- •Методические рекомендации
- •«Изучение свойств ферментов»
- •Качественные реакции обнаружения ферментов
- •Работа 1. Ферментный гидролиз крахмала под действием амилазы
- •Общие свойства ферментов
- •Работа 2. Влияние температуры на активность ферментов
- •Работа 3.Специфичность действия ферментов
- •Работа 4. Влияние рН среды на активность ферментов
- •Работа 15. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов
Методические рекомендации
к лабораторным занятиям по дисциплине «Биохимия»
для студентов специальности «Биология»
Рассмотрены и рекомендованы на заседании кафедры химии
протокол №7 от 25.01.2012
Занятие №3
ОСНОВЫ ФЕРМЕНТАТИВНОГО КАТАЛИЗА
Цель занятия:изучить классификацию, номенклатуру, строение и свойства ферментов, основы механизма действия и кинетику ферментативных реакций.
Теоретическая часть:
1.Свойства и структурная организация ферментов, понятие об активных и регуляторных центрах, коферментах и простетических группах.
2. Изоферменты и множественные формы ферментов.
3. Номенклатура и классификация ферментов.
4. Механизм ферментативного катализа.
5. Единицы ферментативной активности.
6.Зависимость скорости ферментативных реакций от концентрации фермента и субстрата, рН и температуры.
7. Активация и ингибирование ферментов.
8. Принципы регуляции ферментативных реакций.
Упражнения и задания:
Молекулярная масса пируваткарбоксилазы М = 183 000. Рассчитайте молекулярную активность фермента, если его удельная активность составляет 1,2 • 103Е.
Рассчитайте удельную активность каталазы (М= 252 000) и лактатдегидрогеназы (М == 140 000), если молекулярная активность этих ферментов при температуре 25°С, оптимальном рН и полном насыщении субстратом равна 5 • 106и 3,7 • 104соответственно.
Рассчитайте удельную активность карбоангидразы (М =30 000), гексокиназы (М = 45 000) и альдолазы(М =142 000), если их молекулярная активность равна 0,96 • 108; 1,7 • 104и 4,2 • 103соответственно.
Рассчитайте активность каталитических центров каталазы, лактатдегидрогеназы и алкогольдегидрогеназы (молекулярная активность их соответственно равны 5 • 106; 3,7 • 104и 2,7 • 104), если число каталитических центров у первых двух ферментов равно четырем, а у последнего — двум.
Определите удельную активность (а) пируваткиназы (М = 237 000), (б) цитохром-С-редуктазы(М= 75 000) и (в) бутирил КоА-дегидрогеназы(М =200 000), исходя из значений их молекулярной активности: 6 • 103; 1,3 • 104и 2 • 103соответственно.
Напишите систематические и рабочие названия, укажите класc фермента, катализирующего реакцию:
1) D-глюкозо-1-фосфат + H2O = D-глюкоза +ортофосфат.
2) L-аспарагин + H2O = L-аспартат +NН3.
3) Седогептулозо-7-фосфат + D-глицеральдегид-3-фосфат= D-рибозо-5-фосфат + Д-ксилулозо-6-фосфат.
4) Ацетил-СоА + ортофосфат = СоА + ацетилфосфат.
5) Оксалат = формиат + СО2.
6) (1,4-α-D-глюкозил)n + ортофосфат = (1,4-α-D-глюкозил)n-1+ α-D-глюкозо-1-фосфат.
7) L-лизин = кадаверин + CO2.
8) L-метионин = D-метионин.
9) АТР + D-гексоза=АДР+D-гексозо-6-фосфат.
10) АТР + ацетат + СоА = AMP +пирофосфат + ацетил-СоА.
11) UDP-глюкоза + (1,4-α-D-глюкозил)n= UDP + (1,4-α-D-глюкозил)n+1.
12) АТР + протеин = АДР + фосфопротеид.
13) АТР + креатин = АДР + фосфокреатин.
14) L-глутамат =Д-глутамат.
15) L-аспартат + 2-оксоглутарат = оксалоацетат + L-глугамат.
16) АТР + D-глюкоза = АДР + D-глюкозо-6-фосфат.
17) Мочевина + H2O → 2NH3 +СО2.
18) Пирофосфат + Н2О = 2-ортофосфат.
19) L-глутамат + H2O + NAD+ = 2-оксоглутарат +NН3+NADH.
20) Ксантин + Н2О + O2 =урат + перекись водорода.
7. Написать реакцию, катализируемую ферментом, указать рабочее название и шифр фермента.
1) Алкоголь: NAD+оксидоредуктаза.
2) L-лактат: NAD+оксидоредуктаза.
3) L-малат: NAD+оксидоредуктаза.
4) Альдегид: NAD+оксидоредуктаза.
5) L-аланин: NAD+окгидорсдуктаза (дезаминирующая).
6) L-аминокислота; кислород оксидоредуктаза (дезаминирующая).
7) β-D-глюкоза: кислород 1-оксидоредуктаза.
8) Пируват: кислород оксидоредуктаза (фосфорилирующая).
9) L-аминокислота: кислород оксидоредуктаза (дезаминирующая).
10) UDP-глюкоза: D-фруктозо-6-фосфат 2-α-глюкозилтрансфераза.
11) АТР: тиамин пирофосфотрансфераза.
12) Ацетилхолин-ацетилгидролаза.
13) D-глюкозо-6-фосфат фосфогидролаза.
14) Карбокси-лиаза 2-оксокислот.
15) АТР-пирофосфат-лиаза (циклизирующая).
16) Аланинрацемаза.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №3