12 Диссертация Смолянова

141

Расчет фармакокинетических параметров проводили с помощью пакета Microsoft Excel с

расширением для проведения фармакокинетического анализа Boomer (Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism Allergan, Irvine, CA 92606, США). Распределение фармакокинетических параметров описано мерами центральной тенденции (среднее арифметическое, среднее геометрическое, медиана) и мерой разброса данных (стандартное отклонение, коэффициент вариации, минимальное значение, максимальное значение).

Описательная статистика фармакокинетических параметров проводилась с помощью Microsoft

Excel (Microsoft Corporation, США).

Фармакокинетические параметры исследуемого препарата КОВИД-глобулин, серия

П3. Фармакокинетика оценивалась на выборке из 8 добровольцев. Максимальное значение концентраций специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 составило 25,46±8,71 АКЕ/мл

(Mean±SD, где Mean – среднее арифметическое, SD – стандартное отклонение). Значение медианы времени достижения максимальной концентрации специфических антител IgG к вирусу

SARS-CoV-2 составило 0,25 часа. Значения площади под кривой «концентрация специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 – время» с момента введения до последнего определяемого значения концентрации специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 во временной точке t

(AUC0-t) и площадью под кривой «концентрация специфических антител IgG к вирусу SARS- CoV-2 – время» с момента введения препарата до бесконечности (AUC0-∞) составили

4970,92±1642,34 АКЕ∙ч/мл и 6821,64±2480,07 АКЕ∙ч/мл, соответственно. Специфические антитела IgG к вирусу SARS-CoV-2 элиминировались из плазмы крови со значением периода полувыведения (T1/2) 266,89±59,92 часов. Объем распределения ЛП (Vd) соответствует значению

6,40±3,61 л (Табл. 6.2).

Фармакокинетические параметры исследуемого препарата КОВИД-глобулин, серия

П4. Фармакокинетика оценивалась на выборке из 15 добровольцев (один доброволец выбыл из исследования в связи с несвязанным с препаратом исследования положительным результатом теста на выявление рибонуклеиновой кислоты (РНК) вируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции).

Максимальное значение концентрации специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2

составило 20,93±3,82 АКЕ/мл (Mean±SD, где Mean – среднее арифметическое, SD – стандартное отклонение). Значение медианы времени достижения максимального значения концентрации специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 составило 0,25 часа. Значения площади под кривой «концентрация специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 – время» с момента введения до последнего определяемого значения концентрации специфических антител IgG к

вирусу SARS-CoV-2 во временной точке t (AUC0-t) и площадью под кривой «концентрация специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 – время» с момента введения препарата до

142

бесконечности (AUC0-∞) составили 4115,43±686,38 АКЕ∙ч/мл и 6078,10±1410,08 АКЕ∙ч/мл,

соответственно. Специфические антитела IgG к вирусу SARS-CoV-2 элиминировались из плазмы

крови со значением периода полувыведения (T1/2) 295,56±50,68 часов. Объем распределения ЛП

(Vd) соответствует значению 4,47±0,67 л (Табл. 6.2).

Таблица 6.2 - Сводная таблица фармакокинетических параметров после однократного введения дозы исследуемого лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

143

Усредненные фармакокинетические профили (в линейных и полулогарифмических координатах) значений концентраций специфических антител IgG к вирусу SARS-CoV-2 после введения исследуемого препарата приведены на рисунках 6.1 и 6.2.

По полученным результатам данного исследования удалось был провестиден анализ фармакокинетических профилей, которые являются стандартными для препаратов внутривенных иммуноглобулинов. Данные результаты явились основанием для проведения последующих фаз клинических испытаний препарата иммуноглобулина человека против

COVID-19.

144

Рисунок 6.1 - Усредненные фармакокинетические профили (в линейных координатах со стандартными отклонениями) специфических антител к вирусу SARS-CoV-2 после

однократного введения дозы лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19 (серия П3 и П4)

Рисунок 6.2 - Усредненные фармакокинетические профили (в полулогарифмических координатах со стандартными отклонениями) специфических антител к вирусу SARS-CoV-2

после однократного введения дозы лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19 (серия П3 и П4)

145

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 6

1. Проведено изучение фармакокинетики лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19 (серия П3 и П4) при однократном внутривенном введении в дозе 4

мл/кг с участием здоровых добровольцев.

