27. Признаки размножения вирусов в курином эмбрионе.

После гибели зараженных куриных эмбрионов в сроки, определенные для каждого вируса, их вскрывают, собирают вируссодержащий материал, который может быть использован для дальнейших вирусологических исследований.

Для определения жизнедеятельности эмбрионы прежде всего осторожно

просматривают над овоскопом. Погибшие эмбрионы не обладают подвижностью, их

кровеносные сосуды запустевают, или в них выражена прерывистость. Убедившись, что

эмбрионы погибли, их охлаждают в холодильнике при температуре - 4...- 6 °С в течение 2...3 ч для того, чтобы произошло сужение кровеносных сосудов и тем самым

уменьшилась опасность кровотечения. Это гарантирует получение чистой, свободной от

крови вируссодержашей жидкости.

Вскрытие эмбриона и взятие вируссодержащего материала выполняют в боксе с соблюдением стерильности и осторожности.

Перед вскрытием скорлупу над воздушным пространством дезинфицируют

спиртом, обжигают и тщательно обрабатывают настойкой йода. Стерильными ножницами

срезают скорлупу на 2...3 мм выше границы воздушного пространства. Яйцо слегка

наклоняют в сторону и через прокол в хорион-аллантоисной оболочке пастеровской

пипеткой отсасывают аллантоисную жидкость, избегая повреждения сосудов, чтобы

предотвратить адсорбцию вируса на эритроцитах. Вируссодержащую жидкость без

консерванта сохраняют при температуре ниже —20 °С. От одного эмбриона можно

собрать 6... 10 мл аллантоисной жидкости. Бактериальную загрязненность взятой

жидкости проверяют посевом 0,1...0,2 мл на обычные МПА и МПБ.

Наличие гемагглютинирующего вируса в аллантоисной жидкости определяют с

помощью ориентировочной реакции гемагглютинации. Для этого на хорошо промытые предметные стекла или кафельную плитку белого цвета наносят одну каплю 5%-й взвеси эритроцитов кур и одну каплю вируссодержащей жидкости. Стеклянной палочкой или отломанным концом пастеровской пипетки жидкость перемешивают. При наличии гемагглютинирующего вируса через 2...5 мин в центре смеси появляются хлопья агглютинирующих эритроцитов, а края просветляются; при отсутствии вируса смесь

остается мутной.

Для взятия пораженной хорион-аллантоисной оболочки ножницами подрезают ее на

границе с воздушным пространством, удаляют этот ее участок. Затем извлекают все

содержимое эмбриона в чашку Петри, а хорион-аллантоисную оболочку помещают в

отдельную стерильную чашку, тщательно расправляют и макроскопически исследуют на

темном фоне. Наиболее характерные изменения на хорион-аллантоисной оболочке

соответствуют данному вирусу: очень часто просматриваются округлые воспалительные

непрозрачные очаги, белесоватые перламутровые бляшки с некротическим центром, серовато-белый цвет оспин, расширение сосудов и др. Материал обязательно проверяют на бактериальное загрязнение посевом кусочка оболочки на МПА и МПБ. Для гистологических исследований берут поперечные срезы хорион-аллантоисной оболочки.

Для дальнейших вирусологических исследований готовят однородную массу, для

чего хорион-аллантоисную оболочку растирают в стерильной ступке с песком, добавляя

стерильный физиологический раствор до объема, чтобы получить 1,0...20%-ю суспензию.

Суспензию центрифугируют при 3000 мин-1

в течение 15...20 мин; надосадочную

жидкость используют как вируссодержащий материал. Наличие гемагглютинирующего

вируса определяют в ориентировочной реакции гемагглютинации.