4 курс / Акушерство и гинекология / Ботвиньева_И_А_Иммунорегуляторные_белки_и_цитокины_при_беременности

51

контрольной группы (95% ДИ составил 4,1-5,0 мг/л против 3,4-4,0 мг/л), а при рождении ребенка с ПВИ уровень ЛФ в сыворотке крови рожениц – носительниц антител к Chlamydia trachomatis был достоверно выше уже на 59 %, не только при сравнении с женщинами из контрольной группы (95% ДИ: 5,4- 6,6 мг/л и 3,4-4,0 мг/л соответственно), но и на 31% при сравнении с женщинами-антителоносительницами, родившими здорового ребенка.

Ошибка средней и стандартное отклонение были меньшими у здоровых и наибольшими на фоне носительства антител при рождении ребенка с признаками внутриутробного инфицирования вследствие более высокой индивидуальной вариабельности показателей в этой группе (табл.1).

Индивидуальный анализ показателей позволил установить, что при физиологической беременности у здоровых уровень ЛФ превышал 5,0 мг/л у 7 % женщин. У рожениц, имевших антитела к Chlamydia trachomatis в циркуляции, но родивших здоровых детей содержание ЛФ более 5,0 мг/л выявлялось в 33 % случаев, в то время как у женщин, родивших детей с ПВИ уровень ЛФ более 5,0 мг/л выявлялся в 71 % случаев.

Обнаруженная взаимосвязь содержания лактоферрина в крови роженицантителоносительниц Ch. trachomatis с наличием клинических проявлений внутриутробной инфекции у ребенка в раннем неонатальном периоде послужила предпосылкой для более углубленного динамичного исследования беременных, имеющих антитела к данному патогену, в гестационных сроках 1324 недель и 38-40 недель (в родах).

Из обследованных во 2 триместре беременных женщин с IgG антителами к Ch.trachomatis в крови, с отсутствием клинических признаков заболевания, у 53 % титр антител не превышал значений 1:5 - 1:10; у 38 % женщин титры были 1:20 - 1:40, и у 9% пациенток – 1:80 - 1:160. Как показали проведенные исследования, в сыворотке крови всех обследованных беременных с IgG антителами к Ch.trachomatis в циркуляции, обнаружены также антитела класса

52

G к мембранным белкам MOMP + pgp3 и в 20 % - IgА антитела к

Ch.trachomatis.

Таблица 2

Титр IgG антител к Ch. trachоmatis и МОМР+pgp3 у здоровых беременных и носительниц антихламидийных антител (II триместр)

У 78 % беременных женщин, носительниц IgG антител к Ch.trachomatis в низких титрах (не более 1:40), титр специфических IgG антител к MOMP + pgp3 не превышал значений 1:10, в то время как при наличии в крови IgG антител к Ch.trachomatis в более высоких титрах (1:80 -1:160) уровень специфических IgG антител (MOMP + pgp3) составлял 1:20.

Антитела к белку теплового шока HSH 60 были выявлены у 29% беременных, носительниц IgG антител к Ch.trachomatis.

Какой-либо зависимости между титром IgG антител, а также антител к специфическим поверхностным антигенам хламидий и антителами к белку теплового шока нами не выявлено, за исключением 6 беременных, у которых были обнаружены специфические IgА антитела к Ch.trachomatis.

53

Концентрация лактоферрина в крови беременных, носительниц IgG антител к Ch.trachomatis во II триместре (рис. 4), была повышена по сравнению с контрольными данными в 88 % случаев (в среднем, в 2,4 раза).

Последующий ретроспективный анализ течения раннего неонатального периода у данной группы, позволил установить, что уровень ЛФ в сыворотке крови во II триместре не зависел от состояния новорожденного и был повышен у всех беременных - антителоносительниц. В конце III триместра сывороточная концентрация белка статистически значимо повышалась у всех беременных по сравнению со II триместром (в среднем в 2-5 раз; р=0,0001). Однако у роженицносительниц антихламидийных антител, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования содержание ЛФ, как упоминалось ранее, достоверно отличалось не только от контрольных показателей здоровых рожениц (р=0,0001), но и от серопозитивных женщин, родивших здоровых детей (р=0,0003).

Доверительный интервал (SD) и ошибка средней (±m) в обеих группах антителоносительниц во II триместре были сопоставимы (0,977 и 0,876; ±0,18 и ±0,25 соответственно).

