. 85, № 3. – С. 13-20. – DOI 10.30906/0869-2092-2022- 85-3-13-20.

5.Development and characterization of anti-SARS-CoV-2 intravenous immunoglobulin from

COVID-19 convalescent plasma / M. Razumikhin, T. Smolyanova, A. Nikolaeva [et al.] // Immunotherapy. – 2022. – Vol. 14, № 14. – P. 1133-1147. – DOI 10.2217/imt-2022-0015.

Патент

1. А.М. Николаева, М.В. Разумихин, Т.И. Смолянова, Т.В. Вязникова, Е.И. Саканян, А.В. Иванов, О.В. Белякова, Е.В. Орлова. Способ получения иммуноглобулина против COVID-19, патент на изобретение № 044535 от 31.08.2023.

Тезисы докладов

1.Валидация методики количественного определения специфической активности препарата КОВИД-глобулин // Т.И. Смолянова, Т.В. Вязникова // ИммунБиоТех 2021, Томск. Сборник статей к конференции, 13-14 октября 2021 г. – С. 145-148.

2.Лабораторно-экспериментальное изучение препарата «КОВИД-глобулин, иммуноглобулин человека против COVID-19, раствор для инфузий, 100 мг/мл» // А.В. Иванов, Т.И. Смолянова, М.В. Разумихин [и др.] // ИммунБиоТех-2021, Томск. Сборник статей к конференции, 13-14 октября 2021 г. – С. 98-101.

3.Оценка специфической активности препарата «КОВИД-глобулин» // Т.И. Смолянова, Т.В. Вязникова // Материалы II Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики», Кемерово, 20 мая 2022 г. – С. 447-451.

4.Методические подходы к обеспечению вирусной безопасности биологических лекарственных препаратов // Н.В. Зубкова, Е.И. Саканян, М.В. Разумихин, Т.И. Смолянова //

ИммунБиоТех-2021, Томск. Сборник статей к конференции, 13-14 октября 2021 г. – С. 129-132.

Автор выражает глубокую признательность и благодарность за помощь в работе научному руководителю доктору фармацевтических наук, профессору Е.И. Саканян; директору научного центра АО «НПО «Микроген» Филиал АО «НПО «Микроген» в г. Пермь «Пермское НПО «Биомед» доктору биологических наук, профессору А.М. Николаевой, генеральному директору АО «Нацимбио» управляющей компании АО «НПО «Микроген» А.Ю. Загорскому.

- 24 -