2. Грамотрицательные аэробы 2.1. Род Псевдомонады

К роду Pseudomonasотносятся 18 видов (Ps.aeruginosa,Ps.fluorescens,Ps.cepacia,Ps.mallei,Ps.pseudomallei,Ps.fic-ketti,Ps.stutzeriи др.), которые могут вызвать тяжелые формы инфекций как внутрибольничных, так и ятрогенных типов. Наибольшую важность для медицины и ветеринарии пред­ставляютPs.aeruginosa,Ps.malleiиPs.pseudomallei. Эти микроорганизмы неприхотливы по питательным потребно­стям и способны выживать в условиях окружающей среды (HansenW., 1991).Ps.aeruginosaсохраняет жизнеспособность почти при полном отсутствии источников питания (TothD.etal., 1983).

Физиология, биохимия и родо-видовые дифференциально-диагностические признаки псевдомонад обобщенно представ­лены в работах Palleroni(1984), Рубан Е. Л. (1986), Мороз А. Ф. и соавт. (1988), Белякова В. Д. и соавт. (1990), Смирнова В. В., Киприановой Е. А. (1990). Достаточно успешными оказались попытки использования с диагностической целью способно­сти псевдомонад ассимилировать отдельные органические ве­щества. В результате спектры углеродного питания также эф­фективно применяются при идентификации, как и «пестрые ряды» для энтеробактерий (Смирнов В. В., Киприанова Е. А. (1990).

Отмечается бесперспективность разработки универсальных сред на основе антибиотиков и красителей для селективного выделения псевдомонад и быстрой их дифференциации от дру­гих грамотрицательных бактерий, так как диапазон видовой чувствительности псевдомонад к этим агентам очень широк (Смирнов В. В., Киприанова Е. А., 1990). По этой же причине выражается сомнение в пригодности подобных сред, уже раз­работанных GrantM.,HoltJ. (1977),WakisakaY.,KoizumiК. (1982).

Между тем, большие возможности в плане создания уни­версальных сред открывает использование ЭДТА и солей ба­рия, избирательно подавляющих различные виды Pseu­domonas, независимо от чувствительности их к антибиотикам и красителям.

До сих пор не существует строго регламентированного набо­ра тестов для идентификации Ps.aeruginosa. Как не утративший способности к сапрофитизму, он характеризуется выраженной биохимической активностью, обладает необходимым для дыха­ния набором ферментов, восстанавливает нитраты в нитриты, редуцируя их до газообразного азота, хотя последний тест, по даннымGirardiG(1980) может быть отрицательным у 42% штаммов. Характерным биологическим признакомPs.aerugi-

ч

55

nosa, значительно упрощающим идентификацию приблизитель­но 70—80% штаммов, является уникальная способность синтези­ровать водорастворимый феназиновый пигмент—пиоцианин, окрашивающий питательную среду в синезеленый цвет. Крометого, большинство культур образует зеленый, флуоресцирующий в Уф лучах, пигмент флуоресцеин или пиовердин, а также другие пигменты (пиорубин, пиомеланин, аоксифеназин). В некоторых случаях выявляются атипичные беспигментные (8—18%) илислабопигментированные формы (Мороз А. Ф. и соавт., 1988), что объясняется действием сопутствующей микрофлоры, антибио­тиков, недостатком кислорода. Имеется основание считать мела-нинобразующие штаммы более патогенными (Рожавин М. А., 1983).

Уникальным свойством Ps.aeruginosaявляется способность образования на плотных средах блестящего металлического налета (само название «aeruginosa» означает «покрытая нале­том цвета медной ржавчины»). Однако это свойство встречает­ся нестабильно у всех штаммов данного вида и Калина Г. П. (1984) подробно анализирует литературу о влиянии на выявле­ние этого признака состава среды культивирования. Автор экс­периментально проверил многочисленные комбинации раз­личных компонентов, используемых в средах (триптон «Difco», глицерин, сульфат калия, хлорид магния, нитрат калия, арги­нин, аспарагин, молоко), а также непосредственно среды для интенсификации блеска (МПА с 5% человеческой крови, сре­да с хлоридомN-цетилпиридиния, трехсахарный железный агар, две среды Берка: повышенной питательности за счет уве­личения содержания триптона и с меньшим содержанием пос­леднего, но с введением в состав аргинина). В результате раз­работана среда, содержащая МПА с повышенной концентра­цией пептона, молоко, 2, 3, 5-трифенилтетразолия хлорид иL-аргинина монохлорид, на которойPs.aeruginosa, за еди­ничными исключениями, образует металлический блеск высо­кой интенсивности. На практике можно упростить среду заме­нив МПА сухим порошковым агаром и исключив пептон, ар­гинин.

Идентификация беспигментных и слабопигментных штам­мов Ps.aeruginosaможет быть упрощена использованием сред, предложенныхKingE. (1954) для усиления образования пиоциа-нина (среда Кинга А) и флуоресцеина (среда Кинга В), а также сред Калиной Г. П. (1984) иDalyJ.etal. (1984).

Ps.aeruginosaхорошо растет и размножается на простых пи­тательных средах в аэробных условиях при 30—37°С и сохраняет эти свойства при 42°С. На поверхности питательного бульона или пептонной воды культуры образуют серовато-серебристую пленку. На МПА, средах Эндо или Плоскирева различают 5 ти­пов колоний: плоские неправильной формы, типа Е.coli, склад­чатые, слизистые и карликовые.

Ps.aeruginosaобладает слабой сахаролитической активно­стью и получает энергию путем окисления самых разнообраз­ных субстратов-сахаров и других углеводов. Окисление одного и того же вещества может происходить по разному в зависимо­сти от условий, при этом гликолиз и цикл Кребса не являются единственными механизмами биохимического превращения углеводов. Глюкоза может окисляться до 2-кетоглюконовой ки­слоты без образования газа в аэробных условиях, тогда как в анаэробных ферментации глюкозы вообще не происходит. При длительной (2—3 сут) инкубации все штаммы окисляют ксило­зу, арабинозу, маннозу (Анохина Р. В., 1973) и выявляют ос-га-лактозидазу (ИсхаковаX. И., 1980). Возбудитель инертен к лак­тозе, сахарозе, манниту, мальтозе (LanyiВ., 1968) и индолотри-цателен (ИсхаковаX. И., 1980). Протеолитические свойства, наоборот, хорошо выражены: разжижение желатина, свернутой кровяной сыворотки, гидролиз казеина. Родовым признаком является синтез цитохромоксидазы. Цитохромоксидазная про­ба—достаточно надежный тест для идентификации штаммовPs.aeruginosa. Этот микроб синтезирует триметиламин, прида­ющий культурам своеобразный запах, напоминающий жасмин, земляничное мыло или карамель.

