2. Ультрацентрифугирование

Основан метод на различных в молекулярных массах белков. Кювету, на поверхность

буферного раствора которой наносят белок, помещают в центрифугу. После 10-12 часов процедуры более крупные молекулы оседают в растворе, происходит расслоение

белковых фракций, тогда дно кюветы прокалывают иглой и по каплям собирают содержимое небольшими порциями в пробирку.

2. Электрофорез белков

Метод основан на том, что при определенном значении рН и ионной силы раствора белки двигаются в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, двигаются к аноду (+), а

положительно заряженные белки - к катоду (-).

Электрофорез проводят на различных носителях: бумаге, крахмальном геле, полиакриламидном геле и т.п.

На носителе с помощью метода получают фракции белков, которые обнаруживают красителем (бромфеноловым синим или амидовым черным).

2. ХроматографияИонообменая:

Основан на разделении белков, различающихся суммарным зарядом при определенных значениях рН и ионной силы раствора. Белки пропускают через хроматографическую колонку, в качестве неподвижной фазы, в которой используются ионообменники –

полимерные органические вещества, содержащие заряженные функциональные группы.

Положительно заряженный ионообменник: ДЭАЭ-целлюлоза (диэтиламинэтилцеллюлоза).

Отрицательно заряженный ионообменник: КМ-целлюлоза (карбоксиметилцеллюлоза)

Выбор ионообменника определяется зарядом выделяемого белка (например, для выделения отрицательно заряженного белка используют анионообменник). После связывания с фазой белки элюируют буферными растворами (например, NaCl) разной концентрации. При увеличении концентрации (или же изменении рН) выделяются отдельные фракции, в одной из них находится белок.

Б) Аффинная (хроматография по сродству):

Основан на избирательном взаимодействиях белков с лигандами, прикрепленными к твердому носителю. При пропускании белка через колонку он прикрепляется к лиганду, остальные же белки выходят с элюатом. Белок, адсорбированный на колонке, можно

выделить раствор со значением рН или измененной ионной силой. Метод отличается высокой избирательностью.

9. Понятие о простых и сложных белках. Гистоны, альбумины, глобулины: характеристика и биологическая роль.

Простые белки - белки, содержащие в своем составе только полипептидные цепи, состоящие из аминокислотных остатков.

Сложные белки - белки, которые помимо полипептидных цепей, имеют небелковую часть (ионы металлов, какие – либо органические молекулы с низкой или высокой молекулярной массой), присоединенную к белку слабыми или ковалентными связями.

Альбумины:

Альбумин – основной белок плазмы крови, связывающий различные гидрофобные вещества. Он может функционировать в качестве белка – переносчика билирубина,

ксенобиотиков, лекарственных веществ. Концентрация альбумина в крови составляет 40 – 50 г/л.

Имеют избыточный отрицательный заряд и кислые свойства. Сильно гидратированные белки, поэтому они осаждаются только при большой концентрации водоотнимающих веществ. Высокая абсорбционная способность (адсорбируют полярные и неполярные молекулы).

Альбумин состоит из 585 аминокислотных остатков, имеет 17 дисульфидных связей и обладает молекулярной массой 69 кД. Молекула альбумина содержит много

дикарбоновых аминокислот, поэтому может удерживать в крови катионы Са2+, Сu2+, Zn2+.

Около 40% альбумина содержится в крови, остальные 60% - в межклеточной жидкости, однако его концентрация в плазме крови выше, чем в межклеточной жидкости, поскольку объем последней превышает объем плазмы в 4 раза.

Благодаря относительно небольшой молекулярной массе и высокой концентрации альбумин обеспечивает до 80% осмотического давления плазмы.

Альбумин – важнейший транспортный белок. Он транспортирует свободные жирные кислоты, неконъюгированный билирубин, Ca2+, Cu2+, триптофан, тироксин,

трийодтиронин.

Также многие лекарства (аспирин, дикумарол, сульфаниламиды) связываются в крови с альбумином.

При гипоальбуминемии осмотическое давление плазмы крови снижается. Это приводит в нарушению равновесия в распределении внеклеточной жидкости между сосудистым

руслом и межклеточным пространством (проявляется как отек).

Гипоальбуминемия развивается в результате снижения синтеза альбуминов при заболеваниях печени (цирроз), при повышении проницаемости капилляров, при потерях белка из-за обширных ожогов или катаболических состояний (тяжелый сепсис, злокачественные новообразования), при нефротическом синдроме, голодании.

Нарушения кровообращения, характеризующиеся замедлением кровотока, приводят в увеличению поступления альбумина в межклеточное пространство и появлению отеков. Увеличение проницаемости капилляров сопровождается уменьшением объема крови, падением АД и проявляется как шок.

К фракции альбуминов относятся следующие белки:

1. Транстиретин (преальбумин). Имеет тетрамерную структуру и способен присоединять в одном центре связывания ретинолсвязывающий белок, а в другом - до 2 молекул тироксина и трийодтиронина.