§ 2. Род Flavivirus.

Род включает в себя 68 вирусов с аналогичными антигенными детерминантами и физико-химическими свойствами. Патогенными для человека являются: 1) вирус желтой лихорадки; 2) вирус японского энцефалита; 3) вирус русского весенне-летнего энцефалита; 4) вирус омской геморрагической лихорадки; 5) вирус лихорадки Денге; 6) вирусы Вессельборн; 7) вирусы энцефалитов Сент-Луи; 8) вирусы энцефалитов долины Мюррей; 9) вирусы энцефалитов Росио; 10) вирусы лихорадки Западного Нила; 11) вирус кьясанурского леса.

Флавивирусы, вызывающие энцефалиты, имеют РНК длиной 10,6-10,9_*10³ нуклеотидов. Род объединяет вирусы, передающиеся трансмиссивно посредством переносчиков-членистоногих.

Вирус русского весенне-летнего энцефалита. Старое название вируса – вирус клещевого энцефалита. История открытия. Вирусы русского весенне-летнего энцефалита впервые были выделены в 1937 г. Л.А. Зильбером, Е.Н. Левкович, Н.П. Чумаковым и др.

Особенности вирусов. Строение и стратегия размножения вируса типичны для всех флавивирусов. Вирионы сферической формы, диаметром 30-35 нм, с суперкапсидом (рис. 2). Капсид диаметром 20-30 нм. Геномная РНК кодирует 3 структурных белка: капсидный (С), мембранный (М), Е - протективный (суперкапсидный); и 5 неструктурных – NS. Неструктурный белок NS1 является протективным антигеном.

Антигенная структура. Вирусы русского весенне-летнего энцефалита имеют 3 антигенных варианта (подвида) – западный, восточный и возбудитель двухволнового менингоэнцефалита.

Резистентность. Вирусы устойчивы к низким температурам: при -150˚С жизнеспособны до 1 года, а в высушенном состоянии – много лет, хотя при этом снижаются инвазионные свойства. При +16-18˚С вирусы сохраняются 10 дней, при 37˚С – в течение 1 суток. Повышение температуры до +50˚С инактивирует вирус в течение 20 минут, а кипячение убивает его через 2 минуты, но в молоке при +60˚С вирусы погибают через 20 минут. При рН 1,2 вирусы устойчивы 4 ч, при рН 3 – до 24 ч, при рН 6,8-9,1 - до 7 суток. Вирусы чувствительны к ультрафиолетовому облучению, эфиру.

Культивирование. Для культивирования вирусов используются: белые мыши, куриные эмбрионы, перевиваемые клеточные культуры. Вирусы интенсивно размножаются в мозговой ткани белых мышей; через 4-8 дней после заражения животные заболевают с развитием парезов и параличей конечностей, частыми судорогами и быстрой смертью. Для культивирования используются 8-9-дневные куриные эмбрионы, заражение которых проводится на хорион-аллантоисную оболочку или в желточный мешок с последующей инкубацией при 37˚С в течение 72 ч. В положительном случае через 72 ч наступает гибель эмбриона. Заражение клеточных культур сопровождается гибелью клеток.

Эпидемиология. Вирусы русского весенне-летнего энцефалита распространены от Дальнего Востока до стран Средней и Западной Европы. Встречаются также в западных областях Украины. Резервуаром и источником инфекции являются грызуны (бурундуки, белки, ежи, зайцы, хомяки, кроты, мыши), копытные (лошади, коровы, лоси, козы), псовые (лисы, волки), птицы, клещи. Механизм передачи инфекции – трансмиссивный. Переносчиками вирусов являются иксодовые клещи. Инфицирование человека возможно алиментарным путем при употреблении в пищу некипяченого коровьего и козьего молока. Сезонность весенне-летняя. Человек – тупиковый хозяин вирусов.

Патогенез. Проникновение вирусов в организм человека чаще происходит при нападении клещей. В течение всего периода кровососания вирус непрерывно переходит в организм человека. Реже вирусы проникают в организм через слизистую оболочку кишечника. Первичная репродукция вируса происходит в макрофагах и гистиоцитах кожи. Затем вирусы попадают в регионарные лимфатические узлы, где происходит их дальнейшее размножение. Из лимфатических узлов вирусы попадают в кровь, заносятся во внутренние органы, в том числе и в центральную нервную систему. Размножение вирусов в ткани головного и спинного мозга сопровождается разрушением нейронов с явлениями сателлитоза и нейронофагии. Наиболее выраженные дегенеративно-дистрофические процессы развиваются в передних рогах шейного отдела спинного мозга, в ядрах черепно-мозговых нервов и ретикулярной формации. При алиментарном заражении вначале наблюдается висцеральная фаза с вирусемией и репликацией вирусов во внутренних органах, а в дальнейшем возникает вторичная вирусемия с поражением центральной нервной системы (двухволновой менингоэнцефалит). Во внутренних органах отмечаются полнокровие, кровоизлияния в серозные и слизистые оболочки.