В качестве таксономического для Ps.aeruginosaпризнака До-марадский И. В. (1975) рассматривает феномен радужного лизи­са при росте на плотных средах.

Нетребовательность к питательным веществам дает возмож­ность изолировать его на любых достаточно простых жидких и плотных средах. Однако, являясь ведущим возбудителем в пато­логическом материале, Ps. aeruginosa довольно часто находится в ассоциации с другими микроорганизмами, поэтому для его од­ноступенчатого выделения используется целый ряд элективных и дифференциально-диагностических сред. Они должны содер­жать химические соединения, являющиеся либо источником пи­тания только для синегнойной палочки, либо подавляющие рост ассоциативной микрофлоры, не задерживая при этом ее собст­венный рост.

К 1-ому типу можно отнести среды с ацетамидом( Буль С. М., Колкер И. И., 1978;HedbergМ., 1969;MosselD.etal., 1976), ко­торый используетсяPs.aeruginosaв качестве источника азота иуглерода, в отличие от других грамотрицателъных микроорганиз­мов и остальных видов рода Pseudomonas. Hedberg M. et al. (1969) рекомендуют для выделения из мочи и отделяемого гнойных ран среду Симмонса с заменой цитрата натрия на ацетамид (2%), по­скольку на ней полностью подавляется рост культур протея. В то же время, Шеина Э. П., Арутчева А. А. (1979) вновь предлагают выделятьPs.aeruginosaиз ассоциации с протеем просто на среде Симмонса.

56

57

KorthS. (1963) предложил хинно-кислую среду для иден­тификацииPs.aeruginosaиPs.fluorescens, исходя из способно­сти их использовать хинную кислоту в качестве источника уг­лерода.

Однако большинство разработок селективных сред ориен­тировано на химические соединения, ингибирующие рост бак­терий- ассоциантов Ps.aeruginosa. В связи с резистентностью к нитрофурановым препаратам для его выделения предложены питательные среды, в состав которых вводится одно из соеди­нений названной группы (Черномордик А. Б., 1971;CarlevaroС.etal., 1963;ThomA.etal., 1971). Наибольшее распростране­ние за ру-бежом получили сухие среды, содержащие в качестве селективного агента цетилтриметиламмоний бромид или цет-римид (AldridgeС.etal., 1964;BrownV,LowburyE., 1965;Mos-selD.etal., 1976;NegrettiE,TrabattoniC, 1984), 2, 4, 4-три-хлоро-2-гидроксифеноловый эфир или иргазан (RobinТ.,Jan-daM., 1984).

В нашей стране для одноступенчатого выделения Ps. aeruginosa предложены среды: синтетическая с фурагином (Ароне Р. М., Чур­сина Т. В., 1975), накопительная с бриллиантовым зеленым (Кол-кер И. И. и соавт., 1977; Жарикова М. С. и соавт., 1983), с пропа-нидом (Алешня Е. П., Алешня В. В., 1977), А-1 и А-2 (Исхако-ва X. И., 1979), с этонием и пенициллином (Тыдельская И. Л. и со­авт., 1980), с солями четвертичного аммониевого основания (Мо­роз А. Ф. и соавт., 1976).

Способ, предложенный Алешня Е. П., Алешня В. В. (1977), не получил распространения, видимо, из-за дефицитности про-панида.

Разработанная на основе смеси этония (выпускаемый в Рос­сии детергент, применяемый в медицине главным образом как противостафилококковый препарат) с пенициллином среда об­ладает неплохими селективными свойствами: на ней ингибиру-ется рост не только стафилококков и стрептококков, но и ба­цилл, кишечных палочек, протея; и лишь в единичных случаях вырастают культуры цитробактера и клебсиеллы. К недостаткам указанной среды относятся многокомпонентность и невозмож­ность длительного (более 2 нед.) хранения готового состава в хо­лодильнике из-за инактивации пенициллина (Рожавин М. А., Бугаева Е. А, 1986).

ZacharianP.,ListenJ. (1973) установили ростPs.aeruginosaна «голодном» агаре с (3-аланином, глицином или пролином в качестве источника азота. Добавление фурагина вызывало уг­нетение развития других микроорганизмов, но не влияло на ростPs.aeruginosa.

LiuP.van(1973) рекомендует среду, содержащую белковую основу, глюкозу,NaCl, фосфат калия двузамещенный и воду.

В НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гама­леи (Москва) разработана сухая среда, состоящая из селектив-

ного агента отечественного производства—N-цетилпиридиния хлорида (N-ЦПХ) в концентрации 0,2% (Мороз А. Ф. и соавт., 1976), а также питательной основы из сухого пептического гид-ролизата казеина и минеральных солей магния, калия. Детер­гентN-ЦПХ в концентрации 0,2—0,5% надежно угнетал рост стафилококков, стрептококков и энтеробактерий. Однако, при этом ингибируются и отдельные клинические штаммы синег-нойной палочки. Позже для улучшения селективных свойств данной среды Мороз А. Ф. и соавт. (1980) вводили в нее фено-зан. Начат промышленный выпуск сухой среды сN-ЦПХ и фе-нозаном. По избирательности и количеству положительных высевов она превосходит зарубежные агары с иргазаном и цет-римидом (Бекбергенов Б. М., 1977; Поликарпов Н. А., 1978; Буль С. М. Колкер И. И., 1978; Раку В. Д. и соавт., 1982; Кол-кер И. И. и соавт., 1982), проста в изготовлении и стабильна при хранении. Между тем, отмечаются недостаточная чувстви­тельность ЦПХ - агара (Каплан А. Е. и соавт., 1982) и возмож­ность роста на ней отдельных штаммов протея и цитробактера (Колкер И. И. и соавт., 1982).

