- •Принципы классификации вирусов.
- •Морфология вирусов.
- •Физиология вирусов (взаимодействие вируса с клеткой).
- •Принципы и методы диагностики вирусных заболеваний.
- •Природа бактериофагов, их структура, химический состав, резистентность.
- •Взаимодействие бактериофага с бактериальной клеткой, специфичность.
- •Применение бактериофагов в медицине и микробиологии.
- •Практика Методы культивирования вирусов. Характеристика, достоинства и недостатки биологических моделей.
- •Методы индикации вирусов в биологических моделях.
- •Особенности сбора и доставки биоматериалов в вирусологическую лабораторию.
- •Вирусологический метод диагностики, этапы.
- •Выделение и титрование бактериофагов.
- •Фаготипирование, цель, методика.
Принципы и методы диагностики вирусных заболеваний.
Принципы лабораторной диагностики
• Прямое обнаружение вирусов:
1) методы, основанные на определении самого вируса,
2) определение антигенов вируса,
3) определение нуклеиновых кислот.
• Методы, основанные на определении антител к компонентам вирусов.
Методы лабораторной диагностики вирусных инфекций
• Вирусоскопический метод
• Вирусологический метод: выделение и идентификация чистых культур вируса
• Обнаружение вирусных антигенов в материале от больного (экспресс-метод)
• Молекулярно-генетический метод: определение нуклеиновых кислот вирусов
• Серологический метод: определение нарастания титра антител в парных сыворотках больного.
Вирусологический метод
• 1 этап: заражение биологической модели,
• 2 этап: индикация – обнаружение наличия вируса в биологической модели,
• 3 этап: идентификация – реакции иммунитета (РНГА, РН, РП, РСК, РРГ, РТГА, РИФ, РИА, ИФА), а также ПЦР
Природа бактериофагов, их структура, химический состав, резистентность.
Бактериофаги - вирусы, специфически проникающие в бактерии, использующие их биосинтетические системы для своей репродукции и вызывающие их лизис (растворение, разрушение клеток). Они обнаружены в воде, почве, пищевых продуктах, различных выделениях из организма людей и животных (фекалии, моча, мокрота, гной и т.д.). Особенно большое количество бактериофагов выделяется в период выздоровления больного человека. В настоящее время эти вирусы выявлены у большинства бактерий, а также у некоторых других микроорганизмов, в частности у грибов. Поэтому бактериофаги в широком смысле слова часто называют просто фагами.
Бактериофаги принято обозначать буквами латинского, греческого или русского алфавита, часто с цифровым индексом, перед которым стоит название вида бактерий (например, фаги Е. coli T2). Для обозначения группы родственных фагов используют родовые и видовые названия микробов, из которых выделены соответствующие фаги: колифаги, стафилофаги, актинофаги, микофаги и т.д.
Морфологию бактериофагов изучают с помощью электронной микроскопии. Фаги, как и просто организованные вирусы человека, состоят из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белковой оболочки - капсида. Однако между собой они в значительной степени различаются по морфологии. В зависимости от формы, структурной организации и типа нуклеиновой кислоты фаги подразделяют на несколько морфологических типов.
К I типу относятся нитевидные ДНК-содержащие фаги, взаимодействующие с мужскими особями бактерий. Геном фагов представлен однонитевой ДНК, заключенной в спиральный капсид.
II тип включает мелкие РНК-содержащие и однонитевые ДНК-содержащие фаги, геном которых находится внутри икосаэдрического капсида (головки) с аналогом отростка.
К III типу относятся икосаэдрические фаги с коротким отростком, содержащие двунитевую ДНК.
IV и V типы - сложные по морфологии ДНК-содержащие фаги, имеющие форму сперматозоида: икосаэдрический капсид головки соединен с длинным хвостовым отростком.
V тип фагов отличается от VI типа тем, что чехол их отростков способен к сокращению.
Размеры фагов колеблются от 20 до 800 нм (нитевидный тип). Наиболее изучены крупные бактериофаги, имеющие форму сперматозоида и сокращающийся чехол отростка, например колифаги T2, Т4, Т6. У этих фагов молекула двунитевой суперспирализованной ДНК находится внутри головки размером 65-100 нм и защищена капсидом. Капсид состоит из белковых молекул - идентичных полипептидных субъединиц, уложенных по икосаэдрическому (кубическому) типу симметрии. В состав головки также входит полипептид, состоящий из аспарагиновой, глутаминовой кислот и лизина. У некоторых фагов внутри головки находится внутренний гистоноподобный белок, обеспечивающий суперспирализацию ДНК. Хвостовой отросток длиной более 100 нм имеет внутри полый цилиндрический стержень, сообщающийся с головкой, а снаружи - чехол (футляр), способный к сокращению наподобие мышцы. Чехол хвостового отростка образован белковыми субъединицами, уложенными по спиральному типу симметрии, содержит АТФ и ионы Ca. На дистальном конце отростка имеется шестиугольная базальная пластинка с шипами, от которых отходят нитевидные структуры - фибриллы. У некоторых фагов (например, T2) в дистальной части отростка содержится фермент лизоцим.
Антигенные свойства. Бактериофаги содержат группоспецифические и типоспецифические антигены, обладают иммуногенными свойствами, вызывая синтез специфических антител в организме. Антитела, взаимодействуя с бактериофагами, могут нейтрализовать их литическую активность в отношении бактерий. По типоспецифическим антигенам фаги делят на серотипы.
Резистентность. По сравнению с вирусами человека бактериофаги более устойчивы к факторам окружающей среды. Они инактивируются под действием температуры 65-70 °С, УФ-облучения в высоких дозах, ионизирующей радиации, формалина и кислот. Длительно сохраняются при низкой температуре и высушивании. Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой.