Praktikum_gistologia

Препарат 6. «Неорганические включения в клетках (железо в макрофагах селезенки)» (обработка берлинской лазурью по Перлсу). Выявленные с помощью реакции Перлса включения с неорганическим железом окрашены в синий цвет.

Препарат 7. «Комплекс Гольджи в нервных клетках» (а - световая микроскопия, б - трансмиссионная микроскопия, в – конфокальная микроскопия).

Материалы для самоконтроля

1.Современные методы гистологических исследований.

2.Основные этапы приготовления гистологического препарата.

3.Понятие о гистологических красителях.

4.Какие требования предъявляются к гистологическому рисунку?

Контрольные тесты

Методика решения тестов приведена в приложении 4 данного руководства.

Вопрос 1. Как называется способность структур окрашиваться в цвет, отличающийся от цвета красителя в растворе?

1.Оксифилия.

2.Нейтрофилия.

3.Метахромазия.

4.Базофилия.

5.Полихроматофилия.

Вопрос 2. Окрашивание гистологического препарата производится с целью:

1.Повысить разрешающую способность микроскопа.

2.Обеспечить сохранность препарата.

3.Обеспечить контрастность гистологических объектов.

4.Зафиксировать препарат.

Вопрос 3. Разновидности электронной микроскопии:

1.Люминесцентная.

2.Ультрафиолетовая.

3.Трансмиссионная (просвечивающая).

4.Сканирующая.

5.Поляризационная.

Вопрос 4. Гематоксилин:

1.Является гистологическим красителем.

2.Окрашивает цитоплазму в розовый цвет.

3.Служит для выявления базофильных структур.

4.Окрашивает ядра клеток в сине-фиолетовый цвет.

– 11 –

Учебно-исследовательские задачи

1.В ходе диагностического исследования заболевания печени у пациента получен биопсийный материал. Как быстро приготовить гистологический препарат (срез печени)?

2.Препарат хорошо просматривается при малом увеличении микроскопа, но не фокусируется при большом увеличении. Какая ошибка допущена при его микроскопировании?

Задания для самостоятельной работы

1.Нарисуйте схему строения микроскопа и схему хода лучей в микроскопе.

2.Проранжируйте (перечислите в правильной последовательности) основные этапы приготовления гистологического препарата: заключение в специальные смолы или бальзам, окрашивание, приготовление срезов, обезвоживание, фиксация, накрыть покровным стеклом, взятие материала для исследования, уплотнение.

Литература

1.Данилов Р.К. Гистология. Эмбриология. Цитология. Учебник для студентов медицинских вузов. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. – С.15-21.

2.Гистология, эмбриология, цитология: учебник / Ю.И.Афанасьев, Н.А.Юрина, Е.Ф.Котовский и др.; под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. – 6-е изд. перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013.

– С.21-36.

– 12 –

СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ТКАНЕВЫХ КЛЕТОК. ИНТЕРФАЗНОЕ ЯДРО.

ДЕЛЕНИЕ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК

Цель занятия

Знать строение интерфазного клеточного ядра и его роль в передаче наследственной информации; морфофизиологические изменения в ходе интерфазы, профазы, метафазы, анафазы и телофазы митоза. Уметь объяснить ультраструктуру ядра в связи с его функциональной активностью; диагностировать фазы митоза. Иметь представления о механизмах передачи генетической информации из ядра в цитоплазму, роли различных форм РНК и их участии в синтезе белков цитоплазмы. Иметь представления об атипических митозах, эндорепродукции, полиплоидизации.

Работа с препаратами. Ориентировочная основа действий

Задание 1. Препарат (см. рис. 1) «Нервные клетки чувствительного (спинномозгового) узла» (окраска - гематоксилин и эозин). Найти крупные нервные клетки и при большом увеличении обратить внимание на светлые сферические ядра, расположенные в центре клетки. Основная масса гетерохроматина расположена по периферии ядра. Хорошо выявляется интенсивно окрашенное ядрышко. Зарисовать клетку и обозначить: ядро, гетерохроматин, ядрышко, цитоплазму, вспомогательные клетки.

Задание 2. Изучите электронные микрофотографии: а) ядро клетки в интерфазе, б) ядрышко, в) ядерная оболочка. Обратите внимание на особенности субмикроскопического строения этих структур.

Задание 3. Электронная микрофотография ядра. Обратить внимание на особенности строения ядерной оболочки. Найти наружную ядерную мембрану и внутреннюю ядерную мембрану, ядерные поры и перинуклеарное пространство. Рассмотреть нуклеоплазму, ядрышко, эухроматин и гетерохроматин. Сделать схематический рисунок и обозначить все вышеперечисленные ультраструктурные компоненты ядра.

Задание 4. Препарат «Митоз в растительных клетках корешка лука»

(окраска - железный гематоксилин). Изучить препарат. Найти митотически делящиеся клетки.

Описание препарата

В клетках высших растений митоз протекает сходно с тем, что наблюдается в животных клетках. Удобным объектом для изучения митоза служат быстро растущие части растений, в частности – кончики корня. Отчетливее всего митотически делящиеся клетки видны в участке, расположенном несколько выше кончика корня. Интерфазные клетки прямоугольной формы с четко выраженной двухконтурной оболочкой содержат сферическое ядро с одним или двумя крупными ядрышками, мелкозернистым гетерохроматином. У клеток, находящихся в профазе, хромосомы расположены

– 13 –

ввиде клубка, ядерная оболочка и ядрышко исчезают. В метафазе хромосомы собираются на экваторе клетки, формируя метафазную пластинку, или материнскую звезду. Анафаза выявляется по расхождению хромосом к противоположным полюсам клетки. Телофаза характеризуется цитотомией, в формирующихся ядрах дочерних клеток хромосомы располагаются

ввиде клубка.

Задание 5. Электронная микрофотография митотически делящейся клетки. Рассмотреть электронную микрофотографию и определить фазу митоза, в которой находится эта клетка.

ДЕМОНСТРАЦИОННЫЕ ПРЕПАРАТЫ

Препарат «ДНК в ядрах клеток» (метод Фельгена). При большом увеличении рассмотреть крупные нервные клетки спинномозгового узла кошки, а в ядрах - мелкие глыбки ДНК, окрашенные в различные тона красного цвета, расположенные в ядре неравномерно. Цитоплазма и ядрышко остаются неокрашенными.

Материалы для самоконтроля

1.Ультраструктура и функции интерфазного ядра клетки.

2.Какое строение имеет интерфазная хромосома?

3.Понятие о митотическом цикле и его отличии от жизненного цикла клетки.

4.Митоз и его фазы.

5.Какова роль клеточного центра при митозе?

6.Чем характеризуются обновляющиеся, растущие и стационарные клеточные популяции?

7.Регуляция митотической активности клеток.

8.Эндорепродукция. Атипические митозы.

Контрольные тесты

Вопрос 1. Ядрышко образовано:

1.Гранулярным компонентом.

2.Фибриллярным компонентом.

3.Гетерохроматином.

4.Нуклеолеммой.

Вопрос 2. В состав интерфазного ядра не входит:

1.Везикулярные тельца.

2.Хромосомы.

3.Нуклеоплазма.

4.Эухроматин.

– 14 –

Вопрос 3.Спирализация и конденсация хроматина характерна для:

1.Метафазы.

2.Анафазы.

3.Профазы.

4.Интерфазы.

Вопрос 3. Какие компоненты транспортируются через ядерные поры в цитоплазму?

1.Гетерохроматин.

2.Субъединицы рибосом.

3.Фрагменты ДНК.

4.Эухроматин.

Учебно-исследовательские задачи

1.Ядро клетки имеет крупное ядрышко, мало гетерохроматина. С каким функциональным состоянием клетки это связано?