Жарикова М. С. и соавт. (1983) провели оценку эффективно­сти ряда жидких (Кесслера, Хоттингера и бульон с 1% глюкозы) с последующим высевом на МПА с бриллиантовым зеленым и плотных (пропанидовая, Эндо, Плоскирева и МПА с бриллиан­товым зеленым) сред при пересевах с бульона Хоттингера для об­наружения Ps. aeruginosa. Из жидких сред наилучшие результаты получены с использованием бульона Хотингера, а наихудшие— со средой Кесслера. Из плотных сред наилучшие результаты по­лучены на пропанидовой среде, сопоставимые между собой—насреде Эндо и МПА с бриллиантовым зеленым, а худшие—на сре­де Плоскирева. При сравнительном изучении ингибирующей способности сопутствующей микрофлоры у сред Симмонса, МПА с бриллиантовым зеленым, ацетамидной, пропанидовой, Эндо, Плоскирева и висмутсульфитном агара (контролем слу­жил МПА), показано отсутствие на всех них роста St. aureus, спо­ровых аэробных бацилл. Е. coli не дали роста на первых 4 средах, на висмут-сульфитном агаре и среде Плоскирева число колонийбыло в 2—3 раза меньше, чем в контроле, а результаты посевов на среде Эндо совпадали с контролем. Наибольшим ингибирую-щим свойством относительно протея (роящихся штаммов) обла­дали МПА с бриллиантовым зеленым и среда Симмонса. Слабее ингибировала среда с ацетамидом и не ингибировали среды спропанидом и Плоскирева. Ростовые качества первых 5 сред бы­ли примерно одинаковыми и сопоставимыми с контролем, тогда как на среде Плоскирева и висмут-сульфитном агаре интенсив­ность роста была в 2 раза меньше.

Отмечают возможность замены МПА с бриллиантовым зеле­ным на одну из следующих сред: Симмонса, ацетамидный или пропанидовый агар.

58

59

Считается, что на вторые сутки можно идентифицировать около 75% культурPs.aeruginosaпо морфологии колоний и образованию сине-зеленого пигмента, а остальную часть— на 3-ьи сутки. Однако в связи с чувствительностью к ингибито­рам определенного количества клинических изолятов этого микроорганизма, особенно выделяемых от больных с кистоз-ным фиброзом (до 9%), полагают необходимым, с целью повы­шения эффективности выявления возбудителя, проводить по­севы на селективные и неселективные среды (FonsecaК.etal., 1986).

Отечественным лабораториям МЗ СССР для выделения Ps.aeruginosaрекомендованы в качестве унифицированных ЦПХ-агар и ацетамидный агар (приказ № 535 от 22.05.85, при­ложение 1).

Таким образом, по Мороз А. Ф. и соавт. (1988) наиболее ин­формативными и доступными для лабораторий тестами иденти­фикации Ps.aeruginosaявляются рост на среде сN-ЦПХ, поло­жительный цитохромоксидазный тест, способность окислять глюкозу на среде Хью-Лейфсона в аэробных условиях и расти на ацетамидном агаре. Посев на среды Кинга А и В позволяет до­полнительно идентифицировать 5—10% штаммов по образова­нию характерных пигментов.

Evans M. et al. (1986) исследовали чувствительность Ps. aerug­inosaк 7 антибиотикам методом микроразведений в 10 видах жидких сред, главным образом являющихся модификациями бульона Мюллера-Хинтона. Чувствительность к карбеницилли-ну, тикарциллину и пиперациллину слабо варьировала на раз­личных средах. Значительные отличия обнаружены в тестах с мо-ксалактамом и аминогликозидами. Добавление к бульону Мюл­лера-Хинтона сыворотки человеческой крови приводило кпоявлению 14—50% ложноположительных результатов чувстви­тельности Ps. aeruginosa к моксалактаму. На триптиказо-соевом и питательном бульонах, бульоне для бруцелл обнаружено 10—72% случаев ложной устойчивости к аминогликозидам. Результаты подтвердили необходимость строгого выполнения рекоменда­ций, в соответствии с которыми чувствительностьPs.aeruginosaк антибиотикам следует определять на бульоне Мюллера-Хинто­на, стандартизированном по содержанию двухвалентных катио­нов.

Федорина А. П. (1987) использовала для селекции Ps.aerugi­nosaсахарный бульон с добавлением 0,22—0,66 мг/мл сульфата цинка.

Gill V, Stock F. (1987) предлагают среду PFA для одновремен­ного выявления пиоцианинового и флуоресцеинового пигмен­товPs.aeruginosa, превосходящую другие аналогичные и состоя­щую из 15 г/л дегидрированного МН-агара («Difco»), 12 г/л же­латинового пептона («BectonDickinson»), 8 г/л сульфата калия,

5 мл/л глицерина, 1,5 г/л MgCh*6I-LO и 13 г/л агара; рН среды до­водят до 7,2. Учитывая, что во многих практических микробиоло­гических лабораториях пиоцианин расценивается как 1 из основ­ных видовых признаков Ps. aeruginosa, среда PFA поможет, по мнению авторов, упростить и ускорить процедуру его первичной идентификации.

KeevenJ.,DeCiccoВ. (1987) разработали селективную средудля выделения Ps. aeruginosa (высеваемость 100%), в состав кото­рой входят 15 г/л соевого с переваром казеина бульона; 15 г/л агара, 0,1 г/л фенантролина. РостPs.fluorescensиPs.putidaна­блюдался в виде мелких колоний и в более поздние сроки, чемPs.aeruginosa. Рост других псевдомонад, грамположительных и грамотрицательных бактерий, дрожжей полностью ингибиро-вался. Состав среды более прост и она дешевле, чем ранее разра­ботанные для выделенияPs.aeruginosaсредыPseudoselAgarиPseudomonasIsolationAgar.

Tomas J., Oliver-Rodes B. (1987) рассматривали вопрос об оп­тимальных концентрациях селективного агента в питательной среде.

CampbellM.etal. (1988) разработали селективную среду для выделенияPs.aeruginosa, состоящую из агара Колумбия, в кото­рый добавлены фенантролин, 9-хлор-9-/ 4- (диэтиламино)- фе-нил/-9, 10- дигидро-10-фенилакридингидрохлорид (С-390) до конечной концентрации 30 мкг/мл каждый. Она превосходила селективные среды с фенантролином, С-390, ацетамидом и цет-римидом.

Гивенталь Н. И. и соавт. (1989) определяли чувствительность Ps. aeruginosa к антибиотикам в жидкой синтетической питатель­ной среде.

Для выявления Ps.aeruginosaSchubertR. (1989) предлагает средуABGPиз пептонного бульона с глюкозой, аргинином и бриллиантовым зеленым, включающую следующие ингредиен­ты (г/л): казеиновый пептон—17; пептон из соевых бобов—3;NaCl—5; сульфат аргинина—10 и глюкоза—0,5. После сте­рилизации и охлаждения в среду добавляют 10 мл крезолово-го красного (0,3%-ый раствор); 7,5 мл бромтимолового си­него (0,2%-ый раствор) и 0,075 мл бриллиантового зеленого (0,5%-ый раствор). РостPs.aeruginosaв среде с аргинином в те­чение 48 ч при 37°С сильно зашелачивает ее, в результате чего серовато-зеленая окраска индикатора в среде изменяется до си­не-фиолетовой. Бриллиантовый зеленый в использованной концентрации подавляет рост грамположительных микроорга­низмов, но не токсичен дляPs.aeruginosa. При культивиро­вании проб более 48 ч наблюдаются ложноположительные ре­акции. Для получения чистых культур делается засев из жид­кой среды на плотную после инкубации наABGPв течение 24-48 ч.

