- •Методы общей бактериологии
- •Введение
- •Бактериологическая лаборатория
- •Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места
- •Правила работы и поведения в лаборатории
- •Уборка лабораторного помещения
- •Мытье и обработка лабораторной посуды
- •Дезинфекция
- •Стерилизация
- •Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
- •Виды стерилизации
- •Микроскопические методы исследования
- •Приготовление препаратов для микроскопииживых микроорганизмов
- •Приготовление мазков
- •Окраска мазков
- •Простые методы окраски мазков
- •Окраска по Муромцеву
- •Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков
- •Окраска по Граму
- •Видоизменения метода окраски по Граму
- •Окраска по Граму в модификации Хукера.
- •Выполнение метода:
- •Окраска по Граму в модификации Берка.
- •Выполнение метода:
- •Модификация по Синеву.
- •Модификация по Эткинсу.
- •Техника окраски:
- •Окраска кислотоустойчивых микробов
- •Окраска по методу Циль-Нильсена
- •Окраска в модификации Синева.
- •Метод Труантадля окрашивания на кислотоустойчивость.
- •Выполнение методики:
- •Метод Гонзеля
- •Метод Бунге и Траутенрота
- •Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)
- •Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)
- •Модификация окраски Грам—Муха
- •Способ Нейссера
- •Метод Пью (окраска метахроматических зерен)
- •Модификация Саватеева.
- •Окраска по Романовскому-Гимза
- •Окраска капсул
- •Метод окраски капсул по Дюгиду
- •Метод окраски капсул по Гиссу
- •Метод окраски капсул по Антони
- •Способ Михина
- •Способ Гисса
- •Способ Ольта
- •Модификация способа Ольта.
- •Способ Ребигера
- •Способ Гусельниковой
- •Способ Кауфмана
- •Способ Ионе
- •Окраска спор
- •Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру
- •Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону
- •Метод Виртца в модификации Саватеева
- •Модификация Шеффер и Фултона.
- •Способ Пешкова
- •Способ Мюллера
- •Способ Ауески
- •Способ Клейна
- •Окраска жгутиков
- •Метод окраски жгутиков по Грэю
- •Методика:
- •Метод окраски жгутиков по Ляйфсону
- •Методика:
- •Окраска жгутиков серебрением
- •Техника окраски.
- •Способ Уварова
- •Способ Леффлера
- •Способ Инуйе
- •Способ Бениньетти и Джино
- •Цитоплазматические включения
- •Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты
- •Окрашивание полифосфата
- •Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа
- •Метод окраски полисахаридов альциановым синим
- •Питательные среды
- •Техника посева микроорганизмов
- •Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды
- •Получение чистых культур
- •Посев штрихом
- •Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
- •Выделение чистой культуры по способу Дригальского
- •Анаэростат для культивирования анаэробов
- •Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов
- •Рост микробов на плотной питательной среде
- •Особенности микробного роста на жидких питательных средах
- •Рост на полужидкой питательной среде
- •Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов
- •Сахаролитические свойства микроорганизмов
- •Протеолитические свойства микроорганизмов
- •Определение протеолитической активности микробов
- •Определение индола в культуре микроорганизмов
- •Определение сероводорода
- •Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов
- •Определение редуцирующей способности
- •Определение фермента каталазы
- •Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •Лабораторные животные
- •Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных
- •Правила пополнения вивария новыми животными
- •Правила содержания экспериментальных животных в виварии
- •Уборка и дезинфекция вивария
- •Личная гигиена работников питомника (вивария)
- •Правила кормления лабораторных животных
- •Заболевания лабораторных животных
- •Подготовка животных к заражению
- •Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных
- •Способы заражения
- •Наркоз лабораторных животных
- •Внутрикожный метод
- •Подкожный способ заражения
- •Внутримышечный способ заражения
- •Внутрибрюшинный способ заражения
- •Внутривенное заражение кроликов
- •Внутривенное заражение крыс и мышей
- •Заражение через пищеварительный тракт
- •Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение)
- •Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)
- •Внутримозговой метод (интрацеребральный)
- •Внутриплевральный метод
- •Содержание животных под опытом
- •Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка
- •Умерщвление и вскрытие лабораторных животных
- •Вскрытие животных
- •Определение вирулентности микробов
- •Определение токсигенности микробов
- •Литература
- •Оглавление
- •Методы общей бактериологии
Определение токсигенности микробов
В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а также некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьев -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.
Экзотоксины, вырабатываемые различными представителями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с поражением отдельных органов и тканей и способностью при парентеральном введении в организм вызывать образование антител—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствующие им экзотоксины.
Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдерживают в термостате в течение 2—3 недель для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.
Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная доза (Dlm) и средняя смертельная доза (LD50).