2.В каком периоде жизненного цикла находится каждая из двух тетраплоидных клеток, если одна из них малодифференцированная, а другая

-высокодифференцированная?

Задания для самостоятельной работы

1.Сделать схематический рисунок ультраструктуры ядра, обозначить его основные компоненты.

2.Зарисовать схему строения ядерной поры.

3.Нарисовать схему жизненного цикла клетки.

Литература

1.Данилов Р.К. Гистология. Эмбриология. Цитология. Учебник для студентов медицинских вузов. – М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. – С.28-30, 40-44, 61-66.

2.Гистология, эмбриология, цитология: учебник / Ю.И.Афанасьев, Н.А.Юрина, Е.Ф.Котовский и др.; под ред. Ю.И.Афанасьева, Н.А.Юриной. – 6-е изд. перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013.

– С. 51-55, 83-100.

– 15 –

СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЦИТОПЛАЗМЫ. ОРГАНЕЛЛЫ

Цель занятия

Знать ультраструктуру органелл клетки. Уметь различать в препаратах и на электронных микрофотографиях органеллы и объяснить степень развития последних в связи с функцией клетки. Иметь представление о поверхностном аппарате клеток и циторецепторах.

Работа с препаратами. Ориентировочная основа действий

Задание 1. Препарат (см. рис. 2) «Комплекс Гольджи в нервных клетках чувствительного (спинномозгового) узла» (окраска - импрегнация тетраоксидом осмия). При малом увеличении найти на срезе шаровидную или овоидную нервную клетку с ядром и под большим увеличением рассмотреть в ней сферическое ядро с ядрышком. В цитоплазме этой клетки рассмотреть комплекс Гольджи в виде структур различной формы - зернышек, палочек, нитей, окрашенных в темно-коричневый или черный цвет. Зарисовать клетки и обозначить ядро, цитоплазму, комплекс Гольджи.

1

2 3

Рис.2. Комплекс Гольджи в нервных клетках. 1 – ядро, 2 – цитоплазма, 3 – комплекс Гольджи.

Задание 2. На электронных микрофотографиях рассмотреть отдельные структурные компоненты клетки:

а) гранулярная эндоплазматическая сеть – обратить внимание на взаимоотношение мембранных структур и рибосом и оценить численность рибосом на единице длины мембраны;

б) агранулярная эндоплазматическая сеть – рассмотреть мембранные структуры и обратить внимание на отсутствие рибосом на их поверхности; в) митохондрия – рассмотреть наружную и внутреннюю митохондриальные

мембраны, кристы и митохондриальный матрикс; г) лизосомы – рассмотреть мембрану и тонкодисперсное гомогенное

электронноплотное содержимое;

– 16 –

д) комплекс Гольджи (пластинчатый комплекс) – рассмотреть совокупность мембранных цистерн, вакуоли и микропузырьки;

е) центросомы – рассмотреть две центриоли (диплосома), расположенные под углом друг к другу, и периферически лежащие микротрубочки;

ж) пероксисома – рассмотреть тонкую мембрану, мелкозернистый гомогенный матрикс, электронноплотную сердцевину и тесную пространственную связь с эндоплазматической сетью;

з) цитоплазматическая мембрана (плазмолемма) – рассмотреть детали ее строения;

и) микрофиламенты и микротрубочки – рассмотреть топографию этих структур в клетке.

Задание 3. Электронная микрофотография цитоплазмы. Внимательно изучите электронную микрофотографию. Нарисуйте схематический рисунок и обозначьте гиалоплазму, канальцы гранулярной и агранулярной эндоплазматической сети, рибосомы, митохондрии (а в них - матрикс, наружную мембрану и внутреннюю мембрану, кристы), комплекс Гольджи (а в нем - цистерны, микропузырьки и вакуоли), лизосомы, пероксисомы, микротрубочки и микрофиламенты, центросомы, плазмолемму.

Задание 4. Рассмотреть электронную микрофотографию клетки (эндотелиоцит), находящийся в составе стенки кровеносного капилляра. Обратить внимание на наличие многочисленных пузырьков (везикул), участвующих в транспорте веществ через стенку капилляра.