60

61

Синяшин Н. И. и соавт. (1990) изучали физиологические осо­бенности (способность пигментообразования, накопления био­массы)Ps.aeruginosaпри использовании питательных субстра­тов, приготовленных по разным технологиям. Накопление био­массы наиболее выражено на модифицированных бульонах Мартена. Перевар по Хоттингеру уступал экспериментальным средам. Однако, окончательную оценку роли питательных сред можно дать, считают авторы, изучив антигенные комплексы су-пернатантов и самой биомассы.

Калина Г. П., Комзолова Н. Б. (1988) приводят достаточно полный обзор применения жидких сред накопления при поис­ках Ps.aeruginosaв объектах окружающей среды и патологиче­ском материале. Авторы рекомендуют модифицированную средуBonde(замена пенициллина кристаллическим фиолето­вым как более мягким ингибитором), признанную официаль­но и проверенную на большом материале. Для выделенияPs.aeruginosaиз пищевых продуктовSzitaG.,BiroG. (1990) разработали селективную дифференциальную синтетическую среду, основанную на свойстве этого микроорганизма утилиз-ровать аммоний из неорганических источников азота. Она включает ацетамид и ацетат в качестве источников азота и уг­лерода, соответственно. Среда высокочувствительна, стан­дартна, позволяет непосредственно изучать важные дифферен­циальные биохимические свойства, дешева, подлежит хране­нию, может быть приготовлена в сухом виде и пригодна для замены контрольных сред.

Сиволодский Е. П. (1990) рекомендует селективную среду «PseudomonasAPS» для одноэтапного выделения и идентифика­ции Ps. aeruginosa и Ps. putida, обладающую «лучшей чувствитель­ностью и избирательностью, чем перечисленные». Ее примене­ние основано на выявленном свойстве отечественного лекарст­венного препарата оксафенамид (п-оксифенилсалициламид) избирательно подавлять рост бактерий.

Журило А. А. (1991) изучал эффективность новых селектив­ных к Ps.aeruginosaи тормозящих рост сопутствующей микро­флоры агентов: легкодоступного и широко используемого в сель­ском хозяйстве рамрода (пропахлора, ацимида)-2 хлоризопро-пилацетамида и комплекса сульфат гидразина, грамурин, этоний,N-ЦПХ, в котором первый компонент является веду­щим. Эти селективные агенты добавляли в среды РЧЖ (Чаплин­ский В. Я., Журило А. А., 1987) и Ж, соответственно, и сравнива­ли с кровяным иN-ЦПХ агарами. Среды РЧЖ и Ж не содержат дефицитных компонентов, дешевы и малотрудоемки. Техноло­гия приготовления среды РЧЖ представлена Горбуновой М. Л. и соавт. (1984). Она состоит из 7 г/л пептона; 7 г/лKSOi; 1,5 г/лMgSOt; 1,5 г/лMgCL; 12 г/л агар-агара, 40 г/л рамрода и 25 мл/л глицерина.MICрамрода в среде РЧЖ, обеспечивающая ее селе­ктивность, равнялась 0,00035—0,0004 мкг/мл. Селективный ком-

плекс эффективно действовал при соотношении компонентов (г/л): пептон 18—22; сульфат калия 6—8; сульфат магния 1,7— 2,5; MgCL 1,3—1,7; сульфат гидразина 0,08—0,1; грамурин 0,06— 0,07; этоний 0,003-0,005;N-ЦПХ 0,03-0,04; агар-агар 9,5-12;рН 7,2—7,4. Количество колоний псевдомонад на среде РЧЖ бы­ло в 15—20 раз меньше, чем в контроле (МПА), тогда как на сре­де Ж-лишь в 1,5—2 раза. Колонии на среде Ж значительно круп­нее, чем на других селективных средах.

Сравнительные исследования Якубчак О. Н. (1997) эффек­тивности выделения и идентификации Ps.aeruginosaна средах с цитримидом, этонием, антибиотиками,N-ЦПХ и СА-03 пока­зали относительно высокую их чувствительность (за исключе­нием среды сN-ЦПХ) и селективность (среды с цетримидом и СА-03—на них, помимоPs.aeruginosa, росли только 2 вида по­сторонней микрофлоры). Скорость роста на всех средах была примерно одинаковой (наибольшая на средах СА-03 и с этони­ем). Тем не менее, с целью повышения селективности, автором разработаны среды М иMi, особенностью которых является от­сутствие ингибиторов посторонней микрофлоры, отрицательно влияющих и на собственноPs.aeruginosa. Среды основаны на использовании мочевины (аммиака) в качестве источника азо­та (большинство других бактерий не могут расщеплять мочеви­ну); глюкозы—источника углерода; сульфата—источника сер­ных соединений, необходимых для образования белков; аспа-рагина (в среде М он отсутствует) и ионов К⁺—для облегчения образования пигмента.

Комзолова Н. В. (1991), оценивая факторы патогенности Ps.aeruginosa, использовала авторскую среду АгЖел 1986)— при определении наличия желатиназы, 5% кровяной агар—ге­молизина, желточный агар—лецитиназы и обезжиренное мо­локо—казеиназы.

Штаммовую зависимость накопления биомассы Ps.aerugi­nosaот среды выращивания установили Нуриддинова Н. Р. и со­авт. (1991). Пигментообразование было наиболее интенсивным на среде из свиных и кроличьих желудков, а также на среде из свиных гузенков по сравнению со средами Мартена и Хоттинге-ра. Применение среды из кроличьих желудков способствовало появлению таксономического признака-металлического блеска с зонами лизиса и повышению антагонистической активности штаммов.

Дорофеев А. Г. (1994) выращивал Ps. aeruginosa на синтетиче­ской среде с глюкозой в качестве единственного источника угле­рода и энергии (Паников Н. С. и соавт.. 1980).

Культивирование Ps.aeruginosaс целью получения экзоток­сина А проводят на плотных и жидких средах (Перт С, 1978; Ба­скакова Н. В. и соавт., 1983; Баснакьян И. А., 1989; Liu P., 1964; ArvidsonS., 1973;AloufJ., 1985;BelohlavekS.etal, 1985). Чаще

62

63

всего используется бульон Мартена или триптический соевый бульон.