13-24 нед 38-40 нед

Рис.4. Уровень ЛФ (мг/л) в сыворотке крови при беременности в 13-24 недели и в родах 38-40 недель у здоровых и у носительниц антител к Chlamydia trachomatis, в зависимости от состояния новорожденного в раннем неонатальном периоде.

Необходимо отметить, что при титрах IgG антител к Ch.trachomatis, не превышающих пороговое значение 1:40, уровень лактоферрина был в 1,3 раза ниже, по сравнению с показателями данного белка в крови беременных с наличием IgG антител в высоких титрах: 1:80 – 1:160 (1,67±0,15 мг/л против 2,09±0,63 мг/л соответственно). Положительная коррелятивная зависимость между титром IgG антител к Ch.trachomatis и концентрацией лактоферрина в крови подтверждена статистически (r=0,270; р=0,044).

Таким образом, уровни иммунорегуляторных белков в сыворотке рожениц-антителоносительниц, особенно при рождении детей с признаками внутриутробного инфицирования, в целом отличались большей индивидуальной вариабельностью показателей по сравнению с практически здоровыми роженицами. Сравнительный ретроспективный анализ концентраций исследуемых белков в сыворотке крови рожениц, при носительстве антител класса G к Ch. trachomatis показал, что наблюдалось

55

достоверно значимое увеличение сывороточных уровней лактоферрина, а также альфа-2-макроглобулина у женщин-антителоносительниц, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования. При рождении здорового ребенка, от антителоносительницы, повышение уровня ЛФ в циркуляции было также статистически достоверно, но, в среднем, менее выражено, чем при ПВИ, а уровень а2-МГ совершенно не отличался от нормы. Изучение уровня ЛФ в динамике (II-III триместр) подтвердило повышение концентрации данного белка в течение беременности и диагностическую ценность его определения при риске развития ВУИ на поздних сроках (в III триместре), при отсутствии таковой на более ранних сроках беременности (во II триместре). Все вышеперечисленное свидетельствует об участии изученных регуляторнотранспортных белков в патогенезе процессов, приводящих к появлению признаков внутриутробного инфицирования и осложненному течению раннего неонатального периода у ребенка.

3.2. Уровень иммунокомплексов а2-МГ-IgG в сыворотке крови рожениц с антителами к Chlamydia trachomatis и возможность прямого взаимодействия а2-МГ и ЛФ с возбудителем

Известно, что негативное воздействие Chlamydia trachomatis на плаценту и плод связывают не столько с прямым повреждающим воздействием возбудителя на организм, сколько с аутоиммунными реакциями, развивающимися на фоне антителоносительства. В частности известно, что при хламидиозе повышается титр аутоантител к белку теплового шока HSH 60 и некоторым другим белкам за счет структурной сходности с белками возбудителя. Предполагается, что именно подобные аутоиммунные процессы приводят к повреждению тканей, нарушению барьерных функций и к

56

последующему инфицированию плода. В этой связи мы впервые изучили сывороточное содержание иммунокомплексов полифункционального а2-МГ с иммуноглобулинами класса G в норме и на фоне антителоносительства для установления их роли в развитии осложнений в раннем неонатальном периоде, а также возможность прямого связывания а2-МГ и ЛФ, обладающих антибактериальными и противовирусными свойствами, с антигенами Chlamydia trachomatis.

Установлено, что содержание иммунокомплекса а2-МГ-IgG в сыворотке крови рожениц с физиологически протекавшей беременностью и беременностью на фоне антителоносительства (как с признаками внутриутробного инфицирования так и без них), в среднем, статистически достоверно не различается (рис.5, табл. 3). Повышенное содержание иммунокомплексов (более 12мг/л) выявлялось у 33% антителоносительниц, родивших здорового ребенка, и у 38% родивших ребенка с ПВИ (7% в контроле). При этом в остальных случаях содержание изученных иммунокомплексов не отличалось от показателей, характерных для контрольной группы. Вследствие этого при антителоносительстве наблюдался значительный разброс результатов, практически 2-х кратное увеличение стандартного отклонения и ошибки средней (табл.3), что и не позволило выявить достоверность различий при анализе небольшой выборки.

57

АТ с ПВИ 11,22

АТ без ПВИ 10,6

контроль 7,93

а2-МГ-IgG

Рис.5. Уровень иммунокомплексов а2-МГ-IgG (мг/л) в сыворотке крови у здоровых рожениц (38-40 недель) и у носительниц антител к Chlamydia trachomatis, в зависимости от состояния новорожденного и течения раннего неонатального периода.

