3. Практическая работа

Выполнение заданий.

Лабораторная работа № 1 Бактериологическое исследование микрофлоры слизистых оболочек носа

1. Сделать лабораторную работу «Бактериологическое исследование микрофлоры слизистых оболочек носа».

2. Цель работы: изучение морфологических, тинкториальных, культуральных свойств микроорганизмов, выделенных из смывов.

3. Методика проведения работы:

- взять смыв стерильным тампоном, поместить в солевой бульон

I этап:

- сделать мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, результат микроскопии зарисовать в протоколе;

- сделать посев на питательные среды: кровяной агар, ЖСА;

- поместить в термостат при 37 градусах на 24 часа.

II этап:

- просмотреть посевы, оценить выросшие колонии качественно и количественно, оценить наличие лецитиназы и гемолиза;

- сделать мазки, окрасить по Граму, микроскопировать;

- выделение чистой культуры, посев на скошенный МПА;

- поместить в термостат при 37 градусах на 24 часа.

III этап:

- идентификация выделенной культуры;

- посев на среды пестрого ряда;

- поставить реакцию плазмокоагуляции;

- определение чувствительности к антибиотикам методом бумажных дисков.

IV этап:

- учет результатов.

4) Результаты: внесение данных в протокол.

5) Выводы: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных свойств выявлен возбудитель (указать род, вид).

Лабораторная работа № 2 Изучение патогенных свойств представителей нормальной микрофлоры организма человека Оценка гемолитических свойств по наличию гемолиза на кровяном агаре с человеческими эритроцитами, на который высевают чистую культуру исследуемых лактобацилл со среды MRS. Учет результатов проводится после культивирования 2 сут в анаэробных условиях в термостате.

Лабораторная работа № 3 Исследование антииммуноглобулиновой активности лактобактерий.

Выращенные на MRS лактобактерии выдерживают сутки при 4^о С, отобирают надосадочную жидкость и смешивают в равных объемах с человеческой сывороткой, приготовленной в рабочем разведении по методу Манчини, инкубируют 1ч при 37^оС. Далее проводится исследование наличия иммуноглобулинов методом Манчини (встречный иммуноэлектрофорез), учитывют результаты по снижению количества иммуноглобулинов в исходной сыворотке по сравнению с контрольной.

4. Ситуационные задачи для разбора на занятии.

1) Алгоритм разбора задач

- прочитать внимательно условие задачи;

- ознакомиться с заданиями;

- дать ответ на поставленные вопросы;

- сделать выводы;

- составить план диагностики и терапии.

2) Пример задачи с разбором по алгоритму:

Задача №1. В бактериологическую лабораторию поступила мокрота из хирургического отделения от пациента с диагнозом: муковисцидоз, период обострения.

Задание.

1. Как влияет наличие системного хронического заболевания на состояние защитных сил организма?

2. Какие микроорганизмы могли вызвать поражение дыхательных путей у больных муковисцидозом?

3. Предложите план бактериологической диагностики. Как провести посев материала и идентификацию выделенных микроорганизмов.

4. Какие препараты целесообразно назначить в качестве антибиотикотерапии?

1. Муковисцидо́з (МВ) — системное наследственное заболевание, обусловленное мутацией гена трансмембранного регулятора белка и характеризующееся поражением желез внешней секреции, выраженными нарушениями

функций органов дыхания и желудочно-кишечного тракта, имеющее тяжелое течение и неблагоприятный прогноз.

2. Наиболее частыми микробными агентами у больных МВ являются Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae и Pseudomonas aeruginosa. Есть данные об увеличении частоты выделения Burkholderia cepacia (B. cepacia), для которой характерна полирезистентность к антибиотикам, E. coli, Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter anitratus, Alcaligenes spp.

3. Бактериологическая диагностика:

 Нативная бактериоскопия.

 Среды для первичного посева мокроты: кровяной агар, шоколадный агар, среда Эндо, желточно-солевой агар Чистовича, агар Сабуро, стретококковая жидкая среда.

 Бактериоскопия.

 Идентификация Staphylococcus aureus (характерный рост на Среде Чистовича, гр+ кокки, каталаза +, реакция плазмокоагуляции +, сбраживание маннита+).

 Идентификация Pseudomonas aeruginosa (рост на кровяном агаре, Эндо; гр- палочки, высев на среду Олькеницкого: зеленый пигмент, оксидаза+), при необходимости определение биохимических свойств ( Например, NEFERMtest24).

 Идентификация Haemophilus influenzae (характерный рост на шоколадном агаре – сероватые, сочные колонии, гр- коккобациллы, каталаза + , оксидаза -, уреаза +, β галактозидаза -, гемолиз -, редукция нитратов+, рост на простых средах -.

4. Антибактериальные препараты для постановки чувствительности при данном заболевании: парэнтеральные (цефтазидим, цефтриаксон, цефепим, гентамицин, тобрамицин, пероральные (ципрофлоксоцин, котримоксозол, азитромицин, амоксиклав)