- •Список сокращений
- •Оглавление
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 29
- •Глава 3. Получение криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Оценка эффективности ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток эмбриональной печени в коррекции острого токсического повреждения печени 54
- •Глава 5. Структурная оценка влияния ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени 69
- •Введение
- •Применение клеток печени для коррекции острой печеночной недостаточности (обзор литературы)
- •1.1 Способы клеточной метаболической поддержки в коррекции печеночной недостаточности
- •1.2. Способы коррекции острой печеночной недостаточности в эксперименте
- •1.2.1. Моделирование острой печеночной недостаточности
- •1.2.2. Механизмы острого токсического повреждения печени при введении сСl4
- •1.2.3.Критерии эффективности метаболической клеточной коррекции опн
- •1.3. Трансплантация гепатоцитов в коррекции острой печеночной недостаточности
- •1.3.1. Способы приготовления гепатоцитов для трансплантации
- •1.3.2. Криоконсервация
- •1.3.3.Приготовление препарата для ксенотрансплантации
- •1.3.4. Способы ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2.2.1. Культура клеток печени
- •2.2.2.2. Приготовление ткани плаценты для ксенотрансплантации
- •2.2.2.3.Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение массы печени
- •2.2.3.2.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3.Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.4.Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированной культуры эмбриональных клеток свиной печени для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология получения культуры клеток печени
- •3.1.1 Дезагрегация печеночной ткани
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Очистка и культивирование эмбриональных клеток свиной печени
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.2.2. Сравнительная оценка эффективности криоконсервации культуры эмбриональных клеток свиной печени
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Оценка эффективности ксенотрансплантации криоконсервированной культуры клеток эмбриональной печени в коррекции острого токсического повреждения печени
- •4.1.Течение острого токсического повреждения печени на фоне метаболической коррекции
- •4.1.1. Ход эксперимента
- •4.1.2. Летальность в экспериментальных группах
- •4.2. Динамика биохимических показателей при остром токсическом повреждении печени под влиянием ксенотрансплантации криоконсер-вированной культуры эмбриональных клеток печени
- •4.2.1. Уровень альбумина в сыворотке крови
- •4.2.2. Уровень холестерина
- •4.2.3. Уровень билирубина
- •4.2.4. Активность индикаторных ферментов
- •4.3. Динамические изменения некоторых показателей системы гемостаза
- •4.3.1. Уровень фибриногена в плазме крови
- •4.3.2. Вязкость крови
- •4.3.3. Гематокрит
- •4.3.4. Агрегация тромбоцитов
- •Глава 5. Структурная оценка влияния ксенотрансплантации культуры эмбриональных клеток печени
- •5.1. Морфологическое исследование зоны трансплантации
- •5.2. Макроскопическая характеристика печени животных
- •5.3. Характеристика строения печени при световой микроскопии
- •5.4. Ультраструктура гепатоцитов при остром токсическом повреждении печени, корригированном ксенотрансплантацией культуры эмбриональных клеток печени
- •5.5. Содержание днк в ядрах гепатоцитов
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
4.2. Динамика биохимических показателей при остром токсическом повреждении печени под влиянием ксенотрансплантации криоконсер-вированной культуры эмбриональных клеток печени
Для сравнительной оценки белкового и липидного обменов в поврежденной печени на фоне коррекции нами исследованы уровни альбумина и холестерина в сыворотке крови. Данные представлены в табл. 4.2. Закономерности изменения пигментного обмена при корригированной ОПН исследованы на основе определения концентрации общего и прямого билирубина в сыворотке крови (табл. 4.3.). Характеристика цитолитических процессов на фоне ОТП проведена путем
мониторинга уровней аланин- и аспартатаминотрансферазы (табл. 4.4) во второй серии экспериментов.
4.2.1. Уровень альбумина в сыворотке крови
Ко вторым суткам эксперимента содержание альбумина в сыворотке крови животных всех групп не имело существенных различий с нормой, но в группе 1 был достоверно выше (р=0,054), чем в группе 3. На 4-е сутки результаты свидетельствовали о разнонаправленных процессах: у крыс основной группы уровень альбумина существенно повышался по сравнению с нормой (р=0,003), предыдущим сроком исследования (2-е сутки; р=0,008) и результатами обеих контрольных групп (р=0,001), в которых, напротив, анализированный показатель существенно снижался по сравнению с нормой (р=0,010 и 0,015 соответственно). На 6-е сутки эксперимента уровень альбумина у животных основной группы несущественно снижался по сравнению с предыдущим сроком исследования, оставаясь достоверно выше нормы (р=0,007). Таким образом, выбранный показатель обмена белка свидетельствовал об усилении белковосинтетической функции печени животных основной группы (4 и 6 сутки эксперимента) на фоне угнетения этих процессов в контроле. Мы не имеем возможности анализировать данные на 6 сутки эксперимента по группам 2 и 3, поскольку животные погибали до времени забора материала; динамика летальности обсуждалась в п. 4.1.
4.2.2. Уровень холестерина
Вторые сутки эксперимента сопровождались существенным снижением содержания холестерина в крови животных всех групп по сравнению с нормой (р=0,008; 0,005 и 0,005 соответственно). К четвертым суткам этот показатель нормализовался в основной группе, тогда как в контроле оставалсь выраженная
гипохолестеринемия (для групп 2 и 3 по сравнению с нормой р=0,003 и 0,004 соответственно). Следующий срок исследования показал существенное снижение уровня холестерина по сравнению с нормой и предыдущим показателем в первой группе (р=0,004 и 0,001 соответственно). Представленные данные свидетельствуют о протекторном воздействии ККП на липидный обмен, что проявляется к четвертым суткам после введения ксеногенной культуры эмбриональных клеток печени; в дальнейшем этот эффект исчезает.
4.2.3. Уровень билирубина
При исследовании на вторые сутки эксперимента во всех группах отмечена выраженная гипербилирубинемия (p£0,004 по сравнению с нормой) без существенных межгрупповых различий показателя. К 4-м суткам уровень общего билирубина существенно снижался в первой и второй группах по сравнению с предыдущими показателями (р=0,001 и 0,002 соответственно) и достигал околонормальных величин (р=0,04 и 0,07 по сравнению с нормой). В третьей группе гипербилирубинемия уменьшалась, но показатель был существенно выше нормы (р=0,004). Шестые сутки эксперимента показывали нормализацию уровня общего билирубина в основной группе.
Динамика содержания прямой фракции билирубина в сыворотке крови экспериментальных животных свидетельствовала о некотором повышении процессов конъюгации у крыс первой группы на 2-е сутки с существенным их угнетением к 4-м суткам и последующей нормализацией, в то время как у крыс 2-3 групп отмечено существенное исходное снижение уровня прямого билирубина (р=0,01 и 0,04 по сравнению с нормой) с дальнейшим незначительным повышением во второй группе (р=0,003 по сравнению с нормой) и нормализацией в третьей группе.
Таким образом, в наших экспериментах пигментный обмен приходил к норме к 6-м суткам после ККП. В то же время в контроле на протяжении 4 суток после лечебного воздействия сохранялись выраженные нарушения, которые выражались преимущественно в угнетении клиренса билирубина из крови (3 группа) и глюкуронизации этого пигмента (2 группа).