2.Результаты, полученные при изучении фармакокинетических профилей после однократного введения лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

сприменением разработанной методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 с

использованием тест-системы ИФА ГНЦ и разработанного СОП-1, доказали возможность использования разработанной методики при изучении фармакокинетических параметров.

3.Полученные результаты явились основанием для проведения последующих фаз клинических испытаний препарата КОВИД-глобулин.

146

ВЫВОДЫ

1.Проведен анализ современного состояния проблемы стандартизации специфиче-

ских иммуноглобулинов. Разработаны научно-методические подходы к выбору метода опреде-

ления специфической активности противовирусных иммуноглобулинов, определено, что класси-

ческим методом определения специфической активности лекарственных препаратов противови-

русных иммуноглобулинов является реакция вируснейтрализации, а также установлена тенден-

ция перехода на методы in vitro, с использованием метода иммуноферментного анализа (ИФА),

вчастности для количественного определения антител к SARS-CoV-2.

2.В результате проведенных сравнительных исследований оценки содержания антител к

SARS-CoV-2 в пулах плазмы крови человека с использованием методов реакции вируснейтрализации (РВН) и ИФА было установлено, что коэффициенты корреляции для сравниваемых методов при применении тест-систем для ИФА производства ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ (ИФА ГНЦ) и Евроиммун Медицинише Лабордиагностика ГмбХ, Германия

(ИФА ЕИ) составили 0,91 и 0,95, что свидетельствует о возможности использования метода ИФА с указанными тест-системами взамен РВН для определения антител к SARS-CoV-2 в

фармацевтической субстанции и лекарственном препарате иммуноглобулина человека против

COVID-19.

3.Разработан первичный стандартный образец для количественного определения антител

кSARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции (СОП-ФС-1), аттестованный референтным методом РВН. Титр вируснейтрализующих антител, соответствующий 1:20, позволил присвоить образцу значение активности в установленных нами впервые единицах измерения

(антиковидные единицы), равное 20 AKE/мл. Разработана методика количественного определения антител к SARS-CoV-2 методом ИФА с использованием СОП-ФС-1 и наборов реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ. Валидационные характеристики разработанной методики позволяют сделать заключение о том, что ее можно применять при определении антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции. Определена специфическая активность фармацевтической субстанции для производства лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19, составляющая не менее 20 АКЕ/мл.

4. Выполнены исследования по сравнительной оценке содержания антител к

SARS-CoV-2 в СОП-ФС-1, выраженного в единицах активности АКЕ/мл, относительно референс-панели NIBSC 20/268, охарактеризованной в принятых ВОЗ единицах связывания

BAU/мл. Установлено, что специфическая активность СОП-ФС-1 составила 96,8±6,8 BAU/мл антител к SARS-СоV-2. Коэффициент пересчета АКЕ/мл в BAU/мл составил 4,8 для набора реагентов ИФА ГНЦ, 5,0 для набора реагентов ИФА ЕИ.

147

5. Разработан стандартный образец для количественного определения антител к

SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 (СОП-1),

аттестованный референтным методом РВН. Титр вируснейтрализующих антител,

соответствующий 1:320, позволил присвоить образцу значение активности в установленных нами впервые единицах измерения (антиковидные единицы), равное 320 AKE/мл. Разработана методика количественного определения антител к SARS-CoV-2 методом ИФА с использованием СОП-1 и наборов реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ. Валидационные характеристики разработанной методики позволяют сделать заключение о том, что ее можно применять при определении антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19. Определена специфическая активность лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19, составляющая не менее 160 АКЕ/мл.

6. Выполнены исследования по сравнительной оценке содержания антител к

SARS-CoV-2 в СОП-1, выраженного в единицах активности АКЕ/мл, относительно референс-

панели NIBSC 20/268, охарактеризованной в принятых ВОЗ единицах связывания BAU/мл.

Установлено, что специфическая активность СОП-1 составила 2234,8±158,8 BAU/мл антител к

SARS-СоV-2. Коэффициент пересчета АКЕ/мл в BAU/мл составил 6,4 для набора реагентов ИФА ГНЦ, 7,0 для набора реагентов ИФА ЕИ.

