Димеризация белков межмолекулярными дисульфидными мостиками:
прямая:
|
|
SH |
|
|
SH |
|
|
S |
|
S |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
PK |
|
SH |
+ PK |
|
SH |
H2O2 |
PK |
|
S |
|
S |
|
|
PK |
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
||||||||||
неактивные мономеры |
активный димер |
|
||||||||||||
обратная: |
|
|
PK RP |
SH |
H2O2 |
SH |
неактивный комплекс
PK |
+ |
|
S |
|
RP |
S |
|||
|
|
|||
активная РК |
|
|
||
Образование дитирозиновых связей:
|
|
Р |
+ Р |
H2O2/ |
|
|
Р |
|||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|||||||||||||||||
|
|
пероксидаза |
||||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Y2 Y2 Y2 |
||||||
Y Y Y |
Y Y Y |
|
|
|||||||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
Р |
|
|
|
|
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
Металл-катализируемое окисление
Fe- или Cu- содержащий
Р
MFO оксидативная (ROS) модификация
Fe- или Cu- содержащий
Р
Методы изучения АФК
Люцигенин - хемилюминесцентный субстрат для определения О2
в клетке.
Luc2 LucH O2
диоксетан.произв h
DCFH - 2’,7’-дихлорфлуоресцин - DCFH-DA нефлуоресцирующий
DCF - 2’,7’-дихлорфлуоресцеин - флуоресцирующий
DCFH DA ЭСТЕРАЗЫ DCFH ОКИСЛ. DCF
Флуориметрический метод, основанный на способности гем-пероксидаз катализировать Н2О2-зависимую димеризацию замещенных фенольных элементов.
Высокая специфичность и чувствительность к Н2О2.
Наиболее часто используется пероксидаза хрена.
Электрон-спиновая резонансная спектроскопия - единственный аналитический метод.
Метод спиновых ловушек - нитроны или нитрозосоединения.
РЕЗЮМЕ:
•АФК не только вредные побочные продукты клеточного метаболизма, но и важные регуляторы жизнедеятельности клетки.
•Уровень АФК строго контролируется
•Передача сигналов в клетке с помощью АФК осуществляется путем оксидативной модификаций с клеточными компонентами, такими как киназы, белки или ДНК.