Для определения Dlm и LD50 фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каждую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 животных. Для постановки проб подбирают животных, наиболее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах.
При учете полученных результатов в протоколе опыта отмечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введения токсина.
Литература
Аристовский В.М. др. Учебник медицинской микробиологии. — М: Медгиз, 1949.
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О, — М: «Медицина», 1982.
Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. —М.: «Медицина», 1978.
Методы общей бактериологии в 3-х т. — М:, «Мир», 1983.
Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. — М:, ГИСХИ. 1952.
Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. — М.: «Колос», 1995.
Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. — М.: Медгиз, 1958.
Оглавление
Введение 3
Бактериологическая лаборатория 3
Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места 4
Правила работы и поведения в лаборатории 7
Уборка лабораторного помещения 8
Мытье и обработка лабораторной посуды 9
Дезинфекция 13
Стерилизация 14
Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования 14
Виды стерилизации 16
Микроскопические методы исследования 21
Приготовление препаратов для микроскопии живых микроорганизмов 21
Приготовление мазков 26
Окраска мазков 28
Простые методы окраски мазков 31
Окраска по Муромцеву 31
Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков 32
Окраска по Граму 32
Видоизменения метода окраски по Граму 34
Окраска по Граму в модификации Хукера. 35
Окраска по Граму в модификации Берка. 36
Модификация по Синеву. 38
Модификация по Эткинсу. 39
Окраска кислотоустойчивых микробов 40
Окраска по методу Циль-Нильсена 40
Метод Труанта для окрашивания на кислотоустойчивость. 41
Метод Гонзеля 42
Метод Бунге и Траутенрота 43
Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость) 43
Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость) 43
Способ Нейссера 44
Метод Пью (окраска метахроматических зерен) 44
Окраска по Романовскому-Гимза 45
Окраска капсул 46
Метод окраски капсул по Дюгиду 46
Метод окраски капсул по Гиссу 46
Метод окраски капсул по Антони 47
Способ Михина 47
Способ Гисса 47
Способ Ольта 48
Способ Ребигера 48
Способ Гусельниковой 48
Способ Кауфмана 49
Способ Ионе 49
Окраска спор 49
Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру 50
Метод окраски эндоспор по Шефферу–Фултону 51
Метод Виртца в модификации Саватеева 51
Способ Пешкова 52
Способ Мюллера 52
Способ Ауески 53
Способ Клейна 53
Окраска жгутиков 54
Метод окраски жгутиков по Грэю 55
Метод окраски жгутиков по Ляйфсону 56
Окраска жгутиков серебрением 57
Способ Уварова 59
Способ Леффлера 59
Способ Инуйе 60
Способ Бениньетти и Джино 60
Цитоплазматические включения 60
Окрашивание поли-β-оксимасляной кислоты 61
Окрашивание полифосфата 61
Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа 61
Метод окраски полисахаридов альциановым синим 62
Питательные среды 63
Техника посева микроорганизмов 70
Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды 72
Получение чистых культур 74
Посев штрихом 75
Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) 76
Выделение чистой культуры по способу Дригальского 77
Анаэростат для культивирования анаэробов 77
Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов 77
Рост микробов на плотной питательной среде 77
Особенности микробного роста на жидких питательных средах 80
Рост на полужидкой питательной среде 81
Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов 81
Сахаролитические свойства микроорганизмов 82
Протеолитические свойства микроорганизмов 83
Определение индола в культуре микроорганизмов 85
Определение сероводорода 85
Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов 85
Определение редуцирующей способности 86
Определение фермента каталазы 86
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам 87
Лабораторные животные 89
Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных 90
Правила пополнения вивария новыми животными 91
Правила содержания экспериментальных животных в виварии 93
Уборка и дезинфекция вивария 97
Личная гигиена работников питомника (вивария) 98
Правила кормления лабораторных животных 98
Заболевания лабораторных животных 100
Подготовка животных к заражению 102
Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных 106
Способы заражения 110
Наркоз лабораторных животных 110
Внутрикожный метод 111
Подкожный способ заражения 111
Внутримышечный способ заражения 112
Внутрибрюшинный способ заражения 112
Внутривенное заражение кроликов 112
Внутривенное заражение крыс и мышей 113
Заражение через пищеварительный тракт 113
Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение) 115
Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод) 115
Внутримозговой метод (интрацеребральный) 115
Внутриплевральный метод 116
Содержание животных под опытом 116
Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка 116
Умерщвление и вскрытие лабораторных животных 120
Вскрытие животных 121
Определение вирулентности микробов 124
Определение токсигенности микробов 125
Литература 126
Дмитрий Аркадьевич Васильев Сергей Николаевич Золотухин
Анатолий Анисимович Щербаков
Лидия Владимировна Карпунина