Аджиева А. А. и соавт. (1987) предложили для его культиви­рования среду, включающую белковую основу, ряд неорганиче­ских солей, а также хелатообразующий агент (дельта-оксидиа-мидоуксусная кислота), связывающий ионы металлов, входя­щих в активный центр металлозависимых протеиназ, блокирующих их действие на экзотоксин А. В связи с изготов­лением среды в двух вариантах, рекомендуется и два способа получения экзотоксина А.

BlumentalsI.etal. (1987) разрабатывали среду определенно­го химического состава и двухступенчатый метод культивиро­вания, обеспечивающие увеличение выхода экзотоксина А, вырабатываемогоPs.aeruginosa. При этом шт. РА-103 растили на диализованном триптиказо-соевом бульоне, обогащенном добавлением 1% глицерина и 0,05 М глутамата натрия. Следы железа из бульона удалялись с помощью хелатораChelex-100. Параллельно использовали синтетическую среду, включавшую набор аминокислот, солей и Сахаров в заданном соотношении. Выращивание вели в 2 этапа. На первом использовали выше­описанный обогащенный триптиказо-соевый бульон и выво­дили культуру на стадию раннего стационара. Затем отмытые клетки пересевали на свежий бульон, полностью освобожден­ный от следов железа и продолжали культивирование еще 5— 6 ч. Накопление биомассыPs.aeruginosaна бульоне шло при­мерно также, как и на синтетической среде, но после полногоудаления Fe²⁺ выход биомассы с бульона возрастал. Увеличение концентрации глицерина с 2,5 до 35 г/л увеличивало выход эк­зотоксина А в среду выращивания с 0,8 до 2,1 мг/л. ДобавлениеFe²⁺к бульону тормозило синтез мРНК, транслирующей ин­формацию о синтезе экзотоксина А. Напротив, ионы Са²⁺уси­ливали его синтез.

Кузнецова Т. Н. и соавт. (1991) оптимизировали процесс глу­бинного культивирования Ps. aeruginosa с целью получения экзо­токсина А использовав определенную дозу экспоненциальной посевной культуры и рациональный режим аэрации.

Известно, что бактериологическая диагностика сапа—опас­ного инфекционного заболевания человека и животных, возбу­дителем которого является Ps.mallei, сложна и не позволяет с уверенностью идентифицировать его среди других псевдомонад. Манзенюк О. Ю. и соавт. (1994) выращивали псевдомонады, втом числе Ps. pseudomallei, Ps. mallei и др., на плотной среде КГК, содержащей 10 мл/г глицерина; 1 г/л КНРО-сЗНгО; 1 г/лКН2РО4; 0,3 г/л MgSO* • 7Н2О; 0,03 г/л FeSO* • 7Н2О; недеионизи-рованный солянокислотный гидролизат казеина с аминным азо­том 30±5 мг%; 15 г/л агара.

С целью обнаружения возбудителя мелиоидоза подозри­тельный материал обычно засевают на МПА или МПБ с 3—5% глицерина. Так как в патологическом материале от больных (гной, мокрота, испражнения и др.) и особенно в объектах внешней среды широко представлена посторонняя микрофло­ра, изолировать возбудителя мелиоидоза прямым посевом не всегда удается. Для подавления других видов микроорганизмов MillerW.etal. (1948) рекомендуют применять различные кра­сители: кристаллический фиолетовый (1:200 000), профлавин, акрифлавин, акридин оранжевый, акридин желтый (1:500 000), фуксин основной или кислый (1:100 000), малахитовый или бриллиантовый зеленые (1:1 000 000). С этой же целью авторы предлагают добавлять в исследуемые пробы 1000 ЕД/мл пени­циллина и после выдержки 3 ч при 37°С сеять на МПА с 3—5% глицерина.

Учитывая малую чувствительность возбудителя мелиоидоза к полимиксину и стрептомицину, Ширяев Д. Т. и соавт. (1976) ре­комендуют добавлять их в питательную среду в соотношении 100 и 50 мкг/мл, соответственно, при исследовании проб из объектов внешней среды. Такие концентрации антибиотиков, подавляя рост большинства видов посторонней микрофлоры, не угнетали рост музейных штаммов возбудителя мелиоидоза.

В качестве обогатительных применяют жидкую среду Леви­на или среду МакКонки. ChambonL. (1955) показал, что при посеве проб воды и почвы, взятых в эндемичных районах, в жидкую среду Левина с пересевом после 48 ч инкубации при 37°С на плотную среду Левина возбудитель удается выделять чаще, чем при прямом посеве этих проб на оптимальную среду. При посеве материала на среду МакКонки (Farkas-HimsleyH, 1968) к ней добавляют 20 мкг/мл колимицина. В этих случаях большинство сопутствующих грамотрицательных бактерий не растет. Однако при больших посевных дозах и на этой среде может обильно расти целый ряд микроорганизмов. С целью идентификации бактерий, выросших на среде МакКонки с ко-лимицином, предложено использовать оксидазный тест, а для оксидазоположительных видов—ферментацию сахарозы и маннозы на среде Кинга и выращивание на дезоксихолат-цит-ратном агаре.

Ряпис Л. А., Ширяев Д. Т. (1974) в качестве селективной предложили плотную синтетическую среду, основой которой служит 2% забуференный агар с 0,025% сульфата магния и 0,1% сульфита натрия, к которой добавляется (3-аланин до конечной концентрации 0,03 М. На этой среде при посеве чистых культур многих видов микроорганизмов наблюдался рост лишь возбуди­телей сапа и мелиоидоза, а также синегнойной палочки, но при добавлении 25 мкг/мл неомицина прекращался также рост всех штаммов возбудителя сапа.

64

3 3-235

65

3*

Разработаны и другие селективные среды для выделения воз­будителя мелиоидоза (AshdownD., 1979;GalimandiM.,DodinA., 1983) успешно апробированные в экспериментах и эндемиче­ских регионах Юго-Восточной Азии, Австралии, Ирана, Фран­ции.

Показана возможность использования для этих целей стан­дартных диагностических сред: кровяного агара; агара МакКон-ки; цистин-лактозного агара, дефицитного по содержанию элек­тролитов (WalshA.,WuthiekanunV., 1996).

Поповцева Л. Д. (1982) дает характеристику питательным средам, применяемым для выделения и идентификации возбу­дителя мелиоидоза, и предлагает оптимальную схему.

Фарбер С. М. и соавт. (1977) при получении сферопластов из возбудителей сапа и мелиоидоза и выделении из них мембран­ных структур использовали МПА с 5% глицерина. На этой же среде Денисов И. И. и соавт. (1995) выращивали Ps. pseudomallei СВБДО-141.

