49. Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение

индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле — гибель или характерные изменения.

В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген—антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тестобъектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген—антитело.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свинкам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследуемого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сывороткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Реакция применяется в двух направлениях:

1)для идентификации вирусов;

2)для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.

Компоненты:

1.Исследуемый вирус (при идентификации выделенною вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции).

2.Диагностическая (группе-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус — диагностикум (при серодиагностике).

3.Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.

50. Реакция преципитации. Механизм, компоненты. Способы постановки. Применение. Реакция преципитации (РП) – это иммунная реакция взаимодействия АТ и АГ в присутствии

электролитов, причем АГ находится в растворимом состоянии.

Компоненты: АГ (преципитоген), АТ (известная преципитирующая сыворотка), электролит (физ.раствор).

Механизм: происходит формирова­ние и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Преципитат образуется при смешивании АГ и АТ в эквивалентных количес­твах. Избыток одного из компонентов снижает количество осаждающихся иммунных комплексов.

Способы постановки (с применением)

1.Реакция кольцепреципитации – ставится в пробирках с малым диаметром (диаметр 0,5 см), в которые вносят по 0,2—0,3 мл преципитирующей сыворотки. Затем пастеровской пипеткой медленно наслаивают 0,1—0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно переводят в вертикальное положение. Учет реакции производят через 1—2 мин. В случае положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым антигеном появляется пре­ципитат в виде белого кольца. В контрольных пробирках преци­питат не образуется.

2.Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Проводится в агаровом гелем. В слое геля равномерной толщины на определенном расстоянии вырезают лунки и заполняют их АГ и с сывороткой. После этого АГ и АТ диффундируют в гель, встречаются друг с другом и образуют комплексы, которые преципитируют и становятся видимыми. Используют для определения неизвестных АГ и АТ и для проверки сходства между АГ. Если они идентичны, то линии преципитации сливаются, различны – линии преципитации пересекаются, частично идентичны – формируется шпора.

3.Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини. В расплавленный агаровый гель добавляют АТ и наносят гель равномерным слоем на стекло. В геле вырезают лунки и вносят в них стандартный объем различных по концентрации АГ. Во время инкубации АГ диффундируют в гель и преципитируют, образуя кольца. До тех пор, пока в лунке сохраняется избыток АГ, происходит постепенное увеличение диаметра кольца. Метод используют для определения концентрации АГ и АТ в исследуемом растворе.

4. Иммуноэлектрофорез – предварительно электрофоретически разделяют смесь АГ, затем в канавку вносят преципитирующую антисыворотку. АТ и АГ диффундируют в гель навстречу друг другу, взаимодействуя образуют дугообразные линии.

5. Реакция флоккуляции по Рамону – для определения активности антитоксической сыворотки для анатоксина. Реакцию проводят в пробирках. При соблюдении эквивалентного соотношения анатоксина и антитоксина наблюдается помутнение.

51.Роль врожденного и приобретенного иммунитета в развитии инфекции

Роль врожденного иммунитета:

·Распознавание чужеродных агентов во внутренней среде организма с помощью рецепторов, специализированных на узнавании “образов патогенности*”

·Элиминация опознанных чужеродных агентов из организма путем фагоцитоза и расщепления

*Образы патогенности (паттерны) – объекты, которые объединяют следующие свойства: чужеродность, консервативность и патогенность. Комбинация этих 3-х свойств позволяет иммунной системе распознать с высокой точностью носителя данного паттерна и выявить опасность, задолго до реального проявления. Примеры – пептидогликаны, ЛПС клеточной стенки, тейхоевые к-ты,