10. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Применение.

Простой метод окраски.

Является одноэтапным и заключается в окраске микропрепарата одним красителем. Используют основные анилиновые красители, такие как, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде водных растворов или пропитанных красителем фильтровальных бумажек, которые помещают на мазок и смачивают водой. Продолжительность окраски составляет 3-5 минут, после чего микропрепарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. В препаратах, окрашенных простым методом, можно получить представление о форме, расположении и размерах микробных клеток.

Сложные методы окраски.

Сложные (дифференцирующие) методы окраски (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и дополнительных способов обработки препаратов. Эти методы позволяют дифференцировать бактерии в зависимости от строения их структур, чаще всего поверхностных.

Например, метод окраски по Граму позволяет дифференцировать бактерии по строению их клеточной стенки: грамположительные (фиолетовые) с толстой и грамотрицательные (красные) бактерии с тонкой клеточной стенкой.

Существуют специальные сложные методы окраски, которые используют для выявления структурных компонентов бактериальной клетки: капсул, цитоплазматических включений, спор, жгутиков.

Простой метод окраски включает 1 этап, используется 1 краситель, Благодаря этому методу окраски можно оценить форму, размеры и взаимное расположение клеток.

Например: стрептококки – это кокки, расположенные цепочками.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые).

Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства.

Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин.

Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин.

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки.

Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин.

Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе.

Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложный метод имеется несколько этапов, используются 2 красителя, благодаря этому методу отличают одну группу бактерий от другой или выявляют определенные структуры бактериальной клетки.

Напимер ГР+ ( фиолетовые) ГР- ( красные) .

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов.

Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные краситтели, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.