Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10

1.1. Проблема постспленэктомического гипоспленизма 10

1.2. Ксенотрансплантация свиных органов и тканей 16

1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации 19

Глава 2. Материалы и методы исследования 25

2.1 Общая характеристика экспериментального материала 25

2.2. Характеристика методов исследования 28

2.2.1. Техника оперативных вмешательств 28

2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации 29

2.2.2.3 Ранотензиометрия 35

2.2.3.4 Иммунологические методы исследований 37

2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови 38

2.2.3.6 Бактериологические методы исследований 38

2.3.Методы статистической обработки 40

Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41

3.1.Технология выделения клеток селезенки 41

3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки 41

3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток 44

3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи 46

3.2.Консервация клеток 48

3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации 48

3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация 54

Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55

4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента 55

4.2 Летальность в экспериментальных группах 56

4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма 65

4.3.2.Исследование структуры легких 70

4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации 72

4.5. Результаты ранотензиометрических исследований 77

Резюме 78

Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79

5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки 79

5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде 82

5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде 90

5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма 99

Заключение 104

выводы 135

Практические рекомендации 137

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 138

 

Введение

Актуальность работы

Синдром постспленэктомического гипоспленизма является одной из актуальных проблем современной медицины. Повышение восприимчивости к возбудителям инфекционных заболеваний [211], увеличение частоты гнойно-воспалительных осложнений в раннем послеоперационном периоде [43], расстройства иммунной системы и снижение антибластической резистентности, возникающие после аспленизации [59,180,199,211,249], все это составляет междисциплинарную проблему, весьма важную, так как спленэктомия до настоящего времени остается самым частым вмешательством на селезенке [57,273].

Существуют способы хирургической профилактики постспленэктомического гипоспленизма (прежде всего, органосохраняющие операции на селезенке [25,43,134,204]), однако их применение не всегда возможно и эффективно [11,44,249].

С другой стороны, в медицине используются свиные ткани, в том числе трансплантация островков Лангерганса при лечении сахарного диабета [112,275,285], введение нервных клеток при болезни Паркинсона и Хаттингтона, эпилепсии [178].

Предлагается использовать ксенотрансплантацию гепатоцитов в качестве временной меры перед аллотрансплантацией печени [177,213].

Широко распространено применение ксеноселезенки для лечения больных с иммунными нарушениями [28] и в условиях хирургической инфекции [130], причем лечебное воздействие объясняется эффектами биологически активных веществ ксеноселезенки и непосредственным воздействием живых клеток [29,111].

До настоящего времени разрабатываются технологии выделения [122,192], культивирования и криоконсервации [114,340] тканевых лимфоцитов, дискутируются оптимальные способы их введения в организм реципиента [48,72,85,186,272].

В литературных источниках отсутствует информация о коррекции постспленэктомического гипоспленизма путем ксенотрансплантации клеток селезенки. Названные обстоятельства послужили побудительным мотивом к выполнению настоящего исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: оценить эффективность коррекции постспленэктомического гипоспленизма в раннем послеоперационном периоде путем ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток селезенки.

ЗАДАЧИ:

1. Усовершенствовать методику получения криоконсервированных клеток селезенки новорожденной свиньи.

2. Провести сравнительное исследование летальности у животных с индуцированным постспленэктомическим гипоспленизмом под влиянием ксенотрансплантации криоконсервированных клеток селезенки.

3. Выяснить закономерности ранних морфологических изменений в печени, легких и зоне трансплантации ткани селезенки в условиях постспленэктомического гипоспленизма.

4. Исследовать влияние трансплантации клеток селезенки на течение раневого процесса у животных с индуцированным гипоспленизмом с помощью ранотензиометрии.

5. На основании биохимических тестов охарактеризовать белковосинтетическую функцию печени и выраженность цитолитического синдрома в условиях постспленэктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки.

1. Оценить гипоспленические изменения неспецифической резистентности организма и системы гемостаза под влиянием трансплантации клеток ксеноселезенки.

Научная новизна

Обоснованы оптимальные режимы выделения и культивирования клеток селезенки свиньи для криоконсервации.

На основании морфо-функциональной оценки установлена эффективность ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток свиной селезенки для коррекции постспленэктомического гипоспленизма в раннем послеоперационном периоде.

Получены новые данные о влиянии ксенотрансплантации клеток селезенки на системы иммунитета, гемостаза и неспецифической резистентности организма в условиях постспленэктомического гипоспленизма.

Практическая значимость работы

Усовершенствована методика выделения и криоконсервации культуры клеток селезенки новорожденных свиней, позволяющая получать материал с высокой степенью жизнеспособности. Предложена оригинальная среда для криоконсервации клеток селезенки (заявка на изобретение «Среда для консервации клеток селезенки», приоритетная справка №2001101802/20 (001594)).

Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе кафедры госпитальной хирургии Иркутского государственного медицинского университета и Научного центра реконструктивной и восстановительной хирургии Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Оптимизация режимов выделения и криоконсервации клеток селезенки новорожденной свиньи позволяет получать изолированные клетки или их культуру с высокими показателями жизнеспособности.

2. Введение ксеногенной культуры криоконсервированных клеток селезенки крысам является эффективным способом коррекции постспленэктомического гипоспленизма в раннем периоде после аспленизации.

3. Пятисуточная культура клеток селезенки новорожденной свиньи обладает более выраженными саногенными эффектами при трансплантации аспленизированным крысам, чем изолированные клетки селезенки

Апробация основных положений работы

Материалы исследования представлены на II Межрегиональной научно-практической конференции «Клинические аспекты клеточной и тканевой терапии» (Омск, 2000), Международном симпозиуме «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2000), Всероссийской конференции «Новые направления в клинической медицине» (Ленинск-Кузнецкий, 2000), симпозиуме по проблемам тканевых банков с международным участием «Биоимплантология на пороге XХI века» (Москва, 2001), Областной научно-практической конференции врачей хирургических специальностей «Актуальные вопросы современной хирургии» (Иркутск, 2001).

По материалам диссертационного исследования опубликовано 6 работ, в которых изложены основные положения диссертации.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, трех глав собственных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы.

Текст изложен на 166 страницах машинописи, иллюстрирован 20 таблицами и 18 рисунками. Библиография включает 364 источника, из них 143 отечественных и 221 иностранный.