Качественные методы
Анализ крови
Позволяется выявить хиломикроны и пре-β-липопротеидов, что определяет направление дальнейших диагностических поисков на пути исследования состояния липидного обмена.
Анализ мочи
Цвет (например, при порфирии моча имеет красный или коричневый цвет, при липидурии моча молочно-белого цвета)
Запах (например, мышиный запах мочи при фенилкетонурии)
Экспресс-тесты (например реакция с хлористым железом для ориентировачной диагностики наследственных болезней обмена аминокислот: в темно-зеленый цвет при фенилкетонурии или в цвет хаки при болезни кленового сиропа.
Количественные методы
Определение экскреции органических кислот с мочой с помощью метода газовой и масс-спектрометрии – проводят при подпзрении на наследственные нарушения аминокислот, органических кислот, обмена жирных кислот, митохондриальные болезни;
Определение ацилкарнитина и ацилглицина – выполняется при подозрении на дефицит карнитина, дефекты метаболизма органических кислот;
Тонкослойная хроматография – чувствительный и специфический метод скрининга, направленный на выявление нарушений обмена гликозаминогликанов, олигосахаридов, аминокислот;
Методы исследования тканевых культур (нативных и культивированных)
– направлены на определение активности ферментов
(флюорометрическим методом);
Биохимические методы – применяются также для диагностики гетерозиготного носительства (болезнь Вильсона-Коновалова, недостаточность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и др.)
Пример программы:
Качественный
и
количественный
анализ
мочи
и
крови
(14
тестов):
на
белок, на
кетокислоты, на цистин и гомоцистин,
креатинин ионы
аммония
и
др.
Методы тонкослойной хроматографии мочи и крови для выявления аминокислот, фенольных кислот, моно- и дисахаридов и других соединений. С помощью электрофореза мочи выявляют гликозаминогликаны. Эта программа позволяет выявлять 140 наследственных болезней обмена веществ у детей
Методы подтверждающей диагностики наследственных болезней обмена.
Чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз у лиц с клиническими симптомами болезней или у лиц с подозрением на наследственные болезни, выявленные при массовом или селективном скрининге, проводят подверждающую диагностику.
Биологические материалы - кровь, сыворотка крови, плазма, моча, пот, спинномозговая жидкость, культура клеток (фибробласты, лимфоциты, гепатоциты).
Методы:
Аналитическая биохимическая диагностика
Цитогенетическая диагностика (для выявления хромосомных болезней) Молекулярно-генетическая диагностика
Исследование кариотипа тканевых культур (культура фибробластов и
др.)
Энзимодиагностика
Тандемная масс-спектрометрия
Хромато-масс-спектрометрия Тандемная хромато-масс-спектрометрия
Высокоэффективная жидкостная хроматография
Газовая хроматография
Основные подходы к лечению наследственных заболеваний (симптоматическое, патогенетическое, этиологическое).
Терапия любого наследственного и ненаследственного заболевания направлена на
устранение причины болезни (этиологическая терапия), механизма болезни (патогенетическая терапия) и симптомов болезни (симптоматическая терапия).
Коррекция генотипа:
этиологическое Коррекция фенотипа:
патогенетическое симптоматическое
Этиологическое: Генная терапия – лечение путем введение в ткани или
клетки пациентов смысловых последовательностей ДНК
Проще исправить не сам дефект в гене, т.е. заменять весь мутантный ген или его мутированный фрагмент на нормальный, а вести коррекцию путем введения в организм пациента полностью работающего гена (обычно – его кДНК)
Исследования по генной терапии у человека осуществляются исключительно на соматических тканях, в которых в норме происходит
экспрессия дефектного гена. Генная терапия на уровне половых и зародышевых клеток человека, введу возможных серьезных последствий для генофонда человечества, представляется весьма проблематичной на данном этапе познаний – нереальна.
Разработанная и применяемая на практике методология генной терапии оказалась пригодной для лечения не только моногенных наследственных заболеваний, но и таких широко распространенных болезней, какими являются злокачественные опухоли, вирусные инфекции, сердечнососудистые заболевания и др.
Создание вводимой генетической конструкции, которая может включать несколько генов, один ген или его фрагменты, чаще всего кодирующую часть гена – кДНК;
Определение типа клеток, нуждающихся в генетической модификации;
Разработка способа введения чужеродной ДНК в патологические клетки;
Обеспечение адресности доставки вводимого генетического материала;
Обеспечение устойчивости и экспрессии введенной ДНК- конструкции;
Оценка количества клеток, модифицикация которых необходима для получения клинического эффекта;
Разработка методов контроля попадания и экспрессии введенного генетического материала;
Оценка длительности экспрессии и периодичности введения чужеродной кДНК;
Прогнозирование клинического эффекта и возможных побочных эффектов, связанных с проведением генотерапевтической процедуры.
Патогенетическое лечение: коррекция на уровне субстрата (ограничение(добавление), усиленное выведение, введение альтернативных субстратов, метаболическая ингибиция), фермента – добавление кофактора, модификация ферментативной активности, ферментозаместительная терапия или продукта – его добавление
Методы патогенетической терапии.
Диетотерапия
Устранение метаболического блока и выведение накапливающегося субстрата через обходные метаболические пути, с помощью:
приема лекарств (митохондриальных болезнях назначают доноры и акцепторы электронов, обеспечивающих антиоксидантный эффект в клетках и тканях организма),
введения коферментов (при гомоцистинурии назначают пиридоксин (витамин В6),
введения чистого фермента в клетки-мишени (заместительная ферментная терапия при болезнях Помпе, Фабри)
Подавление активности ферментов (индукция активности глюкуронилтрансферазы фенобарбиталом при гемолитической болезни новорожденных)
Стимуляция выведения субстрата (при болезни Вильсона- Коновалова применяется Д-пенициламин, содержащий сульфгидрильные группы, образующие комплексы с тяжелыми металлами, в том числе медью)
Заместительная терапия
Избирательная индукция синтеза одних ферментов и подавление синтеза других ферментов
Замещение поврежденных клеток и тканей (переливание крови, пересадка почек, трансплантация органов и клеток)
Хирургическое лечение больных с наследственной и врожденной патологией - коррекция, удаление, трансплантация
Внутриутробная терапия и хирургия Симптоматическая терапия
Симптоматическая терапия широко применяется при всех формах патологии человека. Она направлена на облегчение состояния больного, снижение темпа прогрессирования и тяжести течения патологического процесса, предотвращение развития осложнений.
Для симптоматической терапии общей патологии обычно используются лекарственные препараты, локальные хирургические вмешательства, физиотерапевтические методы.