osn_san_mikr

193

Накопленные выделенные культуры проверяют на чистоту путем микроскопии, а чистые культуры затем исследуют на наличие цитохромоксидазы (оксидазный тест).

Оксидазоположительные культуры пересевают на две чашки со средой Кинг-А – среда для выявления пигмента пиоцианина.

На этой среде культура Pseudomonas aeruginosa образует проникающий в среду пигмент феназинового ряда, имеющий буроватый оттенок с вариантами от сине-зеленого (пиоцианин) до коричнево-красного.

Одну чашку с посевами на среде Кинг-А инкубируют при температуре 370С в течение 24-48 часов (стандартные условия).

Вторую чашку с посевами на среде Кинг-А для дополнительного подтверждения принадлежности к виду Pseudomonas aeruginosa инкубируют при температуре 420С в течение 24 часов.

При данных условиях культура Pseudomonas aeruginosa растет с образованием сине-зеленого пигмента.

Если в результате исследований обнаружены колонии грамотрицательных неспорообразующих палочек, дающих положительную оксидазную реакцию, образующих пигмент или без него и дающие рост при 420С, считают, что парфюмерно-косметическое средство контаминировано

Pseudomonas aeruginosa.

13.3.5. Санитарно-микробиологическое исследование аптечного оборудования и лекарственных средств

(МУК 1201-74, ОСТ 42-510-98).

Определение стерильности лекарственных средств.

Определение микробной обсемененности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.

Пробу для исследования отбирают в количестве не менее чем 50,0г или 50,0мл препарата.

10,0г или, соответственно, 10,0мл отобранной пробы разводят стерильно 0,1М фосфатным буфером (рН 7,0) или соответствующей питательной средой, доводя конечный объем до 100,0мл.

1,0мл препарата, разведенного 1:10, вносят в 2 пробирки с 4,0мл расплавленного и охлажденного до 40-450С МПА с 0,1% глюкозой. Смесь перемешивают и выливают в 2 чашки Петри с аналогичной питательной средой (МПА с 0,1% глюкозой).

Полученные чашки инкубируют при 370С в течение 5 суток, после чего подсчитывают общее число колоний бактерий, затем находят среднее арифметическое для двух чашек и таким образом, высчитывают количество бактерий в 1,0г (1,0мл) образца.

Определение стерильности инъекционных препаратов.

Из каждой серии препарата из 10 000 флаконов берут 3 флакона и дополнительно по 1 флакону от каждых последующих 10 000 флаконов.

194

Для посева используют МПБ с 0,5% глюкозы, среду Китт-Тароцци, среду Сабуро.

Для проверки стерильности все среды после стерилизации выдерживают в термостате при 370С в течение 5 суток, а среду Сабуро в течение 24 часов.

Определение стерильности антибиотиков.

Перед посевом содержимое каждого флакона с препаратом растворяют в стерильной дистиллированной воде и засевают в 15 пробирок с МПБ и глюкозой, а в 5 пробирок со средой Сабуро по 0,2мл, создавая концентрацию антибиотика 2500 ЕД.

Засеянные среды культивируют 5 суток при ежедневном просмотре при различных температурах:

–при 370С – 10 пробирок с МПБ и глюкозой,

–при 240С – 5 пробирок со средой Сабуро.

С целью проверки инактивации антибиотика одну из проб с МПБ с глюкозой одновременно засевают 18-часовой культурой соответствующего тест-микроорганизма из расчета 250 микробных клеток на 1,0мл среды и выдерживают при 370С в течение 5-ти суток.

При наличии роста на питательной среде (диффузное помутнение) через 18 часов культивирования посев повторяют из удвоенного количества образцов на двойном количестве сред.

При наличии роста хотя бы в единичных пробах препарат считают нестерильным.

Определение стерильности препаратов, не обладающих бактериостатическим действием.

Препарат, не обладающий бактериостатическим действием, засевают:

–по 0,5мл в 5 пробирок с МПБ с глюкозой,

–по 0,2мл в 3 пробирки с МПА;

–по 0,5мл в пробирки со средой Китт-Тароцци – для выделения анаэробов;

–по 0,5 мл в 3 пробирки со средой Сабуро – для выявления плесневых и дрожжевых грибов.