По данным Leelarasamee A., Bovornkitti S. (1989) рост оксида-зоположительныхPs.pseudomalleiотмечается только на пита­тельном агаре и на среде с минеральными солями.

Плеханова Н. Г. и соавт. (1992) разработали среду (ФГК— бульон), обеспечивающую наиболее высокий уровень продук­ции экзопротеаз при поверхностном культивировании Ps.pseu­domallei. При этом индекс протеолиза составил 4,0; тогда как на среде Лурия—3,6; а на МПБ—2,0. Среда состояла из фермента­тивного гидролизата казеина (1,5%), экстракта кормовых дрож­жей (0,5%), минеральных солей (хлорида натрия, солей железа и магния), рН 6,9 и оказалась наиболее эффективной из 12 изу­ченных, не содержала импортных ингредиентов. Для глубинно­го культивирования использовали среду, содержащую гидроли-заты казеина, гороха, черного альбумина и минеральные соли (Плеханова Н. Г., 1994).

Степин А. А. и соавт. (1992) отмечают снижение продукции микробных клеток и протеолитической активности экзопротеаз возбудителя мелиоидоза в анаэробных условиях. Активная аэра­ция среды увеличивала выход бактериальной массы на 50%, а протеолитической активности—на 30%.

Коллектив под руководством Самыгина В. М. (1994) усовер­шенствовал питательную среду на основе гидролизатов казеина для культивирования возбудителей сапа и мелиоидоза.

Ps.malleiрастет на МПГА в виде полупрозрачных серовато-белых колоний с перламутровым отливом, сливающихся в сплошной налет; на МПГБ и синтетической питательной среде (Евглевский А. А., 1973) образует муть, пристеночное кольцо, пленку и осадок, поднимающийся со дна пробирки штопором при встряхивании. На картофельной среде Павловского дает рост блестящих гладких колоний цвета меда, также сливающих­ся и темнеющих со временем. Посев культуры на обезжиренное

66

молоко вызывает его свертывание без пептонизации на 10—14 сут. Посев производственного штамма на среду Гисса с набором Сахаров не изменяет окраски среды и не вызывает образования газа, тогда как некоторые другие штаммы расщепляют глюкозу и лактозу (цит. по Буковой Н. К., 1996). Ввиду высокой, в сравне­нии с другими микроорганизмами, чувствительностью к анти­микробным препаратам, до настоящего времени не разработано дляPs.malleiдостаточно эффективной селективной среды. Ис­пользуемые, тем не менее, для подавления роста посторонней микрофлоры красители и антибиотики при прямом посеве ис­следуемого материала задерживают и без того недостаточно ак­тивный рост возбудителя сапа.

В последние годы все чаще в патологическом материале больных стали встречаться Ps.cepacia—бактерии с весьма широ­ким спектром питания, включающим бензилпенициллин. Осо­бую угрозу они представляют при кистозном фиброзе, вызывая более тяжелые осложнения и больший процент летальных исхо­дов, чемPs.aeruginosa(PrinceA., 1986).

На основе окислительно-ферментативной среды с добавками лактозы, бацитрацина и полимиксина В разработана агаризован-ная селективно-диагностическая среда OFPBLдля выделенияPs.cepaciaот больных кистозным фиброзом.Ps.cepaciaросли в виде желтых колоний на фоне зеленовато-желтой среды за счет разложения лактозы и даже сильные щелочеобразователи из р.Proteusпри росте в ассоциациях сPs.cepaciaне влияли на окра­ску колоний последних. На этой среде процент выделенияPs.cepacia был в 2—3 раза выше, чем на других (Muszynski M. et al., 1986;WelchD.etal, 1987).

Carson L. et al. (1986) сравнивали рост Ps. cepacia, выделенных от больных кистозным фиброзом и из других источников, на се­лективных средах—PCG,OFPBL, ТВ-Т, ацетамидной среде и агаре МакКонки. По сравнению с кровяным агаром (контроль­ная среда) лучшими ростовыми свойствами обладалиPCG(93,4% выросших КОЕ) иOFPBL(84,4%), худшими—ацетамид-ный агар (62,7%). На среде МакКонки росли 8,1% шт. Ps. cepacia от больных кистозным фиброзом, 46,8% шт.Ps.cepaciaот боль­ных другими патологиями и 84,1% шт. Ps. cepacia из окружающей среды.

Евдокимова Н. В. и соавт. (1994) изучали Ps. fluorescens в про­цессе азотного голодания, выращивая на синтетической средеследующего состава (мг/л): глюкоза—2000—6000; KNO>—3000— 6000; КНРОа-ЮОО; КНРО^-Ю;NaCl-1000;MgS04-7H20-200; СаСЬ-2Н2О-40;KI-0,1;FeCb.6HiO-0,4;MnS04• 4НЮ-0,4;Na₂Mo04 • 2№О-0,2;ZnSO* • 7Н>О-0,4;H.BO,-0,5 и ЭДТА-Na-5,0.

Подольская В. И. и соавт. (1994) использовали при изучении разложения цианидного комплекса серебра культуройPs.fluo­rescensсинтетическую питательную среду следующего состава

67

(г/л): КН2РО4-2;K2HPO4-I;Na2CO₃.10H2O-0,5;MgSO4-0,3;NaCl—0,1; пептон—0,5; глюкоза—2.

Селективные среды для выделения Ps.putidaна сегодняш­ний день фактически не разработаны. Максимова Н. П. и со-авт. (1994) для характеристики флуоресцирующего пигмента пиовердина Рм, продуцируемого бактериямиPs.putida, выра­щивали их в питательном бульоне, среде Кинга В (KingЕ.etal., 1954), либо минимальной или агаризованной среде М 9 (Мил­лер Дж., 1976), которую перед автоклавированием обрабатыва­ли 8-оксихинолином для выделения ионов железа (MeyerJ.etal., 1978).

Седина С. А. (1992) исследовал влияние NaClи метанола на рост культурыPs.putidaBS-2, утилизирующей диэтиленгликоль в качестве единственного источника углерода. Зависимости удельной скорости роста на среде с диэтиленгликолем от нали­чия в нейNaClи метанола в диапазоне концентраций 0—4% и 0—20 г/л, соответственно, подчинялись уравнению неконку­рентного торможения. При концентрацииNaClболее 4% отме­чено полное разобщение процессов конструктивного и энерге­тического метаболизма.

