12. Бактериологические методы.

Микробиологические исследования особенно важны для:

• выявления наиболее опасных в эпидемическом плане больных туберкулезом;

• верификации диагноза туберкулеза;

• определения чувствительности МБТ к лекарственным препаратам;

• оценки эффективности лечения и прогноза;

• контроля распространения туберкулеза.

Объектами являются жидкости и ткани, получаемые при обследовании пациентов. Наиболее часто исследуют мокроту. Собирают утреннюю порцию мокроты. Предварительно пациент должен почистить зубы и прополоскать рот. В герметичный флакон необходимо собрать 3-5 мл мокроты, допустимо меньшее количество. При отсутствии мокроты возможно применение аэрозольных раздражающих ингаляций с 5-15% раствором натрия хлорида в 1% растворе натрия бикарбоната. Они оказывают раздражающее действие на слизистую оболочку дыхательных путей, что позволяет получить диагностический материал. Также могут быть промывные воды бронхов или желудка. При отрицательном результате мокроту исследуют в течение 3 дней подряд. Другими материалами являются отделяемое дыхательных путей после аэрозольных ингаляций, бронхоальвеолярные смывы, плевральная жидкость, промывные воды желудка (преимущественно у детей, которые мокроту не откашливают, а заглатывают). Во время и после хирургических операций забирают для исследования материал из удаленных участков легких, плевры, лимфатических узлов. У больных внелегочным туберкулезом или с подозрением на таковой исследуют цереброспинальную, перикардиальную, синовиальную, асцитическую жидкость, менструальную кровь, гной, пунктаты костного мозга, грануляции, соскобы синовиальных оболочек, лимфатические узлы и их пунктаты. Классическими методами являются микроскопия и посев с определением биологического вида микроорганизма. Культуральное исследование позволяет обнаружить МБТ, если в 1 мл жидкого диагностического материала содержится от 20 до 100 микробных клеток. Стандартной питательной средой для выращивания МБТ является твердая яичная среда Левенштейна-Йенсена, рост первых колоний отмечают через 4-8 нед. Использование высокоселективных сред позволяет вырастить культуру в более короткие сроки, но идентификация требует дополнительного времени. Получение чистой культуры микобактерий позволяет посредством биохимических методов отличить Mycobacterium tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий, определить их жизнеспособность, вирулентность и чувствительность к лекарственным препаратам. Можно также количественно оценить бактериовыделение: скудное - рост до 10 колоний, умеренное - от 10 до 50 и обильное - более 50 колоний. Лабораторное определение спектра и степени устойчивости микобактерий к противотуберкулезным препаратам имеет большое значение для выбора химиотерапии, контроля эффективности лечения и проведения эпидемиологического мониторинга. Недостатком культурального исследования является его длительность - около 3 мес. Ускорить получение результата позволяют аппараты для радиометрического определения роста микобактерий. В аппаратах такого типа жидкая питательная среда содержит меченную 14С пальмитиновую кислоту. Специальный сенсор улавливает признак роста микобактерий по выделению 14СО2 уже через 10-12 дней или раньше. Другой принцип основан на поглощении кислорода в процессе роста микробной популяции. Уменьшение концентрации кислорода активирует флюоресцентный индикатор, который начинает светиться в ультрафиолетовых лучах. С помощью таких аппаратов возможна как идентификация микобактерий, так и определение их чувствительности к лекарственным препаратам. Быстрым способом определения устойчивости к лекарственным препаратам является использование биологических микрочипов для оценки генетического полиморфизма ДНК. Высокая чувствительность микрочипов позволяет одновременно идентифицировать возбудитель и определять его устойчивость к лекарственным препаратам. Бактериологическое исследование при недостаточной информативности может быть дополнено биологическим методом. Он состоит в заражении морской свинки полученным от больного материалом, в котором предположительно содержатся МБТ. Однако биологический метод сложен в организационном плане и требует достаточно высоких затрат.