- •Методы общей бактериологии
- •Введение
- •Бактериологическая лаборатория
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Мытье и обработка лабораторной посуды
- •Дезинфекция
- •Стерилизация
- •Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
- •Виды стерилизации
- •Микроскопические методы исследования
- •Приготовление препаратов для микроскопииживых микроорганизмов
- •Приготовление мазков
- •Окраска мазков
- •Простые методы окраски мазков
- •Окраска по Муромцеву
- •Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков
- •Окраска по Граму
- •Видоизменения метода окраски по Граму
- •Окраска по Граму в модификации Хукера.
- •Выполнение метода:
- •Окраска по Граму в модификации Берка.
- •Выполнение метода:
- •Модификация по Синеву.
- •Модификация по Эткинсу.
- •Техника окраски:
- •Окраска кислотоустойчивых микробов
- •Окраска по методу Циль-Нильсена
- •Окраска в модификации Синева.
- •Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.
- •Выполнение методики:
- •Метод Гонзеля
- •Метод Бунге и Траутенрота
- •Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
- •Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
- •Модификация окраски Грам—Муха
- •Способ Нейссера
- •Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
- •Модификация Саватеева.
- •Окраска по Романовскому-Гимза
- •Окраска капсул
- •Метод окраски капсул по Дюгиду
- •Метод окраски капсул по Гиссу
- •Метод окраски капсул по Антони
- •Способ Михина
- •Способ Гисса
- •Способ Ольта
- •Модификация способа Ольта.
- •Способ Ребигера
- •Способ Гусельниковой
- •Способ Кауфмана
- •Способ Ионе
- •Окраска спор
- •Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру
- •Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону
- •Метод Виртца в модификации Саватеева
- •Модификация Шеффер и Фултона.
- •Способ Пешкова
- •Способ Мюллера
- •Способ Ауески
- •Способ Клейна
- •Окраска жгутиков
- •Метод окраски жгутиков по Грэю
- •Методика:
- •Метод окраски жгутиков по Ляйфсону
- •Методика:
- •Окраска жгутиков серебрением
- •Техника окраски.
- •Способ Уварова
- •Способ Леффлера
- •Способ Инуйе
- •Способ Бениньетти и Джино
- •Цитоплазматические включения
- •Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты
- •Окрашивание полифосфата
- •Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
- •Метод окраски полисахаридов альциановым синим
- •Питательные среды
- •Техника посева микроорганизмов
- •Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды
- •Получение чистых культур
- •Посев штрихом
- •Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
- •Выделение чистой культуры по способу Дригальского
- •Анаэростат для культивирования анаэробов
- •Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов
- •Рост микробов на плотной питательной среде
- •Особенности микробного роста на жидких питательных средах
- •Рост на полужидкой питательной среде
- •Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов
- •Сахаролитические свойства микроорганизмов
- •Протеолитические свойства микроорганизмов
- •Определение протеолитической активности микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов
- •Определение редуцирующей способности
- •Определение фермента каталазы
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Лабораторные животные
- •Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных
- •Правила пополнения вивария новыми животными
- •Правила содержания экспериментальных животных в виварии
- •Уборка и дезинфекция вивария
- •Личная гигиена работников питомника (вивария)
- •Правила кормления лабораторных животных
- •Заболевания лабораторных животных
- •Подготовка животных к заражению
- •Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных
- •Способы заражения
- •Наркоз лабораторных животных
- •Внутрикожный метод
- •Подкожный способ заражения
- •Внутримышечный способ заражения
- •Внутрибрюшинный способ заражения
- •Внутривенное заражение кроликов
- •Внутривенное заражение крыс и мышей
- •Заражение через пищеварительный тракт
- •Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
- •Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
- •Внутримозговой метод (интрацеребральный)
- •Внутриплевральный метод
- •Содержание животных под опытом
- •Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка
- •Умерщвление и вскрытие лабораторных животных
- •Вскрытие животных
- •Определение вирулентности микробов
- •Определение токсигенности микробов
- •Литература
- •Оглавление
- •Методы общей бактериологии
Модификация Шеффер и Фултона.
На фиксированный в пламени мазок наливают насыщенный (5%) водный раствор малахитовой зелени на 30—60 секунд с подогреванием до появления паров (3—4 раза).
Краску смывают текущей водой 30—40 секунд.
Наливают 0,5% водный раствор сафранина приблизительно на 30 секунд.
Промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу.
Микроскопическая картина: споры — зеленые, вегетативные формы —красные.
Способ Пешкова
Наиболее простой и демонстративный; он не требует химических протрав и дифференцировки.
Приготовленный мазок:
фиксируют на пламени горелки или смесью спирта и формалина,
окрашивают кипящей леффлеровской метиленовой синькой (над пламенем горелки) в течение 15—20 секунд,
смывают водой,
докрашивают 0,5% водным раствором нейтральрота в течение 30 секунд,
промывают водой и высушивают.
Микроскопическая картина: споры — голубого или синего цвета, молодые споры — черно-синие, цитоплазма вегетативных форм — розовая, хроматиновые элементы протоплазмы окрашиваются в фиолетовый цвет.
Способ Мюллера
Приготовленный на предметном стекле мазок из исследуемой культуры фиксируют на пламени.
На мазок наливают 5% водный раствор хромовой кислоты на 1—3 минуты.
Промывают препарат водой и слегка просушивают.
Через полоску чистой фильтровальной бумаги красят карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течение 3—4 минут.
Обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течение 5 секунд.
Промывают водой.
Окрашивают дополнительно леффлеровской синькой 1—2 минуты.
Промывают водой и высушивают через фильтровальную бумагу.
Микроскопическая картина: споры — красные, вегетативные формы — синие.
Способ Ауески
На приготовленный, высушенный на воздухе (нефиксированный) мазок наливают 1—2% водный раствор соляной кислоты и подогревают на пламени до появления паров (3—4 раза). Затем препарат промывают водой, высушивают через фильтровальную бумагу, фиксируют на пламени и окрашивают карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течение 3—5 минут. Потом препарат обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд (до бледно-розовой окраски), промывают водой и дополнительно окрашивают леффлеровской метиленовой синькой или 1% водным раствором малахитовой зелени в течение 2 минут. Краску смывают водой, мазок высушивают.
Микроскопическая картина; споры — красные, вегетативные формы — синие (или зеленые).
Способ Клейна
готовят в пробирке густую эмульсию путем смыва исследуемой культуры физиологическим раствором,
к эмульсии прибавляют равное количество карболового раствора фуксина,
пробирку со смесью нагревают на пламени (до появления паров) в течение 5 минут,
из прогретой смеси приготовляют мазок, высушивают его и фиксируют,
обесцвечивают 1% водным раствором серной кислоты в течение 5—10 секунд,
промывают водой,
слегка подсушивают,
окрашивают леффлеровской синькой в течение 1—3 минут,
смывают водой и мазок обсушивают.
Микроскопическая картина: споры — красные, вегетативные формы — синие. Недостаток способа — значительный расход краски (фуксина).