Кулаев И. С. и соавт. (1987) изучали условия культивирова­ния Ps.lytica, обеспечивающие максимальное накопление в культуральном фильтрате фермента, обладающего бактериоли-тической активностью в отношении ряда грамположительных микробов. Показана возможность синтеза фермента лишь при введении в среду органических источников азота-пептона и триптона. Значительно повышался уровень его синтеза при добавлении в среду убитых клетокSt.aureusв дозах от 0,5 до 2,5 мг/мл среды. Мальтоза, сахароза, галактоза, глюкоза иN-ацетилглюкозамин при концентрациях 0,1% в 5—10 раз сни­жали синтез фермента, но стимулировали накопление биомас­сыPs.lytica. Делается вывод о регуляции биосинтеза фермента по механизму катаболитной репрессии. Отмечено отрицатель­ное влияние на синтез фермента некоторых солей в концентра­циях, используемых обычно для приготовления питательных сред.

Будченко А. А., Викторов Д. В. (1992) анализировали белко­вый спектр Ps.pseudomallei,Ps.cepaciaиPs.aeruginosaпри вы­ращивании на различных средах. Анализ пептидограмм куль­турPs.pseudomalleiпоказал наибольшее количество фракций в спектре (следовательно более широкий диапазон синтеза пеп­тидов) на минимальной средеGilardi, меньшее—наF-arapeиTSabи минимум—на питательном агаре. СпектрыPs.cepaciaиPs.aeruginosaв гораздо меньшей степени зависели от вида среды.

Жога Л. К. и соавт. (1995) при конструировании транспорт­ной среды для патогенных псевдомонад в качестве консерванта использовали глицерин, ингибиторов—антибиотики и красите-

ли. В состав среды входил также гидролизин, представляющий собой кислотный гидролизат крови КРС. Небольшое количест­во его (0,05%) обеспечивало, однако, питание и сохранение ис­комых псевдомонад. Ингибиторы роста сопутствующей микро­флоры не влияли на возбудителей сапа и мелиоидоза, устойчи­вых к ампициллину (MIC250—500 мкг/мл), полимиксину (1000 мкг/мл) и генциановому фиолетовому. Состав (г/л): глицерин— 200; гидролизин—0,05;NaCl—5; ампициллин—0,01; полимик-син—0,0025; генциановый фиолетовый—0,0025.

Рожавин М. А., Бугаева Е. И. (1986) представили краткий, но емкий обзор литературы по использованию селективных агентов для выделения Ps.aeruginosa, анализируя их достоинства и недо­статки. Это, помимо описанных выше ацетамида, цетримидаN-ЦПХ,N-ЦПХ с фенозаном, этония с пенициллином, пропани-да, бриллиантового зеленого, иргазана, также кристаллический фиолетовый с нейтральным красным (DalyJ.etal., 1984), кри­сталлический фиолетовый с телозином и канамицином (MosselD.etal., 1976), производные 5-нитрофурана-фурациллин, фура-гин, фурадонин (Ароне Р. М., Чурсина Т. В., 1976; Mossel D. et al., 1976;NegrettiE,TrabattoniC, 1984), пенициллин с новобиоци-ном с С-390 (SandsD.,RoviraA, 1970), С-390 (MaroldL.etal.,1981; Araj G., 1984; Robin Т., Janda M., 1984). При использовании индикаторной средыDalyJ.etal. (1984) оказалось возможным в первые 24 ч. идентифицировать 97% клинических изолятоввоз-будителя синегнойной инфекции.

Вульфдитер Ш., Петер К. (1992) предлагают для получения 3-гидроксибутиратдегидрогеназы культивировать соответству­ющие микроорганизмы-продуценты из рода Pseudomonas(Ps.putida) на питательной среде, содержащей в качестве ис­точника углеродаDL-лейцин,DL-лизин,DL-карнитин, али­фатические углеводороды с длиной цепи С6-С10, а также ис­точники азота и минеральные соли сульфат магния, фосфат натрия двузамещенный, фосфат калия однозамещенный, со­единения железа и хлора. При этом себестоимость конечного продукта снижается.

Марцинкявичене Л. Ю. и соавт. (1991) предлагают с целью повышения активности и чистоты холестеринэстеразы культи­вирование его продуцента Ps.mendocinaВКПМ В-2173 на пита­тельной среде, содержащей (г/л): в качестве источника углеродалактозу 1—5; индуктора-соевую муку 20—40; а также двузаме­щенный фосфат калия 0,5—2,5; семиводный сульфат магния0,5—0,8; хлорид калия 0,3—0,8; нитрат натрия 1—3; говяжий жир 3—8 и воду.

Завалова Л. Л. и соавт. (1992) сравнивали дестабилазную и пептидазную активности экстрактов Ps.hirudinis, выращенных на различных питательных средах (LB,NB, ВН и синтетиче­ские). Отобраны условия культивирования в больших (до 2 кг биомассы) объемах на В и БВК-средах. Сравнительный анализ

68

69

бактериальных экстрактов выявил в обоих случаях одинаковый уровень дестабилазной и значительно более высокий уровень суммарной пептидазной активности для БВК-экстрактов.

Бойков Ю. Н. и соавт. (1991) предлагают для повышения вы­хода фермента и его активности при культивировании Ps.stutzeriВКПМ В-4724-продуцента рестриктазыPsu1, использовать пи­тательную среду, содержащую (г/л) в качестве источника амин-ного азота панкреатический почечный гидролизат 15—20; а в ка­честве минеральных солей-сульфат аммония 1—2; цитрат натрия 0,5—0,7 и хлорид железа 0,001-0,002.

Бурдь В. Н. и соавт. (1994) перед клонированием гена бром-пероксидазы из Ps.aureofaciensкультивировали клетки в среде, содержащей (г/л): бактотриптон—10; дрожжевой экстракт—5; хлорид натрия—5; добавляя при выращивании на чашках Петри 1% агара.

PierceL.,SchrothM. (1994) разработали простую процедуруопределения колоний Pseudomonas, которые аккумулируют poly-betahydroxybutyrate(PHB), продукт накопления, характеризую­щий многие нефлуоресцирующие псевдомонады на среде с нильским голубым. Колонии РНВ-положительных бактерийфлуоресцировали от ярко оранжевого до желтого цвета под длин­новолновым ультрафиолетовым с когда вырастали на среде, со­держащей РНВ и краситель нильский голубой. Яркие оранжевые флуоресцирующие гранулы были видны внутри клеток, когда рассматривались микроскопически под ультрафиолетовым осве­щением. Колонии флуоресцирующиех псевдомонад не флуорес­цировали на этой среде, флуоресцирующие гранулы не были ви­димы микроскопически. Эта методика позволяет обнаруживать РНВ-положительные псевдомонады без микроскопического ис­следования. Среда с нильским голубым также была полезна как дифференциальная изолирующая дляPseudomonassolanacearamи может быть для других нефлуоресцирующих псевдомонад.

