Мудл:

Метод пограничных значений (break-point method)

Для реализации метода проверяют способность культуры к росту при двух (реже одной) концентрациях препарата. Указанные концентрации определяются на основании оценки резистентности циркулирующих штаммов.

Штамм, не способный к росту при меньшей концентрации, считается чувствительным (S), растущий при большей концентрации - устойчивым (R). Рост микроорганизма при меньшей концентрации препарата и подавляемый большей концентрацией позволяет отнести его к промежуточным (I). Использование только одной пограничной концентрации позволяет разделить микроорганизмы на устойчивые и резистентные, без выделения промежуточной группы.

Достоинства метода

·Экономичность

·Малая зависимость от квалификации персонала

·Применим в случаях, когда препарат плохо диффундирует в агаре (метод стандартных дисков неприменим)

Недостатки метода

·Определение носит качественный характер

Метод разведений в жидкой среде

Испытуемый штамм засевают в серию пробирок с бульоном, содержащим различные концентрации антибиотика. После инкубации учитывают результат. О наличии роста судят по помутнению среды (в некоторых случаях - по изменению окраски).

Определение проводят в обычных пробирках (макрометод) или в 96-ти луночных панелях (микрометод).

Достоинства метода

·Количественная оценка резистентности

·Простота учета

·Возможность автоматизации постановки и учета при использовании 96-луночных панелей

Недостатки

·Высокая трудоемкость (особенно при использовании макрометода)

Метод градиентных полосок (Е-тест)

На специальную полоску последовательно нанесены разведения антибиотика, что позволяет создать градиент его концентрации в агаре. Образующаяся зона задержки роста "пересекает" тест-полоску в той точке, которая соответствует минимальной ингибирующей концентрации препарата.

В настоящее время различные фирмы выпускают аналогичные тест-системы, отличающиеся технологией создания градиента. Наиболее инвестны E-test (bioMerieux), которые являются родоначальниками данного метода.

Достоинства метода

·Простой метод, доступный для практических лабораторий

·Количественная характеристика резистентности

Недостатки метода

·Высокая стоимость

·Большой расход питательных сред (на стандартную чашку Петри можно поместить только один тест)

Доп инфа:

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека.

Вштатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика,

вдругом — исследуемой жидкости.

Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой.

При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тестбактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli.

После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями.

Концентрация антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тестбактерий.

Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно 1 :1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тестбактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024- 0,313=320 мкг/мл составляет концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу.

В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лакта-мазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).