2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Общая_микробиология
.pdf
501
Посев из пробирки в пробирку.
Тема 5: Антибиотики. Методы определения чувствительности бактерий
к антибиотикам.
Цели занятия: Изучить со студентами классификацию антибактериальных препаратов, механизмы действия антибиотиков на бактерии, методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
Задачи занятия:
1.Изучение классификации антибактериальных препаратов.
2.Изучение механизмов действия антибактериальных препаратов на микробную клетку.
3.Изучение методов определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
После изучения темы студент должен:
знать:
- классификацию антибиотиков; - механизмы действия антибиотиков на бактерии;
уметь:
- определять чувствительность бактерий к антибиотикам методом дисков;
владеть:
- микробиологическим понятийным аппаратом.
Справочные материалы
Химиотерапевтические препараты: По спектру активности:
- действующие на клеточные формы микроорганизмов (антибактериальные, противогрибковые, противопротозойные). Антибактериальные препараты кроме того подразделяются на препараты широкого спектра действия (действуют на грамположительные и грамотрицательные бактерии) и препараты узкого спектра
504
стандартные индикаторные диски, пропитанные антибиотиками. Расстояние дисков от края чашки должно быть не менее 1,5 см. Расстояние между дисками также должно быть не менее 1,5 см. На чашку помещают 5-6 дисков. Чашки инкубируют в термостате при 36ОС в течение 18-24 часов.
Учет результатов проводится путем измерения диаметров зон ингибирования роста бактерий.
Иллюстративный материал
Диски с антибиотиками.
Результат определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.
505
Измерение зон ингибирования роста бактерий.
Тема 6: Микрофлора почвы, воды, воздуха.
Цель занятия: Изучить со студентами микрофлору почвы, воды, воздуха.
Задачи занятия:
1.Изучение микрофлоры почвы и методов определения микробного загрязнения почвы.
2.Изучение микрофлоры воды и методов определения микробного загрязнения воды.
3.Изучение микрофлоры воздуха и методов определения микробного загрязнения воздуха.
4.Обучить студентов методике определения микробного загрязнения воздуха седиментационным методом.
После изучения темы студент должен:
знать:
- микрофлору воды, почвы, воздуха; - методы определения загрязненности микроорганизмами почвы, воды и
воздуха;
уметь:
- определять микробную загрязненность воздуха седиментационным методом;
владеть:
- микробиологическим понятийным аппаратом.
Справочные материалы
Микрофлора почвы
Находящиеся в почве микроорганизмы подразделяются на две группы:
- аутохтонные микроорганизмы (резидентные микроорганизмы,
резидентная микрофлора), то есть микробы, которые присутствуют только
вконкретном типе почвы;
-аллохтонные микроорганизмы (транзиторная микрофлора), то есть те микроорганизмы, которые в обычных условиях в почве не встречаются.
506
В плодородной почве общая биомасса бактерий достигает 500 кг/га и более. Наибольшее значение для почв имеют азотфиксирующие бактерии
(Azotobacter, Nitrobacter, Mycobacterium и другие). К типичным почвенным бактериям относятся актиномицеты и спорообразующие палочки родов Bacillus и Clostridium.
Наиболее многочисленны микроорганизмы в верхнем 5-15-сантиметровом слое, меньше их на глубине 20-30 см и минимальное количество на глубине 30-40 см. Однако бактерии найдены в почве даже на глубине 5 м.
Почва населенных мест загрязняется твердыми и жидкими отбросами, выделениями людей и животных, остатками растений, хозяйственно-бытовыми и промышленными сточными водами. Особенно опасны сточные воды боен, мясокомбинатов, предприятий по переработке кожи, шерсти, которые могут содержать патогенные бактерии. В связи с этим почва может служить фактором передачи возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее длительно живут спорообразующие микробы – возбудители столбняка, ботулизма, сибирской язвы.
Микробиологическое исследование почвы проводят для ее санитарной оценки, характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т. д.
Отбор проб почвы производят с квадратного участка (не менее 5x5 м) из 5 точек - из каждого угла и центра квадрата (“метод конверта”). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. Объем образцов 1 кг.
Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее свежем фекальном загрязнении. Обнаружение Cl. perfringens в почве указывает на ее давнее фекальное загрязнение.
Микрофлора воды Микрофлору водоемов образуют две группы:
-аутохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде;
-аллохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, случайно попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время.
Всоответствии с действующими нормативными документами обязательному микробиологическому контролю подлежит вода питьевая (центрального и местного водоснабжения).
Отбор проб. Для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы ёмкостью 500 мл. Предварительно проводят обжигание водопроводных кранов пламенем и пропускают воду в течение 10-15 минут при полностью открытом кране.
Показатели загрязнения:
- E. coli – свежее фекальное загрязнение;
- Citrobacter, Enterobacter – давнее фекальное загрязнение;
- Cl. perfringens (sporogenes) – как свежее, так и давнее фекальное загрязнение;
- термофильные бактерии – загрязнение разлагающимися отбросами; - протей – гнилостный распад.
507
Микрофлора воздуха
Воздух – неблагоприятная среда для размножения микроорганизмов (отсутствие питательных веществ, солнечные лучи, высушивание). Состав микрофлоры воздуха – это пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др.
Наибольшее количество микроорганизмов содержит воздух крупных промышленных городов. Воздух же полей, лесов, лугов, а также над водными пространствами, в удалении от населенных пунктов отличается сравнительной чистотой. Значительные изменения претерпевает микрофлора воздуха в зависимости от времени года. Максимальное количество микробов обнаруживают в летнее время, а минимальное – в зимнее время.
Микробиологическое исследование воздуха проводится с помощью седиментационного или фильтрационного методов.
Седиментационный метод Коха - спонтанное оседание бактериальных частиц и капель под действием силы тяжести на поверхность питательной среды открытой чашки Петри. При этом читается, что в соответствии с формулой В.Л. Омелянского на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри площадью 100 см2 за 5 минут оседает такое количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.
Для определения чистоты воздуха при седиментационном методе чашки выдерживают открытыми в течение 60 минут, а затем инкубируют при 37ОС. Результаты оценивают следующим образом:
-менее 250 колоний – чистый воздух;
-250-500 колоний – средняя степень загрязненности;
-более 500 колоний – загрязненный воздух.
При фильтрационных методах отбор проб воздуха осуществляется с помощью различных приборов и аппаратов. В частности при использовании аппарата Кротова отбор проб воздуха (по 100 л ) производится над двумя чашками Петри с мясо-пептонным агаром. Посевы культивируют 48 часов при 37оС. После инкубирования подсчитывают число колоний на питательной среде и вычисляют количество бактерий в исследуемом воздухе.
Подсчет микробного числа для определения чистоты воздуха при использовании аспирационного метода (прибора Кротова) проводится по формуле:
Х = 1000а / V, где а – количество колоний на чашке; V – объем прокаченного воздуха.
Самостоятельная работа.
Студенты определяют микробную загрязненность воздуха седиментационным методом Коха. Для этого открытую чашку с МПА на 5 минут оставляют в помещении на уровне рабочего стола, после чего убирают в термостат при 37ОС на 24 часа. Расчет микробного числа проводится по эмпирической формуле Омелянского: на поверхности среды в чашке Петри площадью 100 см2 в течение 5 минут оседает такое же количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.
Иллюстративный материал
509
Пробоотборники.
Пробоотборник MAS-100.
Тема 7: Нормальная микрофлора тела человека.
Цель занятия: Изучить со студентами нормальную микрофлору тела человека и ее значение для организма.
Задачи занятия:
1.Изучение нормальной микрофлоры различных областей тела человека.
2.Изучение физиологического значения нормальной микрофлоры тела
человека.
3.Изучение роли дисбиотических состояний в развитии заболеваний.
После изучения темы студент должен:
знать:
-нормальную микрофлору тела человека;
-роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности организма;
уметь:
-готовить препараты зубного налета для микроскопического исследования;
владеть:
- микробиологическим понятийным аппаратом.
Справочные материалы