119.Возбудитель лептоспироза. Биологические свойства, факторы вирулентности. Значение в патологии человека.

Порядок – Spirochaetales

Семейство – Leptospiraceae

Род – Leptospira (от греч. leptos – тонкий, spira – спираль)

Виды – L. interrogans (патогенные для человека и животных), L. biflexa (сапрофитные)

Возбудителем лептоспироза являются различные серовары вида L. interrogans рода Leptospira семейства Leptospiraceae, класса Spirochaetes.

Морфология

Тонкие извитые нити, размеры 6-20х0,1 мкм; с 20-40 мелкими первичными завитками, первичные завитки тесно сжаты, при обычном увеличении не различимы (видны в электронном микроскопе), это придает им в мазке вид «четок» или «нитей жемчуга»; имеют вторичные завитки на концах, придающие им S- или С-образную форму в зависимости от направления загнутых концов; спор, капсул не имеют; с обоих концов отхо-дят по два периплазматических жгутика, очень подвижны. Цист не образуют.

Лептоспиры - тонкие спирохеты размером 0,07-0,15x24 мкм с изогнутыми концами. Двигательный аппарат представлен идущими от каждого полюса клетки по одной фибрилле. Число завитков 20-40. Слабо окрашивают-ся анилиновыми красителями, поэтому трудноразличимы на препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Легкоразличимы при микроскопии в темном поле и фазово-контрастной микроскопии. Обладают уникальным строением генома - наличием 2 кольцевых хромосом.

Тинкториальные свойства.

Плохо окрашиваются анилиновыми красителями, грамотрицательные, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, при импрегнации серебром по Морозову – коричневые или черные, изучаются с помощью темно-польной микроскопии.

Культуральные свойства.

Аэробы. Источником углерода и энергии служат липиды. Каталазо- и оксидазоположительны. Культивируются на питательных средах, содержащих сыворотку или сывороточный альбумин, при 28-30 °С. Растут медленно (лаг-фаза длится 2-8 сут, логарифмическая фаза роста - 3-8 сут). Делятся поперечным делением, цист не образуют.

Аэробы или микроаэрофилы, оптимальная температура культивирования 28-300С, рН 7,2-7,4, длительность – 3-7 дней. Не прихотливы к питательным средам (в природе живут в воде), но требуют повышенной влажности сред (гидрофилы). Для культивирования используют жидкие, полужидкие и плотные среды с добавлением кроличьей сы-воротки (например, водно-сывороточная среда Уленгута, фосфатно-сывороточная среда). На плотных и полу-жидких питательных средах растут в нескольких миллиметрах от поверхности в виде бесцветных плоских дисков. При росте в жидких питательных средах визуального изменения не вызывает (о результатах роста судят по данным микроскопии в темном поле).

Биохимические свойства: малоактивны (каталазо-, оксидазо+).

Антигенная структура.

Содержат общеродовой антиген белковой природы, выявляемый в РСК, а также вариантоспецифический поверх-ностный антиген липополисахаридной природы, выявляемый в реакции агглютинации. Таксономическим критерием для лептоспир служит антигенный состав. Основным таксоном является серовар. Известно 250 сероваров, которые объединены более чем в 25 серогрупп.

Сложная, по химическому составу выделяют полисахаридные, липидные, белковые антигены (антигенную структуру изучают в РМАЛ). Известны более 200 сероваров, объединенных в 25 серогрупп (более 100 сероваров патогенны для человека). В Кировской области встречаются серовары: L.рomona, L.grippotyphosa, L.iсterohaemorrhagia.

Факторы патогенности.

Некоторые серовары обладают липазой, гемолитическими свойствами, продуцируют плазмокоагулазу, фибриноли-зин, цитотоксины. Изучены недостаточно.

Токсины. Обнаружены эндотоксино-и экзотоксиноподобные вещества:

· Эндотоксин – вызывает общую интоксикацию, кровоизлияние за счет повышения проницаемости сосудов.

· Токсическое вещество белковой природы – обладает цитотоксическим действием.

· Гемолизин обусловливает гемоглобинурию, желтуху, анемию.

Ферменты патогенности: фибринолизин, плазмокоагулаза.

Структурные и химические компоненты клетки: адгезины, высокая подвижность за счет жгутиков.

Резистентность.

Чувствительны к высыханию, нагреванию, низким значениям рН, дезинфицирующим веществам. При нагревании до 56 °С погибают в течение 25-30 мин. Кипячение убивает микроб мгновенно. В водоемах сохраняется до 30 дней, во влажных и щелочных почвах - до 280 дней, на пищевых продуктах - 1-2 сут.

Относительно устойчивые. В воде открытых водоемов сохраняются до 1 месяца (на длительность сохранения в воде решающее значение оказывают рН среды, со снижением рН продолжительность выживания уменьшается),

в замороженном состоянии переживают месяцы, а при быстром замораживании (-700С) – годы. Чувствительны: к нагреванию (при 56-600С погибают через 30 минут, 1000C – мгновенно), к высушиванию, никим рН, к дез. раство-рам (быстро погибают под воздействием хлорсодержащих растворов), к УФО, к антибиотикам (пенициллин, тетра-циклин, левомицетин).

Эпидемиология.

