- •Легенды и мифы о фиксации и проводке ткани
- •Миф гистологической технологии: «стандартный метод»
- •Фиксация: Миф 1 Универсальный фиксатор
- •Химик, физик и патолог
- •История формальдегида как фиксатора в микротехнике
- •Формалин как фиксатор сегодня
- •Предварительно забуференный концентрат
- •Фиксация: Миф 2 Быстро фиксирующие жидкости
- •Фиксация: Миф 3 Время фиксации формалином - часы
- •Этапы фиксации формалином
- •Пропитывние фиксатором или проникновение фиксатора в ткань
- •Показатели проникновения и уровни связывания формальдегида
- •Фиксация: Миф 4 При нагревании формалин быстро фиксирует
- •Фиксация: Миф 5 Ускорение фиксации вакуумом
- •Диапазон фиксации и температура
- •Равновесное
- •Фиксация: Миф 6 Можно фиксировать в малом объеме формалина
- •Фиксация: Миф 7 Достаточно одной смены формалина
- •Этапы воздействия формалина на ткани
- •Что происходит при фиксации?
- •Преимущества формалина
- •Недостатки формалина
- •Недостатки любого заменителя формалина
- •Рекомендации комитета по ИГХ- тестированию рецепторов эстрогена
- •Проводка ткани: Миф 1 Достаточно 2-3 смены дегидратанта
- •Сколько смен дегидратанта необходимо?
- •Проводка ткани: Миф 2 Не важен тип дегидратанта
- •Выбор дегидратанта
- •Проводка ткани: Миф 3 Нагрев дегидратанта сокращает время проводки
- •Проводка ткани: Миф 4 Не важен тип просветлителя
- •Типы просветлителей
- •Просветлители: терпены (на базе d-лимонена) и растительные масла
- •Просветлители - алканы
- •Опасность ксилола
- •Механизмы циркуляции ксилола в организме человека
- •Репродуктивная токсичность ксилола (1)
- •Репродуктивная токсичность ксилола (2)
- •Признаки действия ксилола на организм человека (The Innovator, Vol. 4, №1, 2001)
- •Проводка ткани: Миф 5 Переход дегидратант - просветлитель не важен
- •Сравнение методов: ИПА-парафин и этанол-ксилол
- •Минеральное масло
- •Промежуточные смеси (изопропанол-минеральное масло)
- •Батареи для проводки с изопропанолом и минеральным маслом
- •Основные этапы проводки ткани (традиционная схема)
- •Схема проводки тканей (ручная) в реагентах Блик
- •Проводка ткани: Миф 6 При смене реагентов результаты проводки хуже
- •Полный цикл смены реагентов этанол - ксилол
- •Полный цикл смены реагентов изопропанол – минеральное масло
- •Принципы смены реагентов
- •Как рассчитать объем реагентов для закупки?
- •Сходство и отличие методов проводки
- •Расход реагентов на 1000 блоков этанол-ксилол
- •Расход реагентов на 1000 блоков в методе изопропанол-минеральное масло
- •Проводка ткани: Миф 7 Не важен тип парафина для проводки
- •Тепловой эффект микротомии
- •Сдавливание срезов при резке 1
- •Сдавливание срезов при резке 2
- •Диаграмма напряжений при резке
- •Обратимые и необратимые этапы приготовления гистопрепаратов
- •Возможна ли стандартизация гистологических методов?
- •Благодарю за внимание!
Минеральное масло
•Не содержит ароматических углеводородов. Это смесь предельных длинноцепочечных углеводородов. Совершенно безопасно для персонала. Входит в состав многих косметических средств.
•Не все виды масла смешиваются с дегидратантом. Смешивание происходит в определенных соотношениях и при разных температурах. Готовые смеси должны быть абсолютно прозрачны и не расслаиваться.
•Полное отсутствие запаха.
•Высокий коэффициент преломления позволяет визуально контролировать окончание процесса пропитывания маслом (ткани становятся прозрачными, как в ксилоле)
•Не делает ткани жесткими. Ткани можно задерживать в масле на неопределенно долгий срок без любого вреда для последующих тестов, включая ГХ, ИГХ, ISH.
•Масло не растворяет жиры подобно ксилолу, а замещает их.
Промежуточные смеси (изопропанол-минеральное масло)
•Прозрачность. Могут становиться прозрачными при подогреве до 50оС или при комнатной температуре.
•Возможность оставить ткани в любой смеси на неопределенно долгий срок без любого ущерба для морфологии и молекулярной структуры тканей.
