95. Легионеллы: биологические свойства, факторы патогенности, экологические особенности. Особенности патогенеза. Принципы лабораторной диагностики.

Легионеллы относятся к роду Legionella, семейству Legionellaceae.

Род Legionella насчитывает более 20 видов: L. pneumophila, L. bozemanii, L. miedadei и др.

Вид L. pneumophila самый многочисленный, его представители разделены на 15 серогрупп и каждый из них может вызывать заболевание у человека.

Для выращивания возбудителя используют искусственные питательные среды с добавлением L-лецитина и пирофосфата железа (среда Мюллера-Хинтена), а также куриные эмбрионы.

Возбудитель устойчив во внешней среде, чувствителен к обычным дезинфицирующим растворам (при воздействии 1% раствора формалина, 70% спирта, 0,002% раствора фенола гибнет в течение 1 мин),

а также ко многим антибиотикам: эритромицину, ампициллину, хлорамфениколу, рифампицину и др. В пораженных тканях располагается как вне-, так и внутриклеточно.

Экологические особенности.

Возбудитель обитает в теплых открытых водоемах, заросших водорослями. Показана возможность ассоциации легионелл с определенными видами сине-зеленых водорослей и простейшими. Легионеллы могут длительно сохраняться и обнаруживаться в системах водоснабжения и кондиционирования воздуха, в душевых установках, ваннах для бальнеопроцедур, медицинском оборудовании для ингаляций и искусственной вентиляции легких.

Передача инфекции осуществляется аэрогенным путем. Посредниками передачи возбудителя могут быть как воздух, так и вода - конденсат в кондиционерах. Другими посредниками передачи служат головки душевых установок, пыль, поднятая во время земляных работ, почва в эндемических очагах. Описаны внутрибольничные вспышки легионеллеза.

Патогенез.

Местом первичной локализации инфекции является слизистая оболочка верхних дыхательных путей (при респираторном легионеллезе) или ткань легкого (при пневмонической форме), где происходит накопление возбудителя и возникает воспалительный процесс. Особенно тяжелое течение легионеллеза наблюдается у лиц с сопутствующими заболеваниями, длительно леченных иммунодепрессантами, и при внутрибольничном инфицировании. При легких формах в патологический процесс вовлекаются преимущественно слизистые оболочки верхних дыхательных путей, и заболевание протекает по типу ОРЗ без признаков генерализации инфекции.

При тяжелых формах поражается ткань легких.

Диагностика. Для лабораторного подтверждения диагноза используют бактериологические и серологические методы исследования. Возбудитель можно выделить из плевральной жидкости, реже - из мокроты и крови.

С этой целью или засевают материал на агар Мюллера-Хинтона с добавлением солей железа и L-цистина, или материалом заражают морских свинок с последующим инфицированием куриных эмбрионов. В качестве экспресс-диагностики используют метод прямой иммунофлюоресценции, с помощью которого можно обнаружить ДНК или сам возбудитель непосредственно в мокроте, бронхиальных смывах или в отпечатках биоптатов бронхов и легких, полученных при бронхоскопии.

Для серологической диагностики используют ИФА, непрямой метод иммунофлюоресценции или реакцию микроагглютинации.

Лабораторная диагностика

Диагноз устанавливается с помощью метода прямой иммунофлюоресценции, бактериологическим и серологическим методами, применяют полимеразную цепную реакцию.

Исследуемые материалы: бронхо-альвеолярные аспираты, мокрота, плевральная жидкость, аутопсийный материал, моча, кровь.

Прямая иммунофлюоресценция - информативный и чувствительный тест. Используют для быстрого обнаружения легионелл в исследуемых материалах.

Для этой цели из них готовят мазки или мазки-отпечатки, фиксируют формалином, промывают. Наносят специфический поливалентный люминесцирующий иммуноглобулин затем препарат промывают (чтобы отмыть несвязавшиеся антитела) и просматривают в люминесцентном микроскопе. В положительном случае клетки легионелл светятся ярким желто-зеленым свечением. Легионеллы часто обнаруживают в материалах бронхоскопии, биопсии, плевральном экссудате, очень редко - в мокроте.

Бактериологическое исследование. Исследуемые материалы засевают на чашки Петри со специальными средами, содержащими L-цистеин и пирофосфат железа - буферный угольно-дрожжевой агар и др. Посевы инкубируют во влажной атмосфере в присутствии 3-5% СО2 при 35°С в течение 2-14 суток (чаще 3-5 дней). Колонии легионелл на средах могут образовывать коричевый пигмент, диффундирующий в_агар

Мазки из колоний, окрашенные по Граму, содержат грамотрицательные палочки с заостренными концами. Подозрительные колонии засевают на две чашки со специальными средами с цистеином и без цистеина. Легионеллы, за исключением L.oakridgensis, не растут на средах без цистеина. Чистую культуру легионелл выделяют из колоний, выросших в присутствии цистеина и проверенных методом прямой иммунофлюоресценции (должно наблюдаться свечение).

Идентификацию выделенной культуры проводят по комплексу признаков: морфологических, культуральных, биохимических, определяют принадлежность к серогруппе.

Серологический метод применяют для обнаружения специфических антигенов или антител в клинических материалах от больного. Наилучшие результаты дает выявления легионеллезных антигенов в моче с помощью ИФА.

Лечение. Антибиотики: эритромицин, азитромицин.

Специфическая профилактика не разработана.