Таблица 3

Значения ошибка средней (±m) и стандартное отклонение (SD) при исследовании иммунокомплексов а2-МГ-IgG в сыворотке крови

в группах рожениц с IgG к Chlamydia trachomatis

Помимо определения сывороточных концентраций циркулирующих специфических иммунокомплексов в крови рожениц, изучалась возможность прямого связывания а2-МГ и ЛФ, обладающих антибактериальной активностью с антигенами хламидий методом ИФА. В качестве первого слоя применялся иммобилизованный рекомбинантный антиген Chlamydia trachomatis (ЗАО

58

«Вектор-Бест», Новосибирск), а для проявления реакции – высокоочищенные и меченные пероксидазой хрена поликлональные кроличьи антитела к а2-МГ или к ЛФ. В качестве объекта исследования использовались высокоочищенные препараты белков (а2-МГ или ЛФ), а также образцы сыворотки крови женщин, участвовавших в исследовании.

Установлено, что препараты а2-МГ и ЛФ демонстрируют дозозависимое связывание с антигеном (табл.4).

Таблица 4

Зависимость активности связывания а2-МГ и ЛФ с антигенами Chlamydia trachomatis от концентрации белка в образце

Однако изучение концентраций подобных комплексов в образцах сыворотки не подтвердило выявленную тенденцию. Оптическая плотность в лунках с образцами в норме и на фоне антителоносительства не различалась и составила в среднем 0,066±0,010 ед. ОП для а2-МГ и 0,010±0,003 ед. ОП для ЛФ при фоновых значениях 0,095 и 0,026 соответственно.

59

Таким образом, нами установлена возможность прямого связывания а2МГ и ЛФ, обладающих антибактериальной активностью, с антигенами Ch. trachomatis, что может играть определенную роль в патогенезе хламидиоза, в том числе на фоне беременности. Однако в целом количество данных комплексов невелико, либо они быстро выводятся из циркуляции. Вследствие этого, чувствительность метода иммуноферментного анализа недостаточна для определения наличия подобных комплексов в сыворотке крови в диагностических либо прогностических целях.

Содержание циркулирующих комплексов иммунорегуляторного а2-МГ c антителами класса G несколько выше и определяется ИФА у всех женщин как при физиологической беременности, так и на фоне антителоносительства. Наблюдается тенденция к повышению уровней иммунокомплексов на фоне антителоносительства, особенно выраженная у некоторых женщин (около 30%) и отражающая, скорее всего, увеличение количества дефектных форм а2-МГ со сниженной функциональной активностью, что косвенно способствует хронизации заболевания. Необратимые конформационные повреждения а2-МГ, расцениваемого в этом случае как чужеродный иммунной системой, могут активировать синтез аутоантител к транспортируемым им соединениям (в т.ч. и АТ к HSH 60, которые обнаружены у 29% антителоносительниц), способствовать усилению аутоиммунного компонента заболевания, прямому повреждению тканей плаценты и развитию ВУИ. Однако данные изменения подвержены высокой индивидуальной вариабельности и разработанные тестсистемы малоприменимы при прогнозировании состояния новорожденного.

3.3. Уровни некоторых реактантов острой фазы в сыворотке крови рожениц с IgG антителами к Chlamydia trachomatis

Согласно полученным данным, при рождении здорового ребенка в норме и у рожениц при антителоносительстве, уровень альбумина в сыворотке крови

60

был сопоставим по значениям. Однако при наличии клинических признаков внутриутробного инфицирования он статистически значимо отличался от контрольных показателей здоровых рожениц (табл.5.). В норме содержание альбумина в сыворотке крови было 41,53 г/л, в группе женщин, родивших здоровых детей - 40,75 г/л, а у родивших детей с ПВИ снижалось до 38,73 г/л. Стандартное отклонение и ошибка средней были выше при антителоносительстве. Уровень менее 35 г/л обнаружен в 3 % контрольной группы, у 19 % антителоносительниц, родивших здорового ребенка и у 17 % женщин, родивших детей с ПВИ и осложненным течением раннего неонатального периода.

Таблица 5

Значения ошибка средней (±m) и стандартное отклонение (SD) при исследовании острофазовых белков в сыворотке крови в группах рожениц

с IgG к Chlamydia trachomatis

антителоносительстве (рис.6) была достоверно (в 5,4 раза) выше контрольных значений, вне зависимости от состояния новорожденного.