5. Понятие о культуральных свойствах бактерий.

Культуральные свойства – характер роста на  питательных средах. 

Время культивирования - время от момента посева до момента  наблюдения видимого роста бактерий на  жидких или плотных питательных средах  невооруженным глазом. Большинство  патогенных бактерий являются быстро  растущими: видимый рост на питательных  средах наблюдается через 18—24 ч.  (определенные виды – до 72 ч.). При культивировании медленно растущих  микробов этот срок может увеличиваться  до 4—6 недель и более 

Окраска колоний определяется способностью бактерий синтезировать пигменты. Пигменты различаются по цвету, химическому составу и растворимости. Пигменты предохраняют бактериальную клетку от УФ-лучей, обезвреживают токсичные кислородные радикалы, обладают антибиотическими свойствами, принимают участие в реакциях, сопутствующих фотосинтезу в фототрофных бактериях.

Вначале проводят описание характера роста колоний на питательной среде, т.е. их культуральные свойства. Описание проводят по следующей схеме.

• Форма колонии: круглая, неправильной формы, розоидная и др.

• Поверхность колонии: гладкая, шероховатая, морщинистая и др. Колонии с гладкой блестящей поверхностью принято называть колониями в S-форме (от англ. smooth - гладкий). Колонии с матовой шероховатой поверхностью называют R-формами (от англ. rough - шероховатый).

• Профиль колонии: плоский, выпуклый, кратерообразный.

• Блеск и прозрачность: матовая, блестящая, прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная.

• Цвет колонии: бесцветная или пигментированная.

• Край колонии: ровный, волнистый, зубчатый (изучают при малом увеличении микроскопа).

• Структура колонии: однородная, неоднородная.

• Консистенция колонии: мягкая, тягучая, слизистая, хрупкая.

6. Этапы выделения и идентификации чистых культур бактерий. Понятие о бактериологическом методе диагностики инфекционных болезней.

Бактериологическое исследование основано на культивировании бактерий на питательных средах, выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации. Чистой культурой называют популяцию микроорганизмов одного вида, как правило выращенную из изолированной колонии на плотной питательной среде. Разрешающая способность метода составляет в среднем 1000 клеток в 1 мл.

Известно, что возбудители инфекционных болезней в организме человека, животных и во внешней среде находятся преимущественно в смеси с другими микроорганизмами (в том числе условно-патогенными и сапрофитами). Выделение чистой культуры позволяет выявить ее морфологические, культуральные, биохимические и другие признаки, по совокупности которых определяют видовую принадлежность возбудителя, т. е. осуществляют его идентификацию. Аэробные и факультативно-анаэробные бактерии.

1. На первом этапе из исследуемого материала готовят мазки, микроскопируют их, затем сеют материал на плотную среду в чашки Петри шпателем или бактериологической петлей. При этом достигается механическое разъединение микроорганизмов на поверхности питательной среды, что позволяет получить их рост в виде изолированных колоний. В отдельных случаях исследуемый материал вначале сеют в жидкую среду накопления, а затем пересевают его в чашки Петри с плотной питательной средой. Чашки с посевами обычно помещают в термостат на 18 —24 ч при 37 °C.

2. На втором этапе изучают культуральные свойства бактерий (характер их роста на питательных средах). Макроскопическое изучение колоний в проходящем и отраженном свете. Чашку поворачивают дном к себе и рассматривают колонии в проходящем свете. При наличии различных видов колоний их нумеруют и описывают каждую в отдельности.

Обращают внимание на следующие свойства:

а) величину колоний (крупные — более 4 мм в диаметре, средние — 2 — 4 мм, мелкие — 1 — 2 мм, карликовые — менее 1 мм);

б) форму очертаний колоний (правильно и неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.);

в) степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).

В отраженном свете рассматривают колонии со стороны крышки, не открывая ее, и фиксируют в протоколе следующие данные:

а) цвет колоний (бесцветные, пигментированные, цвет пигмента);

б) поверхность (гладкая, блестящая, влажная, морщинистая, матовая, сухая и др.);

в) рельеф (выпуклые, погруженные в среду, плоские, с куполообразным центром, с валиком по краю и др.).

Микроскопическое изучение колоний. Чашку устанавливают вверх дном на предметном столике микроскопа, опускают конденсор и с помощью объектива 8х изучают колонии, фиксируя в протоколе их

А) структуру (гомогенная или аморфная, зернистая, волокнистая и др.) и

Б) характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые и др.).

В) Из части колоний готовят мазки (при взятии материала из колонии отмечают ее консистенцию — сухая, слизистая, пастообразная),

Г) окрашивают по Граму и микроскопируют, выясняя тинкториальные свойства микроорганизмов.

3. При наличии однородных бактерий остаток колоний пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры в достаточном количестве. Пробирки с посевами помещают в термостат на 18 —24 ч при температуре 37 °C. На третьем этапе из выросшей на скошенном агаре культуры делают мазки, окрашивают их по Граму. О чистоте культуры судят по однородности роста, формы, размера и окраски микроорганизмов. Для идентификации выделенной чистой культуры, кроме изучения морфологических, тинкториальных и культуральных особенностей микроорганизмов, необходимо определить их ферментативные и антигенные свойства, фаго- и бактериоциночувствительность, токсигенность и другие признаки, характеризующие их видовую специфичность.