Задание 5. Электронная микрофотография макрофага. Рассмотреть микрофотографию и обратить внимание на наличие лизосом в цитоплазме.

ДЕМОНСТРАЦИОННЫЙ ПРЕПАРАТ

Препарат «РНК в цитоплазме и ядрышке клеток» (окраска - метиловый зеленый и пиронин). При большом увеличении в цитоплазме нервных клеток рассмотреть распределение РНК (окрашена пиронином в красный цвет). Четко выявляется ядрышко.

Материалы для самоконтроля

1.Определение и классификация клеточных органелл.

2.Строение и функции органелл общего значения: митохондрий, эндоплазматической сети, комплекса Гольджи, лизосом, рибосом, клеточного центра, микротрубочек.

3.Чтотакоеповерхностныйаппаратклетки?Каковыегоструктураифункции?

4.Понятие о клеточных рецепторах.

Контрольные тесты

Вопрос 1. В клетке, вырабатывающей белки «на экспорт», хорошо развиты: 1. Гранулярная эндоплазматическая сеть.

– 17 –

ВКЛЮЧЕНИЯ

Цель занятия

Знать строение, химический состав и особенности окраски основных включений и их классификацию. Уметь отличать на гистологических препаратах и электронных микрофотографиях включения от других цитоплазматических структур. Иметь представление о механизмах формирования включений и о роли комплекса Гольджи в этих процессах; о различных способах секреции.

Работа с препаратами. Ориентировочная основа действий

Задание 1. Препарат (рис. 3) «Жировые включения в клетках печени аксолотля» (окраска - тетраоксид осмия и сафранин). Найти клетки печени и при большом увеличении обратить внимание на наличие в их цитоплазме жировых включений, расположенных равномерно. Зарисовать клетки и обозначить ядро, жировые включения (капли жира), границы клеток.

1

2

3

Рис.3. Жировые включения в клетках печени.

1 – ядро, 2 – жировые включения в цитоплазме, 3 – плазмолемма.

Описание препарата

На препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, жировые включения изучать нельзя, так как при обработке препаратов спиртом и эфиром жир растворяется. Для выявления жировых включений требуются специальные гистохимические методики и элективные красители. Под малым увеличением микроскопа видно, что в цитоплазме гепатоцитов (имеющих полигональную форму) содержатся многочисленные включения жира в виде круглых черных капель разного размера. Они окрашены тетраоксидом осмия. Цитоплазма, ядро и ядрышко окрасились сафранином в розовый или красный цвет.

– 19 –

Задание 2. Препарат (рис. 4) «Пигментные включения в клетках кожи»

(препарат не окрашен). Найти звездчатые клетки коричневого цвета и при большом увеличении обратить внимание на расположенный в виде мелких зерен в цитоплазме и в отростках пигмент меланин. Зарисовать клетки и обозначить цитоплазму, зерна пигмента меланина.

1

2

Рис.4. Пигментные включения. 1 – место локализации ядра, 2 – пигментные гранулы (меланин) в цитоплазме

Задание 3. Электронная микрофотография секреторной экзокринной бокаловидной клетки. Сделать схематический рисунок и обозначить ядро, митохондрии, эндоплазматическую сеть, комплекс Гольджи, слизистые секреторные гранулы (клеточные включения) в апикальной части. Следует запомнить, что в экзокриноцитах секреторные гранулы всегда накапливаются в апикальной части цитоплазмы.

Задание 4. Электронная микрофотография эндокринной клетки. Обратите внимание, что в эндокриноцитах секреторные гранулы занимают базальную часть цитоплазмы.

Задание 5. Рассмотреть электронную микрофотографию эндотелиоцита стенки кровеносного капилляра. Обратить внимание на наличие в цитоплазме многочисленных пузырьков (везикул), участвующих в транспорте веществ через стенку капилляра.

– 20 –