33. Получение рекомбинантной днк. Векторы молекулярного клонирования.

Технология рекомбинантных ДНК (молекулярное клонирование)

1. Из организма донора извлекают нужную ДНК, подвергают ее ферментативному гидролизу и извлекают нужный ген.

2. У бактерий или других клеточных структур извлекают вектор (плазмиду) и его разрезают.

3. Вставляют в вектор фрагмент ДНК.

4. Полученную конструкцию вводят в клетку хозяина, где она передается потомкам.

5. Получают специфический белковый продукт, синтезируемый клетками хозяина.

Рекомбинантная ДНК - это искусственно полученная ДНК, которая включает определенный ген и вектор, обеспечивающий размножение рекомбинантной ДНК и синтез в клетке хозяина определенного продукта, кодируемого внесенным геном.

Вектором называют молекулу ДНК, способную включать в свой состав чужеродную ДНК, переносить ее в реципиентные клетки и стабильно там поддерживать.

Классификация векторов.

По области использования различают: 1) векторы общего назначения – для клонирования геномных генов и любых фрагментов ДНК; 2) векторы для экспрессии клонированных генов – для синтеза мРНК и белков; 3) специализированные векторы –для изучения особенностей регуляции клонированных генов

По происхождению векторы делят на: 1) плазмидные, которые существуют в клетке и вне ее только в виде молекул ДНК; 2) фаговые, которые существуют в виде молекул ДНК и вирионов; 3) гибридные, которые сочетают отдельные свойства плазмид и фагов

По структуре ДНК различают кольцевые и линейные векторы.

По способу поддержания в клетке выделяют: 1) автономные векторы, которые реплицируются(копируются) самостоятельно; 2) интегративные векторы, которые реплицируются в составе клеточной хромосомы.

По числу молекул в клетке векторы могут быть малокопийными и мультикопийными.

Для эффективного выполнения своей функции вектор должен отвечать следующим требованиям: 1)реплицироваться, чтобы стабильно существовать в клетке; 2) иметь селективный маркер, позволяющий отбирать трансформированные вектором клетки;

34. Новообразование и его сущность.

Иногда на формирование признака влияют две или несколько пар неаллельных генов. Проявление признака в этом случае зависит от характера их взаимодействия в процессе развития организма. В первом поколении появляется новый признак, которого не было у исходных родительских форм, и соотношение фенотипов во втором поколении будет иным.

Новообразование. Новообразованием называется такой тип взаимодействия генов, когда при их сочетании в одном организме развивается совершенно новая форма признака. Например, у кур гороховидная форма гребня определяется одним доминантным геном, розовидная – другим неаллельным ему, но тоже доминантным геном. Когда эти гены окажутся в одном генотипе, развивается ореховидная форма гребня. В случае если организм оказывается гомозиготным по обоим рецессивным генам, развивается простой листовидный гребень.

1. RC -ореховидный гребень

2. Rc- розовидный

3. rC-стручковидный

4. rc-листовидный

Таким образом, о комплементарном взаимодействии неаллельных генов(в разных участках хромосом и кодирующих неодинаковые белки) говорят в том случае, когда два неаллельных гена дают новый признак, то есть имеет место новообразование.