поставить стандарт: взять 0,5 мл раствора пентозы известной концентрации и добавить 0,5 мл орцинового реактива.
Пробирки поместить в кипящую водяную баню на 40 минут. Потом вытянуть,
прибавить по 5 мл воды; перемешать содержание пробирок и определить оптическую плотность растворов на ФЭК в кювете на 5 мм при красном светофильтре (λ = 665 нм).
По величинами оптической плотности стандарта и исследуемого раствора составить пропорцию и рассчитать содержание пентоз.
Внорме концентрация пентоз: в крови – меньше 133 мкмоль/л (2мг%),
вмоче – в среднем около 250 мг/сут.
2.Выявление фруктозы реакцией Селиванова.
Принцип метода: при нагревании раствора фруктозы с концентрированной соляной кислотой образуется оксиметилфурфурол, который с резорцином дает
продукт конденсации, окрашенный в интенсивный вишнево-красный цвет.
Ход работы: в пробирку помещают 2-3 капли 1% раствора фруктозы, 4-5 капель
реактива Селиванова (0,05 г резорцина растворяют в 100 мл разведенной соляной кислоты 1:1). Нагревают и наблюдают за изменением окраски раствора.
Тема 16. Исследование катаболизма и биосинтеза гликогена. Регуляция обмена гликогена.
Актуальность темы.
Знание врачом биохимических механизмов синтеза и распада гликогена, как
процессов регулирующих концентрацию глюкозы в крови, имеет важное значение для оценки состояния углеводного обмена, понимания патогенеза отдельных наследственных и ненаследственных заболеваний и их диагностики.
Цель и исходный уровень знаний.
Общая цель.
Выучить и написать схемы биохимических процессов синтеза и распада гликогена,
их регуляция и значение в патогенезе гликогенозов и агликогенозов.
Конкретные цели:
1.Трактовать функциональные особенности и биологическое значение синтеза и распада гликогена в тканях.
2.Объяснять молекулярно-биологические основы наследственных энзимопатий связанных с обменом гликогена.
Исходный уровень знаний-умений: уметь писать структуру мономеров и
определять типы связей в молекулах наиболее распространенных гомо- и гетерополисахаридов.
Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.
Содержание |
и |
Указания к учебным действиям |
|
последовательность действий |
|
||
1. |
Практическое |
изучение |
1.1. Выявление гликогена в печени. |
выявления гликогена в печени. |
|
||
2. |
Синтез гликогена и его |
2.1. Структура гликогена и его |
|
нарушения. |
|
биологическая роль. |
|
32
2.2.Объясните механизмы биосинтеза
гликогена (реакции, ферменты).
2.3.Генетические нарушения
ферментных систем синтеза гликогена, характеристика наиболее
распространенных агликогенозов.
3. |
Катаболизм |
гликогена. |
3.1. |
Объясните |
биохимические |
|||
Регуляция обмена гликогена. |
механизмы распада гликогена |
в печени и |
||||||
|
|
|
мышцах: |
|
реакции, |
ферменты, |
||
|
|
|
биологическая роль. Чем отличается распад |
|||||
|
|
|
гликогена в печени и мышцах? |
|
|
|||
|
|
|
3.2. |
Гормональная |
регуляция |
обмена |
||
|
|
|
гликогена: каскадный механизм ц-АМФ- |
|||||
|
|
|
зависимой |
регуляции |
активности |
|||
|
|
|
гликогенфосфорилазы |
и |
|
гликоген- |
||
|
|
|
синтетазы. |
|
|
|
|
|
|
|
|
3.3. Генетические нарушения |
процесса |
||||
|
|
|
распада гликогена (гликогенозы). |
|
||||
4. |
Метаболизм |
углеводных |
4.1. |
Биосинтез О- |
и N- |
связанных |
||
компонентов гликоконъюгатов. |
гликопротеинов; |
|
|
|
значение |
|||
|
|
|
гликозилтрансфераз и долихолфосфата. |
|||||
|
|
|
4.2. Биосинтез гликолипидов на примере |
|||||
|
|
|
образования олигосахаридных фрагментов |
|||||
|
|
|
детерминант групп крови человека системы |
|||||
|
|
|
АВ0. |
Ферменты |
катаболизма |
|||
|
|
|
гликоконъюгатов. Генетические |
нарушения |
||||
|
|
|
метаболизма гликоконъюгатов (ревматизм, |
|||||
|
|
|
гликозидозы, |
мукополисахаридозы, |
||||
|
|
|
гликолипидозы). |
|
|
|
|
|
Задание для индивидуальной самостоятельной работы студентов.
Создание схемы в электронном варианте: “Регуляция процессов синтеза и
распада гликогена”.
Алгоритм лабораторной работы.
Задание 1. Изучение распада и биосинтеза гликогена в печени.
Принцип работы. Наиболее активно распад и биосинтез гликогена проходит в
печени. Гликоген образует с йодом окрашенные соединения: окраска от ярко-красного
до красно-бурого возникает в результате образования неустойчивого адсорбционного
соединения гликогена с йодом. Ход работы:
0,5 г печени размещают в фосфорной чашке, добавляют 5 мл кипящей дистиллированной воды и кипятят 3 минуты. Ткань печени растирают в фосфорной ступке, добавляют 2 мл воды, 5 капель уксусной кислоты и кипятят 10 минут. Осадок
белков фильтруют. Образованный гидролизат исследуют.
Задание 2. Выявление гликогена в печени животных при нормальном рациональном питании и в состоянии голода.
Принцип метода. Качественной реакцией на гликоген печени является реакция на ранее подготовленный гидролизат.
Ход работы:
К 0,5 мл гидролизата печени добавляют 3 капли раствора йода. При наличии в
печени гликогена раствор будет иметь характерный красный цвет.
33