Качественный анализ биологической жидкости на содержание белков и аминокислот.

1) Нингидриновая реакция на аминокислоты.

Принцип реакции. Нингидрин при нагревании с α-аминокислотами вызывает

образование из них альдегида с освобождением CO2 и NH3, и восстановленного нингидрина. Аммиак реагирует с восстановленным нингидрином, образовывая

комплекс сине-фиолетового цвета.

Ход качественного определения аминокислот. В пробирку налить 0,5 мл

раствора аминокислоты и добавить 0,5 мл 1% раствора нингидрина в спирте. Перемешать и нагревать на водяной бане 5 минут. Наблюдается сине-фиолетовая окраска.

2) Биуретовая реакция на белки.

Принцип реакции. Ионы меди (Cu2+) в щелочной среде образуют с пептидными группами (кислото-амидная или пептидная связь) комплексное соединение сине-

фиолетового цвета.

Ход качественного определения белков.

В пробирку налить 0,5 мл раствора белка и 0,5 мл биуретового реактива.

Развивается сине-фиолетовая окраска.

Тема 2. Исследование строения и физико-химических свойств белков-ферментов.

Актуальность темы.

Ферменты это биологические катализаторы реакций обмена веществ. Белковая природа ферментов обусловливает их высокую лабильность в зависимости от многих факторов. Так, в зависимости от температуры тела человека, а также от рН внутренней среды организма активность ферментов может изменяться, что приводит

к развитию патологических процессов.

Цель и исходный уровень знаний.

Общая цель.

Изучить физико-химические свойства белков-ферментов.

Конкретные цели:

1.Анализировать механизмы регуляции основных метаболических процессов;

2.Трактовать биохимические закономерности строения и функционирования разных классов ферментов;

3.Анализировать физико-химические свойства белков-ферментов.

Исходный уровень знаний-умений: знать строение белков, классификацию и структуру протеиногенных аминокислот.

Ориентировочная карта для самостоятельного изучения студентами учебной литературы при подготовке к занятию.

6

1.2.Объяснить термолабильность

ферментов на примере определения активности амилазы слюны, которая

предварительно нагрета или охлаждена и предварительно не обработана.

1.3.Изучить зависимость активности амилазы слюны от рН среды.

Алгоритм лабораторной работы.

1. Доказать белковую природу ферментов биуретовой реакцией, реакцией Фоля.

1.1. Биуретовая реакция на белки:

Принцип реакции: ионы меди (Cu 2+) в щелочной среде образуют с пептидными группами комплексное соединение сине-фиолетового цвета.

Ход работы: в пробирку налить 0,5 мл исследуемого раствора и 0,5 мл биуретового реактива. Развивается сине-фиолетовая окраска.

1.2. Реакция Фоля.

Принцип метода: при нагревании раствора белка, в котором есть остатки серусодержащих аминокислот (цистеин) с растворами щелочи и соли свинца, сера образует черный осадок PbS.

Ход работы: в пробирку налить 0,5 мл исследуемого раствора, добавить 1 мл

реактив Фоля. Нагревать на водяной бане до образования черного осадка.

2. Изучение термолабильности ферментов.

Слюну развести в 5 раз (1 мл слюны + 4 мл воды). 2 мл разведенной слюны

кипятить 5 минут. В 3 пробирки налить по 10 кап. 1% раствора крахмала. В первую пробирку прибавить 10 кап. воды (контроль), во вторую – 10 кап. охлажденной

прокипяченной слюны, в третью – 10 кап. разведенной слюны.

Все пробирки поместить в водяную баню или термостат при температуре 38 0Сна 10 минут. После этого выполнить качественные реакции на крахмал и продукты его

гидролиза (глюкозу и мальтозу).

Реакция на крахмал: к 5 кап. исследуемого раствора добавить 1 кап. раствора Люголя (КІ3). В присутствии крахмала появляется синяя окраска

Реакция Фелинга: к 5 кап. исследуемого раствора добавить 3 кап. раствора

Фелинга (CuSO4 + NaOH), подогреть. В присутствии глюкозы или мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди.

7