Гистологическийметодисследованиябиоптатовслизистойоболочки желудка
Дляпроведениягистологическогоисследованияподготавливалисрезы
препаратовтолщиной4-5мкмокрашивалигематоксилиномиэозином.Последепарафинированияипоследующегообезвоживаниявэтиловомспиртевосходящейконцентрации,срезыокрашивалигематоксилиномиэозином,пикрофуксиномпометодуВанГизона(дляопределениявыраженностифиброза),альциановымсинимприрН1,0(дляопределенияметаплазии),атакжепроводилиокраскупометодуРомановского-Гимза(длявыявленияНР).Оценкапрепаратовпроводиласьпостандартнойвизуально–аналоговойшкале[9,166,168].
ВпрепаратахизСОтелажелудкапроводиласьоценкаочаговойдеструкциижелез –морфологическогокритериядиагностикиаутоиммунногогастритаудетей[10].
ПриэтомвобоихбиоптатахпроводиласьоценкастепениотекаСОЖ,фиброза,атрофии,метаплазии,гиперсекрециислизи,определялосьналичиекровоизлиянийимикротромбозов,изучалсясоставклеточногоинфильтрата,определялисьлимфоидныефолликулы.Дляоценкииспользовалиединыйпротокол гистологическогообследования(см.приложение1).
ГистологическоеисследованиебиоптатовслизистойоболочкижелудкапроводилосьдоцентомкафедрыпатологическойанатомииГосударственногобюджетногообразовательногоучреждениявысшегопрофессиональногообразования"Северо-ЗападныйгосударственныймедицинскийуниверситетимениИ.И.Мечникова"МинистерстваздравоохраненияРоссийскойФедерациидоцентомкафедрыпатологическойанатомии,к.м.н.А.Н.Петровским.
Иммуногистохимический метод исследованиябиоптатовслизистойоболочкижелудканаВэб
ИммуногистохимическоеисследованиебиоптатовслизистойоболочкинавирусЭпштейна–Барр(ВЭБ)проведено35пациентам.ВкачествепервыхантителиспользовалимоноклональныеантителаклатентномумембранномупротеинувирусаЭпштейна–Барр(производствоDAKO).ВкачествепозитивногоконтроляиспользоваласьтканьлимфомыХоджкина,вкачественегативного–блокирующаясыворотка.ГистоморфологическоеисследованиебиоптатовслизистойоболочкижелудкапроводиласьнакафедрепатологическойанатомииГосударственногобюджетногообразовательногоучреждениявысшегопрофессиональногообразования"Северо-ЗападныйгосударственныймедицинскийуниверситетимениИ.И.Мечникова"МинистерстваздравоохраненияРоссийскойФедерации.
ОпределениеаутоантителкН+/К+-АТФазеобкладочныхклетокжелудкаифакторуКастла
ДлявыявленияантителкантителкН+/К+-АТФазеобкладочных(париетальных)клетокжелудкаприменялсяметоднепрямойиммунофлуоресценции(нРИФ).
АнтителакН+/К+-АТФазеобкладочныхклетоквыявлялинатройномсубстратекриосрезовтканейкрысы–желудок,почкаипеченьcиспользованиемкоммерческихнаборов(Euroimmun,Германия).Образцысывороткипациентовиконтрольныесывороткиразводилибуферомдляобразцовивносилисьвлункинаслайдывразведении1/40.Инкубировалисьвовлажнойкамере30минут.Затемпроводилиотмывкубуфером1раз5минут.Послевовселункивносилиантисывороткупротивиммуноглобулиновчеловека(IgGAM),меченныхфлуоресцеиномвторичныхантител(ФИТЦ).Инкубировали30минутвовлажнойкамереипроводили
отмывкубуферомствином1раз5минут.Далеенаслайднаносилимонтирующуюжидкостьипокрывалипокровнымстеклом.РезультатоценивалиспомощьюлюминисцентногомикроскопаEUROStar,EUROIMMUN(Германия).
Результатреакцииописывалсявтитре(норма<1:40,патологическоезначениевышеилиравно1:40).ПриобнаруженииантителН+/К+-АТФазеобкладочныхклетокпроводилиопределениеконечноготитра(рисунок2).
Рисунок2.Непрямаяиммунофлюоресценция(нРИФ);флюоресценцияантителН+/К+-АТФазеобкладочныхклеток,разведениесыворотки1:160,увеличениех400.