15.Опишите принцип метода и диагностическое значение определения содержания триглицеридов и фосфолипидов в сыворотке крови

Работа 1. Определение содержания триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови

Диагностическое значение: установлено, что в сыворотке практически здоровых людей содержание триглицеридов колеблется в пределах 0,55–1,65 ммоль/л (0,5–1,5 г/л). Верхняя граница нормальных величин зависит от возраста, принадлежности лица к определенному полу, региона проживания и других причин. Количество триглицеридов в сыворотке крови повышается при ожирении, ишемической болезни сердца, атеросклерозе, заболевании печени и др. органов.

Принцип метода определения содержания ТГ основан на сопряженных ферментативных реакциях (1–4), в результате действия энзимов триглицериды гидролизуются (1) с образованием глицерина; глицерин фосфорилируется (2) и далее окисляется (3) с выделением перекиси водорода, которая в свою очередь окисляет неокрашенный субстрат (4) до соединения красного цвета. Окраска раствора прямо пропорциональна содержанию триглицеридов в сыворотке крови:

1) триглицериды глицерин+жирная кислота

2) глицерин глицерол–3–фосфат+АДФ

3) глицерол–3–фосфат дигидроксиацетон–Ф+Н₂О₂

НАДН₂

4) неокрашенный субстрат окрашенный субстрат+Н₂О

(неокисленный) (окисленный)

Работа 2. Определение содержания фосфолипидов в сыворотке крови

Диагностическое значение: в сыворотке крови практически здоровых людей содержится 1,5–3,6 г/л фосфолипидов. Доля неорганического фосфора составляет в них 1/25 часть, т.е. в сыворотке крои содержится 2,0–3,5 ммоль/л или 0,07–0,11 г/л липидного фосфора. Определив количество последнего в составе фосфолипидов и умножив эту величину на 25, мы легко можем рассчитать содержание фосфолипидов в исследуемой сыворотке крови. В клинике для диагностики заболеваний нередко определяют коэффициент фосфолипиды/холестерин (ФЛ/ХС), который в норме составляет 1,0–1,4. При атеросклерозе, гипертонической болезни и др. заболеваниях его величина понижается.

Принцип метода определения фосфолипидов в сыворотке крови основан на измерении содержания фосфора фосфолипидов, после экстракции этих веществ из сыворотки крови и минерализации их серной кислотой. Неорганический фосфор, освобожденный при этом из фосфолипидов, действием молибденовокислого аммония переводят в комплексное соединение – фосфомолибденовокислый аммоний, который затем восстанавливают аскорбиновой кислотой в молибденовую синь. Интенсивность синей окраски пропорциональна концентрации фосфора в сыворотке крови.