•Безопасность для персонала и окружающей среды
•В этих смесях одновременно завершается удаление несвязанной тканями воды, липидов и начинается пропитывание маслом (или парафином, жидким при комнатной температуре). Если все происходит при комнатной температуре
– нет риска изменения конформации некоторых антигенных участков и это позволяет успешно провести ИГХ-исследования.
•Смеси очень важны, они позволяют мягко перейти от полярного изопропанола к неполярному маслу и парафину.
Батареи для проводки с изопропанолом и минеральным маслом
Основные этапы проводки ткани (традиционная схема)
Фиксация
10% формалин, менее 24 часов
|
|
Этанол сильно |
|
Дегидратация |
уплотняет ткани |
|
5 смен этанола 95% по 1 часу |
|
|
|
Ксилол делает ткани |
|
|
|
|
Просветление |
|
|
хрупкими |
|
|
|
|
|
3 смены ксилола по 1 часу |
|
|
|
Недостаточное |
|
|
|
|
|
пропитывание не |
|
Пропитывание |
|
|
Парафин 60оС, 2 смены по 1 часу |
дает тонких срезов |
|
|
|
|
|
Общее время без фиксации: 10 часов |
|
|
Схема проводки тканей (ручная) в реагентах Блик
Реагент |
Для хирургических |
Для эндобиоптатов |
|
образцов |
|||
|
|
||
|
|
|
|
Дегидратант |
5 смен по 1 часу |
2 смены по 15 минут |
|
Блик |
|||
|
|
||
|
|
|
|
Промежуточная |
1,5 часа |
30 минут |
|
смесь I Блик |
|||
|
|
||
|
|
|
|
Промежуточная |
1.5 часа |
30 минут |
|
смесь II Блик |
|||
|
|
||
|
|
|
|
Минеральное |
1.5 часа |
30 минут |
|
масло Блик |
|||
|
|
||
|
|
|
|
Парафин Блик |
4 смены по 1 часу |
2 смены по 15 минут |
|
(при 60оС) |
|||
|
|
||
Общее время |
13,5 часов |
2 часа 30 минут |
|
|
|
|
Проводка ткани: Миф 6 При смене реагентов результаты проводки хуже
Однажды и дважды использованные реагенты лучше свежих.
Абсолютное заблуждение. Похоже на предыдущий миф, когда каждый последующий реагент содержит примесь предшествующего.
Вместе с примесью чистого вещества в них еще заносится грязь, жиры, а они никак не улучшают проводку.
При соблюдении всех рекомендаций по фиксации и вырезке с любого момента замены реагентов всегда получаются хорошие препараты.
Полный цикл смены реагентов этанол - ксилол
Ф |
Э |
Э |
Э |
Э |
Э |
К |
К |
К |
К:П |
П |
П |
П |
П |
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
К:П |
|
← |
← |
П |
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
К:П |
|
← |
← |
П |
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
|
|
|
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
Э |
|
← |
К |
К:П |
|
← |
← |
П |
13 |
|
← |
← |
← |
13 |
|
|
7 |
2:2 |
|
|
|
4 |
Полный цикл смены реагентов изопропанол – минеральное масло
Ф |
И |
И |
И |
И |
И |
I |
II |
M |
П П П П |
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
I |
II |
M |
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
← ← ← |
И |
I |
II |
M ← ← П |
||||
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
I |
II |
M |
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
← ← ← |
И |
I |
II |
M ← ← П |
||||
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
I |
II |
M |
|
Ф |
|
← |
← |
← |
И |
|
|
|
|
Ф |
← ← ← |
И |
I |
II |
M ← ← П |
||||
13 |
|
← |
← |
← |
13 |
7 |
7 |
7 |
4 |
Принципы смены реагентов |
|||
10% формалин |
|
Дегидратант |
|
Свежий для каждой |
|
Последняя смена |
|
|
свежая каждую |
||
партии |
|
||
партию. Остальные |
|||
|
|||
|
«передвинуть влево» |
||
Парафин |
|
Смеси и масло |
|
Последняя смена свежая |
Свежие |
через каждые 2 |
|
1 раз в неделю. |
|||
Остальные «передвинуть |
|
партии |
|
влево» |
|
|
Как рассчитать объем реагентов для закупки?
|
Карусельный |
Вакуумный |
|
Тип процессора |
процессор |
процессор |
Ручной метод |
|
(STP120) |
(Excelsior) |
|
Объем емкости с |
1.8 л |
5 л |
1л |
|
реагентами |
0,9л реагента |
|||
|
|
Кол-во кассет в |
120 |
300 |
40 |
|
одной емкости |
||||
|
|
|
Объем реагента/ |
15 |
16,7 |
22,5 |
кассета |
мл/кассета |
мл/кассета |
мл/кассета |