Фаготипирование производят при стафилококковой инфекции, брюшном тифе, паратифе

В

5. Схема использования и учета результата

При внутривидовой идентификации бактерий, т. е. при определении фаговара (фаготипа) бактерий с помощью фаготипирования, на чашку с плотной питательной средой, засеянную чистой культурой возбудителя в виде «газона», наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов. Бактерии, чувствительные к фагу, лизируются (образуется стерильное пятно, «бляшка» или так называемая негативная колония фага).

На засеянные «газоном» стафилококки наносятся капли взвеси стафилококковых бактериофагов. Через сутки после инкубации в термостате видны стерильные зоны отсутствия роста бактерий (стерильные «бляшки») в результате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих бактерий.

Фаготипирование стафилококков:

Дно чашки Петри с МПА делят на квадраты, каждый из которых подписывают цифрами, соответствующими номерам типовых стафилофагов. На подготовленную чашку газоном засевают исследуемый штамм S.aureus и в каждый квадрат капают соответствующий типовой стафилофаг. Засеянную чашку с культурой и бактериофагами помещают в термостат. На другой день учитывают результат фаготипирования, отмечая номера типовых стафилофагов, лизировавших культуру (в соответствующих квадратах будут видны "стерильные пятна").Фаготип - перечень типовых бактериофагов, лизировавших данную культуру. Это - один из приемов внутривидового типирования, позволяющий установить источник инфекции и пути распространения.

ЗАДАЧА 63

У пациента с явлениями колита из испражнений была выделена шигелла. Определили чувствительность выделенного микроорганизма к антибиотикам и бактериофагам. Лечащий доктор с учетом легкой клинической формы бактериальной дизентерии, назначил препарат из группы синбиотиков (коррекция микробиоты) и «Интестибактериофаг».

1)К какой группе относится препарат «интести-бактериофаг»?

Вакцины, сыворотки, фаги и анотоксины

2)Что содержит препарат«интести-бактериофаг»?

Смесь стерильных фильтратов фаголизатов (Фаголизат — продукт лизиса жидкой бактериальной культуры бактериофагом, представляющий собой смесь компонентов бактериальных клеток и питательной среды, содержащую частицы бактериофага.)

3)Как получен«интести-бактериофаг»?

Производственный процесс включает в себя: работу с бактериальными возбудителями гнойно-септических и кишечных инфекций, подбор к ним вирулентных штаммов бактериофагов, отбор бактерий — продуцентов бактериофагов, получение маточных бактериофагов, культивирование производственных штаммов бактерий — продуцентов и маточных бактериофагов с целью получения биомассы бактериофагов и приготовление препаратов бактериофагов. Освобождение фаголизитов от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток должно быть обеспечено дополнительными методами очистки (ультрафильтрацией, афинной хроматографией и т.д.).

После завершения процесса фаголизиса бактериальной взвеси осуществляется стерилизующая фильтрация фаголизатов, затем очищение от бактериальных метаболитов и токсинов, компонентов питательной среды, далее фаголизаты подвергаются концентрированию, полученные концентраты стерилизуются.

После концентрирования из фаголизатов готовят жидкие препараты, которые доводятся до финального титра буферными растворами pH 6,0 — 8,0, стерилизуют и разливают в стерильные флаконы, укупориваются герметично и стерильно;

4)Для чего используется «интести-бактериофаг»?

Лечение и профилактика заболеваний желудочно-кишечного тракта, вызванных бактериями дизентерии, сальмонеллами, эшерихиями коли, протеем, энтерококками, стафилококками, псевдомонас аэругиноза или их сочетанием.

бактериальная дизентерия;

сальмонеллез;

диспепсия;

дисбактериоз;

энтероколит, колит.

Важным условием эффективной фаготерапии является предварительное определение фагочувствительности возбудителя.

5)Возможный способ введения препарата?

Препарат предназначен для приема внутрь и ректального введения. Для лечения препарат принимают внутрь 4 раза в день за 0.5-1 ч до приема пищи с первого дня заболевания в течение 7-10 дней.

Дополнительная информация про туберкулез: https://vk.com/doc261372715_614041635?hash=6c3fdfe2fb8c5a88fd&dl=3ebe456f7cc5ddc86 d

ЗАДАЧА 64.

При нагноении пупочной раны у новорожденного был взят мазок из раны и отправлен на бактериологическое исследование. При посеве отделяемого были выделены в значимом количестве золотистый стафилококк и энтерококк. Тестирование возбудителей на чувствительность к бактериофагам позволило педиатру для лечения омфалита подобрать лечение. Был назначен препарат «Пиобактериофаг».

1. К какой группе относится препарат «Пиобактериофаг»?

антибактериальный препарат, бактериофаг.

2. Что содержит препарат «Пиобактериофаг»?

В составе раствора для приема внутрь находится смесь фильтратов фаголизатов стафилококков, эшерихий коли, клебсиелл пневмония, псевдомонад, протея мирабилис, протея вульгарис, стрептококков, энтерококков + вспомогательные вещества – консерванты (хинозол).

3. Как получен «Пиобактериофаг»?

Культивирование бактериофагов проводят в реакторах (ферментерах) путем посева производственных штаммов бактерий и фагов, содержащих несколько высокоактивных фаговых рас. После завершения процесса фаголизиса для очистки фаголизатов от фрагментов бактериальных клеток, их метаболитов, в том числе энтеротоксинов и белковых компонентов питательной среды, культуральную суспензию пропускают через микрофильтрационные установки. Полученный фаголизат подвергают ультрафильтрации и концентрированию с последующей стерилизующей фильтрацией. Далее из полученного стерильного концентрата фаголизатов готовят жидкий препарат путем разведения 0,9 % раствором натрия хлорида со стабилизаторами или получают лиофилизированную биомассу, предназначенную для получения таблеток (лиофилизируя концентрат фаголизатов при соответствующих условиях).

В процессе производства бактериофагов оценивают качество исходных, промежуточных и окончательных продуктов на следующих основных этапах и тестах.

1. Подготовка производственных штаммов бактерий – контроль посевных культур бактериальных штаммов-продуцентов:

а) на чистоту;

б) типичность биологических свойств;

в) на отсутствие лизогении.

2.Подготовка бактериофагов – контроль бактериофагов:

а) на содержание фаговых частиц в 1 мл, определяемое методом агаровых слоев по Грациа;

б) на специфическую активность, определяемую титрованием в жидкой питательной среде по методу Аппельмана на посевных бактериальных штаммах;

в) на стабильность лизиса (сохранность полученных результатов лизиса по методу Аппельмана) в течение 48 ч инкубации при температуре (37 ± 1) оС;

г) на стерильность.

В завершающей стадии культивирования в реакторах наступление полного фаголизиса определяют визуально по отсутствию видимого бактериального роста.

По мере завершения очистки фаголизатов методом ультрафильтрации, концентрирования и стерилизующей фильтрации проводится определение следующих показателей: рН, стерильность, специфическая активность по методу Аппельмана, аномальная токсичность.

При производстве комбинированных препаратов готовые монофаги соединяют в реакторах при соблюдении асептических условий.

Для получения жидкого препарата после финальной стадии бактериофаг разливают по флаконам и укупоривают.

Для получения препаратов в таблетках:

а) в концентрированный бактериофаг добавляют стабилизаторы и лиофилизируют. Сухую массу бактериофага контролируют в тестах на специфическую активность и микробиологическую чистоту;

б) после добавления наполнителей проводится таблетирование. В качестве вспомогательных веществ используют пектин, кальция глюконат, глюкозу, тальк, кальция стеарат. Таблетки проверяют на ломкость, отсутствие дефектов (сколов, расслоений), определяют среднюю массу таблеток;

в) после завершения фасовки таблеток готовый продукт контролируют по всем показателям: описание (внешний вид таблеток), подлинность и специфическая активность, средняя масса таблетки, распадаемость, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, аномальная токсичность.

4. Для чего используется «Пиобактериофаг»?

Лечение и профилактика гнойно-воспалительных и кишечных заболеваний, вызванных стафилококками, энтерококками, стрептококками, синегнойной палочкой, клебсиеллами, патогенной кишечной палочкой различных серогрупп, протеем при внутреннем, ректальном и наружном применении:

—заболевания уха, горла, носа, дыхательных путей и легких: воспаления пазух носа, среднего уха, ангина, фарингит, ларингит, трахеит, бронхит, пневмония, плеврит;

—хирургические инфекции: нагноения ран, ожоги, абсцесс, флегмона, фурункулы, карбункулы, гидроаденит, панариции, парапроктит, мастит, бурсит, остеомиелит;