7. Результаты, полученные при изучении фармакокинетических профилей после однократного введения лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19

с применением разработанной методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 с

использованием тест-системы ИФА ГНЦ и разработанного СОП-1, доказали возможность использования разработанной методики при изучении фармакокинетических параметров.

150

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Информационный портал // Coronavirus-monitor: сайт. – URL: https://coronavirusmonitor.ru/ (дата обращения: 03.02.2023).

2.Feasibility of using convalescent plasma immunotherapy for MERS-CoV infection Saudi Arabia / Y.M. Arabi, A.H. Hajeer, T. Luke [et al.] // Emerging infectious diseases. – 2016. – Vol. 22, №

9.– Р. 1554-1561. – DOI 10.3201/eid2209.151164.

3.The effectiveness of convalescent plasma and hyperimmune immunoglobulin for the treatment of severe acute respiratory infections of viral etiology: a systematic review and exploratory meta-analysis / J. Mair-Jenkins, M. Saavedra-Campos, J.K. Baillie [et al.] // Journal of the infectious diseases – 2015. – Vol. 211, № 1. – Р. 80-90. – DOI 10.1093/infdis/jiu396.

4.Overview of immune response during SARS-CoV-2 Infection: lessons from the past / V. Shah, P. Firmal, A. Alam [et al.] // Frontiers in Immunology. – 2020. – Vol. 11. – Р. 1949. – DOI 10.3389/fimmu.2020.01949

5.Al-Tawfiq, J / Convalescent plasma therapy for coronavirus infection: experience from MERS and application in COVID-19 / J. Al-Tawfiq, Y. Arabi // Human vaccines & immunotherapeutics.

– 2020. – Vol. 16, № 12. – P. 2973-2979.

6.Применение рековалесцентной плазмы в лечении новой коронавирусной болезни COVID-19: первый клинический опыт / В.Н. Павлов, В.М. Тимербулатов, Р.Г. Хамитов [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана. – 2020. – Т. 15, № 3. – С. 78-85.

7.Treatment of 5 Critically Ill Patients With COVID-19 with convalescent plasma / C. Shen,

Z. Wang, F. Zhao [et al.] // JAMA. – 2020. – Vol. 323, № 16. – P. 1582-1589. – DOI 10.1001/jama.2020.4783.

8.Convalescent plasma may be a possible treatment for COVID-19: a systematic review / Y. Wang, P. Huo, R. Dai [et al.] // International immunopharmacology. – 2021. – Vol. 91. – Р. 107262. – DOI 10.1016/j.intimp.2020.107262.

9.Effect of convalescent plasma on organ support-free days in critically ill patients with COVID-19: a randomized clinical trial / L.J. Estcourt, A.F. Turgeon, Z.K. McQuilten [et al.] // JAMA.

–2021. – Vol. 326, № 17. – Р. 1690-1702. – DOI 10.1001/jama.2021.18178.

10.The effect of convalescent plasma therapy on COVID-19 patient mortality: systematic review and meta-analysis / S.A. Klassen, J.W. Senefeld, P.W. Johnson [et al.] // Mayo clinic proceedings. – 2021. Vol. – 96, № 5. – Р. 1262-1275. – DOI 10.1016/j.mayocp.2021.02.008.

11.Convalescent plasma antibody levels and the risk of death from COVID-19 / M.J. Joyner, R.E. Carter, J.W. Senefeld [et al.] // New England journal of medicine. – 2021. – Vol. 384, № 11. – Р. 1015-1027.

12.Клиническое использование реконвалесцентной плазмы в терапии новой коронавирусной инфекции: московский опыт / А.Ю. Буланов, А.И. Костин, С.С. Петриков [и др.] // Анестезиология и реаниматология. – 2020. – Т. 6, № 2. – C. 33-39. – DOI 10.17116/anaesthesiology202006233.

13.Предварительные итоги исследования безопасности и эффективности плазмы реконвалесцентов в терапии COVID-19 / В.П. Баклаушев, А.В. Аверьянов, А.Г. Сотникова [и др.] // Клиническая практика. – 2020. – Vol. 11, № 2. – Р. 38-50. – DOI 10.17816/clinpract35168.

14.EUA of COVID-19 convalescent plasma for the treatment of COVID-19 in hospitalized patients: fact sheet for health care providers // Food and drug administration: web site. – URL: https://www.fda.gov/media/141478/download (access date: 03.02.2023).