3. Диагностикумы, получение, применение.

При серологической диагностике инфекционных заболеваний необходимы препараты, содержащие антигены. Такие препараты называются диагностикумы. Для приготовления диагностикумов подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные свойства. Для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используют химические вещества, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микроорганизмы хуже сохраняют антигенные свойства и используются редко.

Бактериальные диагностикумы содержат инактивированную микробную взвесь или отдельные антигенные компоненты бактерий. Примером таких диагностикумов являются:

а) бактериальные диагностикумы сальмонелл брюшного тифа, паратифа А и В, шигелл Флекснера, Зонне, единый бруцеллезный диагностикум и др.; они содержат взвесь бактерий, инактивированных формалином, и применяются в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных;

б) сальмонеллезные О-диагностикумы - содержат О-антигены различных групп сальмонелл, применяются для выявления антител к О-антигену при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой больных;

в) сальмонеллезный Н-диагностикум и Vi-диагностикум брюшного тифа.

Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на их поверхности антигенами, извлеченными из бактерий. Эритроцитарные диагностикумы используются в РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) для обнаружения антител. В том случае, когда РНГА используется для выявления антигена в патологическом материале, применяют антительные диагностикумы, т.е. эритроциты с адсорбированными на них антителами. Существуют дизентерийный, сальмонеллезный, псевдотуберкулезный и др. эритроцитарные диагностикумы.

Вирусные диагностикумы содержат инактивированные вируссодержащие жидкости или живые вирусные частицы, используются при серологической диагностике вирусных инфекций в реакциях связывания комплемента, торможения гемагглютинации, нейтрализации для обнаружения антител и определения их титра.

3. Диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие), получение, применение. Моноклональные антитела.

Агглютинирующие сыворотки получают путем иммунизации кроликов взвесью убитых микроорганизмов или их антигенов с последующим взятием у них крови и приготовлением сыворотки. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены. Поэтому, в настоящее время большинство сывороток используется адсорбированными.

Адсорбированные сыворотки содержат только типовые или видовые антитела, соответствующие определенному типу или виду антигена. Для получения таких сывороток применяют метод Кастеллани - метод адсорбции. Этот метод заключается в истощении сыворотки на групповые агглютинины путем насыщения ее родственными гетерогенными бактериями. При этом происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке. Таким путем можно получить монорецепторные сыворотки - сыворотки, содержащие антитела только к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции агглютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими общий антиген. Титром агглютинирующей сыворотки называется то ее наибольшее разведение, при котором идет реакция агглютинации. Агглютинирующие сыворотки широко применяют, например, при диагностике заболеваний, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и другими представителями семейства энтеробактерий.

Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов антигенами бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция преципитации. Преципитирующие сыворотки выпускаются с высоким титром - не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет мелкодисперсную структуру и в единице объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки - антител. Специфические преципитирующие сыворотки применяются при диагностике инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляремия, дифтерия, и др.), в судебно-медицинской экспертизе для определения видовой принадлежности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствия белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию). Реакция преципитации может быть поставлена в виде кольцепреципитации или реакции преципитации в геле.

Гемолитические сыворотки получают путем иммунизации кроликов взвесью эритроцитов барана. Титром сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое в присутствии комплемента вызывает гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана. Гемолитические сыворотки используют для титрования комплемента и при постановке реакции связывания комплемента в индикаторной системе.

Противовирусные сыворотки получают путем иммунизации различных животных в зависимости от вида вируса. Например, сыворотку против аденовирусов получают иммунизацией кроликов, сыворотку против вируса гриппа - иммунизацией белых хорьков и т.д. Диагностические противовирусные сыворотки используются для определения вида или типа вируса в РТГА, РСК., РН.

Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сыворотки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресцирующими красителями. При приготовлении люминесцирующих сывороток проводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сыворотки различных флюорохромов путем прочной химической связи. Люминесцирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуноглобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, какая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыворотки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реакции Кумбса.