2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Общая_микробиология

492

5

1

6

2

7

3

Этапы приготовления препаратов для микроскопического исследования.

Этапы окраски препарата по Граму.

493

Нанесение на предметное стекло воды.

Отбор культуры с питательной среды.

Фиксирование препарата.

495

Промывание препарата водой.

Нанесение раствора фуксина.

Промывание препарата.

496

Высушивание препарата.

Нанесение на препарат иммерсионного масла.

Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.

Тема 4: Питательные среды. Посев микроорганизмов на плотные и в жидкие питательные среды.

497

Цели занятия: Познакомить студентов с классификацией питательных сред. Обучить студентов технике посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.

Задачи занятия:

1.Ознакомление студентов с микробиологическими питательными средами.

2.Овладение студентами техники посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.

После изучения темы студент должен:

знать:

- классификацию питательных сред; - правила посева культур на плотные и в жидкие питательные среды;

уметь:

- пользоваться бактериологической петлей;

владеть:

-методикой посева культур в жидкие и на плотные питательные среды;

-микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

Питательные среды, их классификация.

Микроорганизмы культивируют на питательных средах. Питательные среды подразделяются на группы в зависимости от свойств.

По физическому состоянию питательные среды подразделяются на:

-жидкие среды;

-полужидкие среды;

-твердые (плотные) среды;

Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). Полужидкие среды получают путем добавления к жидким средам 0,5-0,9% агар-агара (желеобразующее вещество, получаемое из морских водорослей). К плотным питательным средам относят среды, содержащие 2-3% агара.

По сложности питательные среды подразделяются на:

-простые, или обычные среды (пептонная вода, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар);

-сложные, или специальные среды (кровяной агар, асцитический агар и бульон, мясо-пептонный сахарный бульон, сывороточный агар и бульон, свернутая сыворотка, кровяной бульон).

По происхождению питательные среды подразделяются на:

-естественные среды;

-полусинтетические среды;

-синтетические среды.

Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы).

498

Полусинтетические среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда).

Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава.

По набору питательных веществ выделяют:

-минимальные среды, которые содержат лишь источники питания, достаточные для роста;

-богатые среды, в состав которых входят многие дополнительные

вещества.

В зависимости от назначения питательных сред различают:

-основные среды;

-элективные (селективные) среды;

-дифференциально-диагностические среды;

-накопительные среды (среды обогащения).

К основным средам относятся мясо-пептонный агар и мясо-пептонный бульон. На этих средах растет большинство бактерий.

Дифференциально-диагностические среды - это сложные среды,

позволяющие изучать биохимические свойства бактерий. Эти среды используются для определения вида бактерий.

Элективные (селективные) питательные среды содержат вещества,

подавляющие рост одних бактерий, и не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенного вида бактерий из смешанных популяций.

Накопительные питательные среды (среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующих.

Посев микроорганизмов на питательные среды. Техника посева зависит от характера исследуемого материала и консистенции питательной среды.

Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или стерильной пипеткой. Все манипуляции проводят вблизи пламени спиртовки. Бактериологическую петлю перед взятием материала и по окончании посева стерилизуют прокаливанием в пламени спиртовки. Пипетки после посева погружают в емкость с дезраствором.

При посеве в жидкую питательную среду петлю с материалом погружают в среду и легким покачиванием смывают материал. При использовании пипетки материал сливают в среду.

При посеве на скошенный питательный агар в пробирке петлю с материалом вносят вблизи пламени спиртовки в пробирку и материал штрихом распределяют по поверхности агара.

Посев материала на агар в чашке Петри проводят с помощью бактериологической петли, шпателя или тампона. Посев бактериологической петлей проводят штрихом по поверхности агара. С помощью шпателя или тампона исследуемый материал распределяется по поверхности среды круговыми движениями.

Для посева в толщу питательной среды материал вносят в стерильную чашку Петри или в пробирку, добавляют остуженный (40-45ОС) расплавленный агар

499

и перемешивают.

Посев уколом в столбик питательной среды проводят с помощью бактериологической иглы или петли путем прокалывания столбика среды.

Самостоятельная работа.

Каждый студент проводит пересев бактерий из жидких и с агаровых культур на плотные и в жидкие питательные среды. Порядок пересевов студенты записывают в рабочую тетрадь.

Иллюстративный материал

Варианты посева штрихом.

Расположение петли при посеве штрихом.

500

Посев в чашку Петри.

Посев тампоном.

Посев по Дригальскому.