Биохимическая активность

Ферментирует с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, дульцит и декстрин, несколько отсроченно (к 7 суткам) — маннит, арабинозу, рамнозу, ксилозу, левулезу и раффинозу. Не образует индол и H₂S; реакция Фогеса-Проскауэра отрицательна; медленно сворачивает и пептонизирует молоко: медлен­но разжижает желатин.

Патогенез

Внедрение возбудителя сопровождается незначительной воспали­тельной реакцией. Мигрирующие фагоциты поглощают Pseudomonas pseudomallei, однако фагоцитарные реакции носят незавершенный характер, и возбудитель диссеминирует по кровеносным и лимфатическим путям. В последующем процесс приобретает септико-токсемический характер с формированием абсцедирующих гранулем в различных органах, т.е. его проявления не имеют патогномоничных признаков и часто имитируют различные инфекции.

Клинические проявления

Инкубационный период варьирует от 2 до 14 суток; выделя­ют 4 основные формы инфекционного процесса — токсическую, ост­рую, подострую и хроническую. Летальность при острых формах может достигать 50% и выше.

Лабораторная диагностика

Включает выделение (рис. 13), серологическое выявление Аг возбудителя, постановку биологической пробы и кожных проб с маллеином. Материалы для бактериологического исследования — кровь, мокрота, моча,

Рисунок 13. Принципиальная схема бактериологического выделения Pseudomonas pseudomallei

гнойное отделяемое из абсцессов и секционный материал (из органов, где имеются очаги поражения). Образцы, контаминированные сопутствующей микрофлорой (выявляют при микроскопии), обрабаты­вают пенициллином (1000 ЕД на 1 мл). Характерные особенности — медленный рост на кровяном агаре с образованием М-, S- и R-колоний кремово-оранжевого цвета; подвижность; способность к росту при температуре 42°С; способность гидролизовать желатин, аргинин и окислять глюкозу, мальтозу и лактозу. Биологическую пробу проводят на крысах (резистентны к возбудителю сапа) и морских свинках, заражаемых внутрибрюшинным введением соответственно 0,5 и 1 мл суспензии материалов; у самцов морских свинок может развить­ся феномен Штрауса. В зависимости от вирулентности штамма животные погибают на 3-15 сутки; их вскрытие выявляет характерные поражения внутренних органов и наличие мик­роорганизмов, которые следует изолировать и определить их биохимические свойства. Серологи­ческие исследования включают постановку РСК, РНГА, РА с сывороткой пациента; диагности­ческими титрами для РА считают разведение 1:640, для РСК — 1:20, для РНГА — 1:4 и выше.

Питательные среды для культивирования и идентификации псевдомонад

Среда Кинга А. Пептон — 20,0 г, глицерин — 10,0 г, калий серно­кислый — 10,0 г, магний хлористый — 1,4 г, агар — 20,0 г, вода дис­тиллированная — до 1000,0 мл.

Среда Кинга В. Пептон — 20,0 г, глицерин - 10,0 г, калий фосфор­нокислый двузамещенный — 1,5 г, магний сернокислый — 1,5 г,агар — 15,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,2).

Среда Мак-Конки. Пептон — 20,0 г, лактоза — 10,0 г, натрий хло­ристый — 5,0 г, таурохолат натрия — 5,0 г, нейтральный красный — 0,03 г, агар — 20,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,4).

Среда Хью-Лейвсена. Пептон — 2,0 г, агар - 3,0 г, натрий хлорис­тый — 5,0 г, калий фосфорнокислый двузамещенный — 0,3 г, 0,2 %-ный водный раствор бромтимолового голубого — 15,0 мл, глюкоза — 10,0 г, дистиллированная вода — до 1000,0 мл.

Цетримидный агар. Пептон — 20,0 г, агар —13,0 г, магний хлористый — 1,4 г, калий сернокислый — 10,0 г, цетримид (цетилтриметиламмония бромид) - 0,3 г, глицерин — 10,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 7,2).

Селективная среда (Мороз, Бекбергенов, Афиногенов). Пептон — 20,0 г, агар — 10,0 г, калий сернокислый — 7,0 г, магний хлористый — 15,0 г, магний сернокислый — 1,5 г, цетилпиридиния хлорид — 2,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 6,8-7,0).

Среда с ацетамидом. Агар — 15,0 г, натрий хлористый — 5,0 г, маг­ний сернокислый — 0,2 г, аммоний фосфорнокислый однозамещенный — 1,0 г, калий фосфорнокислый двузамещенный — 1,0 г, ацетамид — 20,0 г, вода дистиллированная — до 1000,0 мл (рН 6,7).

Среда Паллерони—Дудорова. Хлористый аммоний — 1,0 г, маг­ний сернокислый — 0,5 г, железо аммоний цитрат — 0,05 г, хлористый кальций — 0,005 г, 0,33 М Na-К фосфатный буфер (рН 6,8) — до 1000 мл. Первые два ингредиента добавляют к буферному раствору и автоклавируют при 115°С 30 минут. Железа аммонийцитрат и хлорис­тый кальций стерилизуют путем фильтрации и вносят в основной раст­вор асептически (перед засевом среды).

Картофельно-глицериновая среда. Вырезанные из очищенного кар­тофеля цилиндры диаметром 1 см и длиной 4-5 см разрезают по диаго­нали для получения клиньев. Клинья выдерживают 2 ч в 1%-ном раство­ре бикарбоната натрия, после чего подсушивают и в течение 2 суток выма­чивают в 5-6%-ной глицериновой воде или бульоне. Опускают основа­нием вниз в пробирки с 5%-ной глицериновой водой. Для того чтобы картофель не касался глицериновой воды, используют пробирки с пере­тяжкой в нижней части или в них опускают короткие стеклянные палоч­ки. Среду автоклавируют при 115-120°С 20 минут.

Пробирки со средой хранят в наклонном положении плоской по­верхностью картофеля вниз (с целью сохранения поверхности для по­сева влажной).