Засеянные среды культивируют 7 суток при ежедневном просмотре при различных температурах:

–при 370С – МПБ с глюкозой (3 пробирки), МПА (3 пробирки), среда Китт-Тароцци (3 пробирки);

–при 240С – МПБ с глюкозой (2 пробирки), среда Сабуро (3 пробирки); При наличии роста на средах посевы повторяют из удвоенного

количества образцов на двойном количестве сред.

Определение стерильности препаратов, обладающих бактериостатическим действием.

По 5,0мл препарата вносят в колбы с 200,0мл МПБ с глюкозой и инкубируют в течение 3 суток.

195

После этого делают высев так же, как и препаратов, не обладающих бактериостатическим действием.

Дальнейшее исследование проводят, как и в предыдущем случае, с препаратами, не обладающими бактериостатическим действием.

Определение стерильности препаратов, обладающих бактерицидным действием.

Раствор препарата пропускают через 2 мембранных фильтра (по 10,0мл через каждый фильтр).

После фильтрации каждый использованный фильтр отмывают от препарата 3 порциями стерильного изотонического раствора хлорида натрия (до 100,0мл) и помещают в чашки Петри:

–на МПА – для выявления бактерий,

–на среду Сабуро – для выявления плесневых и дрожжевых грибов.

Учет результатов проводят после инкубирования при 370С в течение 7 суток.

На фильтрах, помещенных в питательную среду, не должно быть никаких колоний микроорганизмов.

При наличии роста на средах посевы повторяют из удвоенного количества образцов на двойном количестве сред.

197

Анализ воды на общие (ОКБ) и термотолерантные (ТКБ) колиформные бактерии титрационным методом

(количественный анализ)

198

Определение в воде спор сульфитредуцирующих клостридий

(согласно МУК 4.2.1018-01 для посева или фильтрования обязательно использовать 20,0мл воды)

Фильтруют

Если не отмечаем рост черных колоний на фильтрах – отрицательный ответ: «споры в 20,0мл не обнаружены»

201

Определение энтерококков в пищевых продуктах

0,1см3 жидкого продукта засевают на поверхность молочной среды с полимиксином в 2 чашки Петри

инкубируют при 370С в течение 48 часов

При просмотре посевов учитывают, что типичные колонии энтерококков красного цвета с зоной протеолиза.

Такие типичные колонии подсчитывают и среднеарифметическое умножают на 10: это количество энтерококков в 1,0г продукта

2-3 типичные колонии отсевают на скошенный агар для накопления чистой культуры

инкубируют при 370С в течение 24 часов

Из исследуемой культуры готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют, определяют каталазную активность, засевают в бульон, содержащий 40% желчи

Посев бактерий в бульоне инкубируют при 370С в течение 48 часов. Возможный рост подтверждают:

– микроскопией мазка

– постановкой теста на каталазу

выделение грамположительных кокков, расположенных цепочкой, каталазоотрицательных, растущих в присутствии 40% желчи свидетельствуют о наличии в продукте энтерококков

202

Определение количества дрожжей и плесневых грибов в пищевых продуктах

1,0см3 нативного продукта 1,0см3 из разведений продукта 1:10 1,0см3 из разведений продукта 1:100

высевают на 2 чашки Петри со средой Сабуро

через 20 мин в каждую чашку добавляют 14,0см3 расплавленной и охлажденной до 40-450С среды, добавляют антибиотики.

содержимое тщательно перемешивают, дают застыть

инкубируют вверх дном при 240С в течение 5 суток (120 часов)

При учете посевов проводят подсчет типичных колоний на каждой чашке отдельно. Колонии дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально, при необходимости проводят микроскопическое исследование.

Типичные колонии дрожжей:

крупные, выпуклые, блестящие, серовато-белые или беловато-желтые, с гладкой поверхностью и ровным краем, сметанообразной консистенции; могут иметь перламутровый оттенок и куполообразное возвышение.

Типичные колонии плесневых грибов:

имеют поверхность, покрытую пушистым мицелием, похожим на вату.