Упомянутая выше среда Кинга А в дальнейшем была моди­фицирована. MeedG.,AdamsВ. (1977) показали, что уменьше­ние содержания цетримида до 10 мкг/мл позволяет расти всем пигментированным и непигментированным психрофильным псевдомонадам. Для увеличения его селективного действия они добавили 50 мкг/мл цефалоридина и 10 мкг/мл фуцидина. В ре­зультате была разработана селективная для псевдомонад средаCFC(Cephaloridine-Fucidin-Cetrimide).

StanbridgeL.,BoardR. (1994) использовали модифицирован­ную средуCFCдля дифференциации мясных псевдомонад и эн-теробактерий. Некоторые виды семействаEnterobacteriaceaeраз­вивающиеся на кусках говядины, упакованных в регулируемой атмосфере, могут расти на средеCFC. Добавление 1% аргининаи 0,002% индикаторы рН фенолового красного в эту српду позво­ляло дифференцировать две группы. Псевдомонады продуциро­вали аммиак из аргинина, в то время как энтеробактерии вообще

не использовали этот субстрат. Смещение рН в щелочную сторо­ну внутри и вокруг колоний псевдомонад вызывало розовое ок­рашивание с феноловым красным.

AzadH.,CookseyD. (1995) разработали средуoleanderknotagar(OKA) для изоляцииPs.savastanoiиз растений олеандра. Среда ОКА содержала (г/л) агара 14,0;L-серина 2.0; дрожжевого экстракта 1,0;NH4*HiPO4-0,5;lGHPO4*3H2O-0,5;NaCl-5,0;MgS04*7H20—0,2; борной кислоты 1,0; ванкомицина0,15; цефа-лексина—0,05; бацитрацина 0,05; ампициллина 0,015; новобио-цина 0,02 и циклогексимида 100. Все 39 штаммов Ps. savastanoi из различных географических областей росли на среде ОКА и коли­чественный выход составлял от 5,7 до 93,6% (в среднем =43.6%). Среда ОКА была селективнее чем другие исследованные среды, включаяBCBRVB,M-71,KBBC,MSP, пролиновый агар иPVF-1, и ингибировала от 89 до 96,7% сапрофитных бактериальных штаммов, выделяемых из тканей олеандра. 44% других исследо­ванных бактерий, патогенных для растений, не росли на среде ОКА, а 13% росли скудно. Среда ОКА использовалась для обна­ружения эпифитных популяцийPs.savastanoiиз галлов, листьев,стволов и цветов, а также для обнаружения системного движения бактерии в стволах олеандра. Патоген был представлен в про­мывной воде от 26 из 34 предположительно здоровых растенийолеандра. 31 из этих растений впоследствии вырабатывали галлы в течение 1 года. Бактерия была также способна к системному движению на 25 см выше и 20 см ниже места инокуляции.

JeppesenС. (1995) предложил несколько сред, особенно для обнаруженияAeromonasspp., но также дляPlesiomonasshigel-loides и Pseudomonas spp. Некоторые из них были предназначены для общих целей, а другие—специально для исследования образ­цов клинических, окружающей среды и пищевых. Все среды яв­лялись селективными из-за наличия антибиотиков, желчных со­лей, красителей и других, аналогичных по действию, агентов, а также дифференциальными, что было основано прежде всего на способности микроорганизмов ферментировать или не фермен­тировать углеводы. Как со всеми селективными средами, выход стрессированных клеток иногда предотвращался и конкурирую­щая флора не всегда полностью ингибировалась так, чтобы необ­ходимы были подтверждающие тесты на предполагаемые поло­жительные колонии. Выбор специфической среды для изоляцииAeromonasspp. будет всегда зависеть от типа рассматриваемого образца или нужды исследователя в качественном обнаружении или количественном выходе. Самым лучшим для количествен­ной оценкиAeromonasspp. из образцов продовольствия и окру­жающей среды оказался крахмал-ампициллиновый агар (starchampicillin agar—SAA), хотя можно было бы рекомендовать и дру­гие. Имеется потребность в сравнительном анализе, включая агарRippeyCabelli(mA), ампициллин-желчные соли-инозитол-ксилозный агар (ampicillinbilesaltsinositolxylose-MIXagar), ам-

70

71

пициллин-декстриновый агар (ampicillindextrinagar—ADA),декстрин-фуксин-сульфитный агар (dextrin fucSsin sulpSite agar— DFS) и крахмал-глутамат-ампициллин-пенициллин-С-глюкоз-ный агар (starchglutamateampicillinpenicillinC-glucoseagar—SGAP-10C) в дополнении кSAA. Для рутинного анализа об­разцов окружающей среды и продовольствия на присутствиеP. shigelloides, рекомендуется расширенный посев на инозитол-бриллиантовый зеленый-желчные соли (inositol brilliant green bile salts—IBB) и plesiomonas (PL) агары. Для Pseudomonas spp. агар CFCпозволяет количественный выход как пигментированных,так и непигментированых штаммов из образцов продовольствия и окружающей среды, в то же самое время ингибируя большинство других организмов.

SzitaG.etal. (1995) разработали синтетическую среду (Z-агар) для селективной изоляцииPs.aeruginosaиз пищевых про­дуктов. Синтетическая среда—как источник азота и углерода— содержит ацетамид, при разложении которого на аммиак и ук­сусную килоту Ps. aeruginosa продуцирует для себя необходимые питательные вещества для роста. Среда не содержит ингибито­ров. Селективность ее была проверена инокуляцией чистых культур различных микробов, принадлежащих к группамPseu­domonas, Enterobacteriaceae, Bacillus и Staphylococcus. Полноцен­ность синтетической среды была также проверена общенацио­нальным тестированием с использованием двух образцов моло­ка, содержащих 10³/мл (образец молокаI) и 10⁵/мл (образец молокаII)Ps.aeruginosa. Обнаружено, что селективность синте­тической среды была лучше чем цетримидного агара (Cetrimide-agar) предписанного Венгерским стандартом. Общепринятым национальным тестом не выявлено значительных различий меж­ду результатами, полученными на цетримидном и Z-arapax в слу­чае образца молока, содержащего 10⁵/мл Ps. aeruginosa. Однако в молоке, содержащем 10³/млPs.aeruginosa, значительные разли­чия обнаруживались в пользуZ-arapa. Результаты были сопоста­вимы и воспризводимы на обоих средах. Новая среда запатенто­вана, производится и продается фирмой «REANALFineChemi­cals» (Венгрия).

Gould W. et. al. (1985) предложили для выделения флуоресци­рующих псевдомонад средыSiиSi, содержащие детергент на-трийлаурилсаркозин и триметоприм.