- •ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
- •АКТУАЛЬНОСТЬ
- •Ген klotho (13q12)
- •ЦЕЛЬ
- •ЗАДАЧИ
- •МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- •Получение первичных культур
- •Первичная культура клеток глиобластомы человека, 40х
- •Плазмида с геном sKL
- •МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- •Контроль гиперэкспрессии
- •Экспериментальное исследование in vitro
- •Rd: кривые роста
- •Rd: МТТ-тест
- •Rd: механизмы действия
- •Rd: механизмы действия
- •А-172: кривые роста
- •А-172: МТТ-тест
- •А-172: механизмы действия
- •А-172: механизмы действия
- •Caco-2: кривые роста
- •Caco-2: МТТ-тест
- •Caco-2: механизмы действия
- •Caco-2: механизмы действия
- •Глиобластома: МТТ-тест
- •ВЫВОДЫ
- •БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ!
Контроль гиперэкспрессии
Праймеры для ПЦР:
•Forvard: CACAACCTCCTCCTGGCTCAT
•Reverse: TCCAGTGAGAGCTTAGGGCA
Зонд:
•CCGTCCCACTCAGGGAGGTCA, меченый FAM
Продукты секвенирования (64-71 нуклеотид):
•С прямого праймера: GCATCTCTACAATACTTCTTTCCGTCCCACTCAGGGAG GTCAGGTGTCCATTGCCCTAAGCTCTCACTGGA
•С обратного праймера: GTGAGGACGGAAAGAAGTATTGTAGAGATGCCAGAC TTTGGCATGAGCCAGGAGGAGGTTGTGA
M m, n = 12, U-критерий
Экспериментальное исследование in vitro
Рабдомиосаркома |
Глиобластома |
Рак ободочной |
(Rd) |
(А-172) |
кишки (Caco-2) |
Индукция гиперэкспрессии гена klotho
Анализ кривых роста |
МТТ-тест |
Резазуриновый тест |
Оценка активности ЛДГ |
Исследование включения нейтрального красного |
Оценка интенсивности синтеза ДНК |
Определение активности каспаз |
Глиобластома
(клинический
материал)
Индукция
гиперэкспрессии гена klotho
МТТ-тест
Rd: кривые роста
M m, n = 10
Rd: МТТ-тест
M m, n = 30
Rd: механизмы действия
M m, n = 30 |
M m, n = 18 |
M m, n = 30 |
Rd: механизмы действия
M m, n = 8 |
M m, n = 30 |
А-172: кривые роста
M m, n = 10, U-критерий (24ч.)
А-172: МТТ-тест
M m, n = 30
А-172: механизмы действия
M m, n = 30 |
M m, n = 18 |
M m, n = 30 |
А-172: механизмы действия
M m, n(c.) = 8, |
M m, n(c.) = 24, |
n(kl.) = 12, U-критерий |
n(kl.) = 19 |