Клиника. Инкубационный период – от 3 до 21 дня (иногда до 60 дней), в среднем – 10-14 дней. Русский весенне-летний энцефалит характеризуется острым началом, лихорадкой, головной болью, тошнотой, рвотой, болью в спине, развитием ригидности затылочных мышц, параличей, парезов (часто повреждаются мышцы шеи и рук). Смертность – 5-30 %.

Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется гуморальный и клеточный иммунитет. Гуморальный иммунитет обеспечивается типоспецифическими антителами, клеточный иммунитет – гиперчувствительностью замедленного типа. Иммунитет напряженный, пожизненный.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат кровь, спинномозговая жидкость, секционный материал (участки ткани мозга, печени, селезенки, почек, лимфатических узлов), клещи, молоко коз, коров, овец. Используются вирусоскопический, вирусологический, серологический и молекулярно-генетический методы исследования.

Экспресс-диагностика заболевания проводится с применением люминесцентной микроскопии, РНГА, ИФА, РИА. Целью экспресс-диагностики является выявление антигена (РНГА, ИФА) и обнаружение Ig М (ИФА, РИА). При русском весенне-летнем энцефалите Ig М в крови больных появляются на 3-4-й день заболевания и сохраняются в высоких титрах на протяжении острого периода инфекции (до конца 5-6 недели), а затем их концентрация в течение 2 последующих лет постепенно снижается.

Вирусологический метод включает выделение вирусов на животных (новорожденные или 3-4-недельные мыши), в культурах клеток (фибробласты куриных эмбрионов, Vero, СПЭВ) или в куриных эмбрионах. Индикацию вирусов проводят по ЦПД, бляшкообразованию под агаровым покрытием, на основании гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификацию вирусов осуществляют в РТГА, РСК, РНГА, ИФА, РИА, РН, а также с помощью метода флюоресцирующих антител. Известным компонентом в реакциях идентификации являются антитела к вирусу русского весенне-летнего энцефалита.

При серологической диагностике следует учитывать, что в сыворотке крови больного ранее всего появляются антигемагглютинины (на 6-7-й день), затем – комплементсвязывающие антитела (на 12-14-й день) и позже всего – нейтрализующие антитела (на 3-4-й неделе). Серологическое исследование проводят в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. При отрицательном результате кровь берут повторно через 1-2 месяца после начала заболевания. Серологическая диагностика проводится с помощью РТГА, РСК, РН, ИФА, РИА, непрямого варианта метода флюоресцирующих антител. Диагностическим считается четырехкратное нарастание титра специфических антител. Известным компонентом серологических реакций является диагностикум, содержащий вирусы русского весенне-летнего энцефалита.

Молекулярно-генетический метод диагностики проводится с использованием ПЦР.

Лечение патогенетическое и симптоматическое. Показаны ремантадин и интерфероны.

Профилактика. Неспецифическая профилактика включает защиту человека от укусов клещей, использование репеллентов, термическую обработку молочных продуктов. При выходе из леса обязательно проводятся само- и взаимоосмотры. Обнаруженный клещ должен быть немедленно удален. Лицам, подвергшимся укусам клещей, должен быть введен противоклещевой иммуноглобулин (взрослым – по 3 мл, детям 10-15 лет – 2 мл) внутримышечно. Такая же доза должна быть введена повторно через неделю. Ведущую роль в профилактике играет вакцинация тканевой инактивированной вакциной (получена А.А. Смородинцевым и коллегами в 1939-40 гг.). Вакцинный штамм инактивирован формалином или ультрафиолетовым облучением с последующей хроматографической очисткой на макропористом стекле. Вакцина вводится подкожно двухкратно под лопатку. Детям от 4 до 7 лет вводят по 0,5 мл, детям старше 7 лет и взрослым – 1 мл. Вакцинация начинается в возрасте 4 лет. Полный курс вакцинации состоит из 4 инъекций. Первые 2 прививки делаются с интервалом 7-10 дней, третья – через 14-20 дней. Четвертая прививка проводится спустя 4-6 месяцев после третьей инъекции. Ревакцинации осуществляются ежегодно однократно перед эпидемическим сезоном в эндемических районах.