- •Методы общей бактериологии
- •Введение
- •Бактериологическая лаборатория
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Мытье и обработка лабораторной посуды
- •Дезинфекция
- •Стерилизация
- •Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
- •Виды стерилизации
- •Микроскопические методы исследования
- •Приготовление препаратов для микроскопииживых микроорганизмов
- •Приготовление мазков
- •Окраска мазков
- •Простые методы окраски мазков
- •Окраска по Муромцеву
- •Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков
- •Окраска по Граму
- •Видоизменения метода окраски по Граму
- •Окраска по Граму в модификации Хукера.
- •Выполнение метода:
- •Окраска по Граму в модификации Берка.
- •Выполнение метода:
- •Модификация по Синеву.
- •Модификация по Эткинсу.
- •Техника окраски:
- •Окраска кислотоустойчивых микробов
- •Окраска по методу Циль-Нильсена
- •Окраска в модификации Синева.
- •Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.
- •Выполнение методики:
- •Метод Гонзеля
- •Метод Бунге и Траутенрота
- •Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
- •Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
- •Модификация окраски Грам—Муха
- •Способ Нейссера
- •Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
- •Модификация Саватеева.
- •Окраска по Романовскому-Гимза
- •Окраска капсул
- •Метод окраски капсул по Дюгиду
- •Метод окраски капсул по Гиссу
- •Метод окраски капсул по Антони
- •Способ Михина
- •Способ Гисса
- •Способ Ольта
- •Модификация способа Ольта.
- •Способ Ребигера
- •Способ Гусельниковой
- •Способ Кауфмана
- •Способ Ионе
- •Окраска спор
- •Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру
- •Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону
- •Метод Виртца в модификации Саватеева
- •Модификация Шеффер и Фултона.
- •Способ Пешкова
- •Способ Мюллера
- •Способ Ауески
- •Способ Клейна
- •Окраска жгутиков
- •Метод окраски жгутиков по Грэю
- •Методика:
- •Метод окраски жгутиков по Ляйфсону
- •Методика:
- •Окраска жгутиков серебрением
- •Техника окраски.
- •Способ Уварова
- •Способ Леффлера
- •Способ Инуйе
- •Способ Бениньетти и Джино
- •Цитоплазматические включения
- •Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты
- •Окрашивание полифосфата
- •Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
- •Метод окраски полисахаридов альциановым синим
- •Питательные среды
- •Техника посева микроорганизмов
- •Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды
- •Получение чистых культур
- •Посев штрихом
- •Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
- •Выделение чистой культуры по способу Дригальского
- •Анаэростат для культивирования анаэробов
- •Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов
- •Рост микробов на плотной питательной среде
- •Особенности микробного роста на жидких питательных средах
- •Рост на полужидкой питательной среде
- •Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов
- •Сахаролитические свойства микроорганизмов
- •Протеолитические свойства микроорганизмов
- •Определение протеолитической активности микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов
- •Определение редуцирующей способности
- •Определение фермента каталазы
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Лабораторные животные
- •Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных
- •Правила пополнения вивария новыми животными
- •Правила содержания экспериментальных животных в виварии
- •Уборка и дезинфекция вивария
- •Личная гигиена работников питомника (вивария)
- •Правила кормления лабораторных животных
- •Заболевания лабораторных животных
- •Подготовка животных к заражению
- •Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных
- •Способы заражения
- •Наркоз лабораторных животных
- •Внутрикожный метод
- •Подкожный способ заражения
- •Внутримышечный способ заражения
- •Внутрибрюшинный способ заражения
- •Внутривенное заражение кроликов
- •Внутривенное заражение крыс и мышей
- •Заражение через пищеварительный тракт
- •Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
- •Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
- •Внутримозговой метод (интрацеребральный)
- •Внутриплевральный метод
- •Содержание животных под опытом
- •Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка
- •Умерщвление и вскрытие лабораторных животных
- •Вскрытие животных
- •Определение вирулентности микробов
- •Определение токсигенности микробов
- •Литература
- •Оглавление
- •Методы общей бактериологии
Видоизменения метода окраски по Граму
Как уже упоминалось выше, окраска по Граму представляет собой самый важный метод идентификации бактерий. Теоретически возможно разделить бактерии на две группы: грамположительные и грамотрицательные; реально же имеются случаи, когда одни и те же бактерии характеризуются как «грамвариабельные». С тех пор, как метод был впервые разработан Кристианом Грамом в 1884 г., опубликованы многочисленные модификации окраски по Граму. Мазок бактерий для окрашивания на предметном стекле получают прямым методом из культуры на жидкой или твердой среде, но лучше всего приготовить его из фиксированной формалином отмытой пробы. Несколько дополнительных минут, потраченных на суспендирование бактерий в 5%-ном (объем/объем) формалине, сбор и промывку их центрифугированием, окупаются тем, что размер и форма клеток хорошо сохраняются, клетки прокрашиваются равномерно, а беспорядочно разбросанные преципитаты из жидких культуральных сред отсутствуют. В любом случае рекомендуется высушивать мазок на воздухе и фиксировать его нагреванием, как для простого окрашивания. Важно стандартизировать методику окраски по Граму. Одинаковые результаты дают еще два способа окраски — в модификации Хукера и в модификации Берка.
Окраска по Граму в модификации Хукера.
Раствор А для приготовления красящего реактива: | |
Кристаллический фиолетовый (с 90% содержанием сухого вещества) |
2,0 г |
Этанол 95% (объем/объем) |
20 мл |
Раствор Б для приготовления красящего реактива: | |
Щавелевокислый аммоний |
0,8 г |
Дистиллированная вода |
80 мл |
Растворы А и Б смешивают для получения красящего реактива кристаллического фиолетового. Оставляют на 24 ч и перед использованием фильтруют через фильтровальную бумагу.
Протрава: | |
Йод |
1,0 г |
Йодистый калий |
2,0 г |
Дистиллированная вода |
300 мл |
Йод и йодистый калий размельчают в ступке и медленно добавляют воду при постоянно продолжающемся размельчении, пока йод не растворится. Хранят в темной склянке.
Растворитель для обесцвечивания: | |
Этанол 95% (объем/объем) | |
Дополнительный краситель: | |
Сафранин О [2,5% (вес/объем) в 95% (объем/объем) этаноле] |
10 мл. |
Дистиллированная вода |
100 мл |
Выполнение метода:
Высушенный на воздухе фиксированный нагреванием бактериальный мазок погружают на 1 минуту в красящий раствор кристаллического фиолетового.
Мазок промывают в слабой, идущей под углом струе водопроводной воды в течение 2 с.
Мазок помещают в йодную протраву на 1 минуту.
Промывают его в слабой, идущей под углом струе водопроводной воды в течение 2 с, после чего подсушивают промокательной бумагой.
Погружают мазок на 30 с в 95%-ный этанол, взбалтывая последний, после чего мазок подсушивают промокательной бумагой.
Погружают мазок на 10 с в дополнительный краситель.
Промывают мазок в слабой, идущей под углом струе водопроводной воды до исчезновения окраски в стоке, после чего подсушивают промокательной бумагой.