6. Санитарно-бактериологическое исследование воздуха: правила забора, посев и определение критериев микробиологической чистоты.

Содержание микроорганизмов в воздухе закрытых помещений и атмосферном существенно различается. Санитарно-микробиологическому контролю подлежит воздух закрытых помещений. Исследование воздуха в ЛПУ проводится:

• 1 раз в квартал при текущем санитарном надзоре центром Государственного санитарно-эпидемиологического надзора;

• 1 раз в месяц бактериологическими лабораториями больниц;

• по эпидемиологическим показаниям.

В лечебных учреждениях определяют ОМЧ - количество клеток бактерий и грибов в 1 м3 воздуха и содержание Staphylococcus aureus в 1 м3 в качестве СПМ. Обнаружение золотистого стафилококка, а также гемолитических стрептококков - индикатор биологической контаминации воздуха микробиотой носоглотки и кожных покровов человека, а также патогенными микроорганизмами, поступающими в воздух теми же путями. Золотистый стафилококк, выделяемый больными и носителями, может вызывать инфекционные заболевания кожи и дыхательных путей. Микроорганизмы в воздухе находятся в адсорбированном состоянии на частицах пылевых и капельных аэрозолей.

Методы:

 Естественная седиментация – метод Коха.

 Принудительная седиментация – с помощью приборов (импакторы, импинджеры).

 Фильтрационный метод – продувание воздуха через фильтры.

Методы микробиологического исследования воздуха подразделяют на седиментационный и аспирационный.

Седиментационный метод Коха. Стерильные чашки Петри с питательной средой оставляют открытыми в местах отбора проб на 5-10 мин, после чего их закрывают и помещают в термостат на 24 ч при температуре 37 °С. Микробное число воздуха определяют, пользуясь правилом Омелянского, в соответствии с которым считают, что на поверхность питательной среды площадью 100 см2 оседает за 5-10 мин столько бактерий, сколько их находится в 10 л воздуха. Каждая микробная клетка дает начало одной колонии. Зная количество выросших колоний, вычисляют микробное число.

Исходя из диаметра чашки Петри, равного 10 см, ее площадь составляет 78,4 см2 . Таким образом, если на поверхности питательной среды в чашке Петри выросло N колоний, составляют математическую пропорцию и определяют, сколько колоний может вырасти на площади 100 см2 , т.е. сколько бактерий находится в 10 л воздуха: 78,4 см2 - N; 100 см2 - Х; Х = 100 × N/78,4 (1 м3 воздуха = 1000 л).

Аспирационный метод. Это более точный метод, его проводят с помощью специальных прибороввоздухоотборников, через которые засасывается определенный объем воздуха. Для определения микробного числа воздуха засасывают 100 л воздуха. Для определения количества СПМ (золотистого стафилококка и грибов) засасывают 250 л воздуха, проводя посевы на кровяной агар для выделения стафилококков и агар Сабуро - для выделения грибов.

7. Санитарно-бактериологическое исследование смывов с объектов внешней среды: правила забора, посев и определение критериев микробиологической чистоты.

Контроль учреждений: медицинских, детских, общественного питания и др., при производстве продуктов питания, лекарственных средств и др.

Объекты: медицинский инструментарий и оборудование, предметы обихода, спецодежда и др.

Критерии: ОМЧ, СПМ, при необходимости – патогенные микроорганизмы.

Основа санитарно-микробиологического метода исследования смывов с рук персонала и поверхности предметов - обнаружение бактерий группы кишечной палочки, показателей фекального загрязнения. Также определяют общее количество микроорганизмов (бактериальную обсемененность) в 1 см2 исследуемой площади.

При взятии смыва пользуются стерильным ватным тампоном, смоченным в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида. Смывы с поверхностей предметов делают с помощью трафаретов из проволоки, имеющих площадь 25 см2 . Обычно смыв берут с площади 100 см2 , накладывая трафарет на четыре различных участка исследуемой поверхности.

При исследовании смыва с рук тщательно протирают тампоном тыл кисти, ладонную поверхность, межпальцевые промежутки и подногтевые пространства сначала с левой, а затем с правой руки.

Проводят смыв тампоном с поверхности площадью 25 см2 . Тампон опускают с пробирку с 2 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида и тщательно ополаскивают. Добавляют 8 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида, в итоге получая разведение 1:10, из которого готовят разведения 1:100 и 1:1000.

Затем по 1 мл каждого разведения вносят на стерильную чашку Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до температуры 45 °С агара. Общее количество бактерий в 1 см2 поверхности предмета определяют по формуле: n × 10 / s, где n - количество бактерий в 1 мл исходного смыва; 10 - количество изотонического раствора натрия хлорида, используемого для сорбции микроорганизмов с тампона, мл; s - площадь, с которой был сделан смыв.

Количество бактерий группы кишечной палочки определяют трехэтапным бродильным методом путем посева смыва в среду Кесслера, подращивая в течение суток при температуре 37 °С. При брожении в среде Кесслера или появлении мути делают пересев на среду Эндо. Подозрительные колонии, выросшие на среде Эндо, подвергают идентификации.