Резервуаром в природе является более 100 видов диких и домашних животных. Непрерывность процесса циркуля-ции патогенных лептоспир в природе обеспечивается их способностью к колонизации эпителия извитых канальцев коркового слоя почек животных, у которых формируется хроническое носительство. У грызунов лептоспироз проте-кает всегда бессимптомно, у домашних животных лептоспироз протекает как бессимптомно, так и в хронически вы-раженной форме. Инфицированные лептоспирами животные выделяют их с мочой, контаминируя окружающую сре-ду. Больной человек является тупиком инфекции и не имеет практического значения как ее источник. Основной путь передачи водный. Возможны также алиментарный и контактный пути передачи.

Зооноз. Источник инфекции и основной резервуар лептоспир в природе – различные виды мелких млекопитающих, особен-но грызуны (хронические носители лептоспир, выделяют с мочой).

Механизм передачи инфекции:

Урино-оральный (пути – водный – при употреблении для питья, контактный – при купании, уходе за больными жи-вотными, забое, разделке туш и алиментарный – чаще мясо и молоко).

Носит профессиональный характер.

Сезонность – весенне-летняя (покосные вспышки).

Входные ворота: поврежденная кожа (достаточно экскориации), неповрежденные слизистые (ЖКТ, глаз, мочеполо-вых органов).

Патогенез и клинические особенности.

Инкубационный период 7-10 дней. Входные вороты; слизистые оболочки желудочнокишечного тракта, полости рта, глаз, носа, поврежденные кожные покровы. Проникнув в организм, микроб с кровью разносится к органам ретикуло-эндотелиальной системы (печень, почки), где размножается и вторично поступает в кровь, что совпадает с началом заболевания.

Возбудитель поражает капилляры почек, печени, центральную нервную систему, приводя к развитию геморрагий в этих органах. Болезнь сопровождается лихорадкой, интоксикацией, желтухой, развитием почечной недостаточности, асептического менингита. Летальность колеблется от 3 до 40%.

В патогенезе (по К.Н.Токаревичу, 1982 г.) различают 5 фаз:

I фаза (7-20 дней) – инкубационная, внедрение возбудителя в организм, благодаря активному движению быстрое проникновение в лимфоузлы и кровь – первичная бессимптомная бактериемия и диссеминация возбудителя.

II фаза (1 неделя заболевания) – вторичная бактериемия, проникновение в органы и ткани (в основном паренхима-тозные – печень, почки, легкие, оболочки мозга и т.д.), где возникают воспалительные и дегенеративные изменения. Клинически – резкое повышении температуры (38-400С), лихорадка, сильная головная боль, мышечная боль (осо-бенно в икроножных мышцах).

III фаза (2 неделя заболевания) – токсическая (максимальное развитие токсемии). Поражение продуктами метабо-лизма лептоспир капилляров – капилляротоксикоз. Развиваютя:

· Геморрагического синдрома (гемморагии на коже, слизистых, внутренних органах).

· Желтуха (обусловлена гемолизом и некротическими изменениями печеночной паренхимы).

· Нарушение мочеобразования и мочевыделения (повреждается эпителий почечных канальцев, коркового и подкор-кового вещества).

· Менингит (накопление лептосир в СМЖ).

IV фаза (3-4 неделя) – формирование нестерильного иммунитета, нарастание антител в крови, но возбудитель мо-жет длительно сохраняться в почках.

V фаза (4-5 неделя) – освобождение организма от возбудителя.

Иммунитет.

После перенесенного заболевания формируется прочный гуморальный серовароспецифический иммунитет.

Постинфекционный иммунитет – гуморальный, прочный, напряженный, длительный, строго типоспецифический.

Микробиологическая диагностика

Материалом для исследования служат кровь, моча, сыворотка крови, ликвор в зависимости от стадии заболевания. Для диагностики используют бактериоскопический (обнаружение лептоспир в темнопольном микроскопе), бакте-риологический, серологический методы, биопробу на кроликах-сосунках и морских свинках и ПЦР. На 1-й неделе заболевания возбудитель можно обнаружить в крови, в период разгара заболевания - в моче и ликворе. В связи с тем что эффективность бактериологического метода ограничена из-за длительности проведения анализа (около 3 мес), ведущее место занимает серологический метод, при котором выявляют в крови антитела, а в биологических жидкостях - антигены лептоспир. Золотым стандартом метода является реакция микропреципитации с эталонным набором живых культур лептоспир по схеме, предложенной ВОЗ. Антитела можно определить с конца 1-й нед забо-левания в диагностическом титре 1:100. В качестве экспресс-диагностики на 1-й нед заболевания определяют IgM ИФА и ДНК возбудителя ПЦР. Современными направлениями в лабораторной диагностики лептоспироза является обнаружение антигенов возбудителя при помощи ИФА, РОНГА для ранней диагностики лептоспироза.

Специфическая профилактика.

Применяется по эпидемиологическим показаниям и для вакцинации групп риска – поливалентная убитая лепто-спирозная вакцина.

Специфическая профилактика проводится вакцинацией по эпидемиологическим показаниям убитой нагреванием корпускулярной вакциной, содержащей 4 основные серогруппы возбудителя. Неспецифическая профилактика сво-дится к борьбе с грызунами, проведению зооветеринарных мероприятий и соблюдению личной гигиены.

Специфическое лечение.

Лечение проводят введением гетерологичного противолептоспирозного иммуноглобулина совместно с этиотропной антибиотикотерапией.

Противолептоспирозный иммуноглобулин (гетерогенный из гипериммунной сыворотки волов).

Неспецифическое лечение – антибиотики (пенициллин, тетрациклин).